局部用药的毒性研究

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,局部用药的毒性研究,局部用药的毒性试验是根据局部用药部,位的解剖和生理特点设计的。,涂剂、擦剂,皮肤用药,膏剂、凝胶剂,其他透皮吸收制剂,常用局部用药制剂,滴眼剂、滴鼻剂,喷雾剂、肌内注射,直肠和阴道制剂,第一节 皮肤用药（制剂）的毒性研究,一、皮肤组织结构,表皮,真皮,皮下组织,皮肤覆盖全身。,表皮较薄，厚为。,角质层,表皮,颗粒层,生发层,真皮依附于皮下组织，厚约,2mm,。,胶原,真皮,弹性硬蛋白,纤维母细胞,二、化学物质对皮肤毒性作用的类型,皮肤具有一定的保护作用，药物及其他,化学物质对皮肤产生的损害损害主要为：,一）皮肤原发性刺激,原发性刺激,-,药物直接作用于皮肤引,起的病理性反应。,红斑、水肿,原发性刺激的表现 水疱疮,溃疡,强碱,脂溶性溶剂,原发性刺激机理,镉酸盐,银、汞、砷等金属盐,特征,有明确的毒理学量,-,效关系。,首次接触即可产生某种特征。,二）皮肤致敏,皮肤致敏为变态反应，包括药物致敏和,光敏反应。,作用机制,药物与蛋白以共价键结合，具用免疫原性。,药物在光的作用下，形成半抗原性物质。,特征,没有明确的毒理学量,-,效关系。,再次接触该药物才能激发特定症状。,三）皮肤致癌,有机大分子化合物,-,多环芳烃类,金属盐,-,无机砷盐,三、皮肤用药（制剂）毒性研究,一）皮肤用药急性毒性试验,1,、试验目的,-,观察完整与非完整皮肤短期内,接触受试物所产生的毒性反应。,2,、实验材料,1,）动物,-,家兔、豚鼠、大鼠,2,）受试药物,-,膏剂、液体或粉末,3,、试验方法,1,）剂量选择,-3,个剂量组,2,）给受试物方法和观察,-,涂敷固定,4,、结果判断,二）皮肤用药长期毒性试验,1,、试验目的,-,观察动物皮肤长期接触受试,物，对机体产生的异常毒性反应。,2,、实验材料,1,）动物,-,家兔、豚鼠或大鼠,2,）受试药物,-,膏剂、液体几粉末,3,、试验方法,1,）剂量选择,-3,个剂量计对照组,2,）给受试物方法及时间,-,涂敷固定、每日,一次至少,6,小时，按临床用药时间的,3,倍时间。,3,）检测项目,-,每日观察皮肤临床症状、,皮肤病力学检查；一般症状、血液,学、血液生化指标及病理学检查。,4,、结果判断,进行统计学计算，并应写明安全剂,量、中毒剂量、中毒的靶器官以及中毒,的可逆性。,三）皮肤刺激性试验,1,、试验目的,-,观察动物皮肤接触受试物后所,产生的刺激反应情况。,2,、实验材料,1,）动物,-,家兔、豚鼠,2,）受试药物,-,膏剂、液体或粉末,3,、试验方法,-1g,或,1ml,涂敷固定、于去除受,试物后,1,、,24,、,48,和,72,小时观察涂敷部位,红肿、红斑以及上述变化的恢复情况和,时间。,皮肤刺激反应评分,反应 分值 反应 分值,红斑 水肿,无红斑,0,无水肿,0,略见红斑,1,稍有水肿,1,中度红斑,2,明显可见,(,边缘高出皮肤,)2,严重红斑,3,皮肤隆起水肿轮廓清晰,3,紫色红斑并有焦痂形成,4,水中隆起,1mm 4,总分,8,4,、结果判断与评价,强 度 平均分值,无刺激 ,0.5(0-0.5),轻度刺激 ,2.0(0.5-2.0),中度刺激 ,4.0(0.5-4.0),严重刺激 ,6.0(0.5-6.0),极严重刺激 ,6.0(6.0-8.0),四）皮肤过敏试验,1,、试验目的,-,通过动物皮肤重复接触受试物，,观察机体免疫系统反映在皮肤上的表现。,2,、实验材料,1,）动物,-,豚鼠,2,）受试药物,-,膏剂、液体不稀释直接涂敷,3,）阳性致敏物,-2,4-,而硝基氯代苯,1%-,致敏浓度,0.1%-,激发浓度,3,、试验方法,1,）试验分组,随机分成三组，给药组、赋形剂组、阳,性对照组,2,）致敏接触,0.1-0.2ml(g),涂于脱毛区，接触,6,小时，,第七天和,14,天亦同样方法重复。,3,）激发接触,末次给药后第,14,天，激发给药，,6,、,24,、,48,和,72,小时观察皮肤过敏情况。,4,、结果判断与评价,皮肤过敏反应评分标准,刺激反应 程度 分值 刺激反应 程度 分值,红斑形成 水肿形成,无红斑,0,无水肿,0,轻度红斑,1,轻度水肿,1,中度红斑,2,中度水肿,2,重度红斑,3,重度水肿,3,水肿性红斑,4,最高总分值,7,致敏率分类,过敏反应强度 致敏率,%,弱致敏性,0-10,轻度致敏性,10-30,中度致敏性,30-60,高度致敏性,60-80,极度致敏性,80-100,红斑形成总分,+,水肿形成总分,反应平均值,=,合计动物总数,皮肤涂抹致癌试验,1,、试验目的,2,、实验材料,1,）动物,-,敏感品系鼠,2,）受试物,3,）阳性对照药,-,苯比、巴豆油,3,、试验方法,1,）试验分组,-,阴性、阳性、实验组,2,）给药量,-,每周,1-2,次,3,）给药方法,4,）给药后观察,4,、结果判断与评价,1,）皮肤损伤程度,2,）组织病理学检查,3,）皮肤肿瘤发生率计发生率与时间的关系，,评定皮肤致癌的效应。,五）皮肤吸收试验,1,、整体皮肤吸收试验,化合物经皮渗透的量同皮肤微灌流量直接相关，通过测量与皮肤灌流量相关的电压，测算出化学经皮吸收速率。,1,）,LDV,法,用,643.8nm,氦,-,氖激光，照射血管中流动中的红细胞，测量用药前后变化，测定出皮肤吸收速度。,2,）,PPG,法,LED,射出的,800-940nm,红外线照射，收集反射光转变成电压波谱，通过电压波谱变化，计算皮肤吸收量的大小。,2,、离体皮肤吸收试验,1,）静态渗透装置,上室防药剂，下室接受液，下室中间方皮肤并密封，药剂放于皮肤之上，每隔一定时间后，测定接受液，计算皮肤渗透率。,2,）流动渗透装置,上述方法的改进，接受液为血浆或白蛋白，以,5ml/,小时的速度灌流，测定不同时间灌流液的药量。以次测定皮肤的透过率。,六）皮肤光敏试验,1,、试验目的,-,观察受试物接触皮肤后遇光照,是否有光敏反应,2,、试验方法,1,）光敏反应试验,评价标准,2,）光毒性试验,评价标准,第二节 眼睛用药刺激性试验,眼睛的结构,角膜结膜炎,炎症 角膜表面水肿,上皮脱落,刺激作用 结膜充血、水肿,灼痛、流泪、畏光,慢性结膜炎、睑腺炎、分泌物增多,试验目的,角膜浑浊,刺激性试验 试验方法,虹膜,结果与评价,结膜,水肿,分泌物,一）试验目的,-,观察动物眼睛接触受试物所产,生的刺激反应,二）试验方法,家兔，原液（原膏）加入眼睛肿,0.1ml,(0.1g),，闭合,5-10,分钟。,6,、,24,、,48,和,72,小时至,7,天眼刺激情况。,三）结果与评价,眼刺激反应评分,眼刺激反应 分值,角膜浑浊,0-4,虹膜,0-2,结膜,0-3,水肿,0-4,分泌物,0-3,总分,16,眼刺激性评价标准,刺激程度 积分,无刺激性,0-3,轻度刺激性,4-8,中度刺激性,9-12,重度刺激性,13-16,第三节 肌内注射用药局部刺激性试验,试验目的,-,肌内注射后药物对肌肉的刺激性反,应情况。,试验方法,家兔,6,只，一侧骨四头肌注射供试物，另,一侧注射生理盐水,1-2ml,作为对照，,48,小,时处死动物，取骨四头肌纵向剖开，肉,眼观察，观察注射部位刺激情况，必要,时作组织病理学检查。,家兔股四头肌肌肉组织,结果与评价,肌内注射刺激反应评分标准,反应级数 刺激反应,0,给药部位无明显反应,1,给药部位轻度充血，直径,0.5cm,以下,2,给药部位中度充血，直径,1.0cm,以下,3,给药部位中度充血，红肿，肌肉有变性,4,出现肌肉褐色变性，坏死,0.5cm,以下,5,肌肉严重变性，出现大片坏死,超过,2,认为不符合规定，不可进行肌内注射,第四节 静脉给药局部刺激性试验,见第十七章：,全身用药毒性试验中,-,血管刺激性试验,第五节 滴鼻剂和吸入剂的毒性试验,一、滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验,1,、试验目的,观察受试物一次滴入或吸入,后对动物产生的毒性反应或死亡情况。,2,、试验方法,3,个剂量组，组距,0.65-0.85,滴入或吸入,4,小时后即可以及,7-14,天观察动物。,3,、结果评价,二、滴鼻剂和吸入剂刺激性试验,1,、试验目的,-,观察受试物一次滴入或吸入,后对动物产生的刺激反应。,2,、试验方法,将受试物滴入或喷雾与动物，,24,小时后处死动物，观察油污充血、红肿等。,3,、结果评价,第六节 应用于直肠、阴道制剂的毒性试验,一、,直肠、阴道用药急性毒性试验,1,、试验目的,-,受试物对动物直肠或阴道产,生的毒性反应或死亡情况。,2,、试验方法,栓剂、膏剂或液体等，将受试物轻置入直肠或阴道内。至少接触,4,小时，观察纪珂以及,7-14,天的情况。,3,、结果评价,二、直肠、阴道用药长期毒性试验,1,、试验目的,2,、试验方法,3,、结果评价,三、直肠、阴道用药刺激性试验,1,、试验目的,2,、试验方法,3,、结果评价,四、有关问题,1,、给药量与给药浓度,2,、给药途径,3,、多次给药问题,4,、对照组的建立,局部用药的毒性研究,第一节 皮肤用药的毒性研究,一、皮肤组织结果,二、化学物质对皮肤毒性作,用的类型,1,、皮肤原发性刺激,2,、皮肤致敏,3,、皮肤致癌,三、皮肤用药毒性试验,1,、皮肤用药急性毒性试验,2,、皮肤用药长期毒性试验,3,、皮肤刺激性试验,4,、皮肤过敏试验,皮肤涂抹致癌试验,5,、皮肤吸收试验,6,、皮肤光敏试验,第二节 眼睛用药刺激性试验,第三节 肌内注射用药局部刺,激性试验,第四节 静脉给药局部刺激性,第五节 滴鼻剂和吸入剂的毒,性试验,第六节 应用于直肠、阴道制,剂的毒性试验,