基因工程的基本工具

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,基因工程的基本工具,基因工程的概念,基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在_分子水平上进行设计和施工的，又叫做_,DNA,DNA重组技术。,（一）基因工程的基本工具,1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）,2.“分子缝合针”DNA连接酶,3.“分子运输车”载体,1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）,（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的_断开，因此具有_。,（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：,_,磷酸二酯键,专一性,黏性末端和平末端。,2.“分子缝合针”DNA连接酶,(1)两种DNA连接酶（EcoliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：,相同点：都缝合_。,区别：EcoliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的_末端之间的磷酸二酯键连接起来；,而T4DNA连接酶能缝合_末端，但连接平末端的之间的效率较_。,磷酸二酯键,黏性,低,黏性和平,3.“分子运输车”载体,（1）载体具备的条件：,能在受体细胞中复制并,稳定保存,具有一至多个限制酶切点，,供外源DNA片段插入。,具有标记基因，,供重组DNA的鉴定和选择。,（2）最常用的载体是_,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链_分子。,（3）其它载体：_,质粒,环状DNA,噬菌体的衍生物、动植物病毒,(二)基因工程的基本操作程序,第一步：目的基因的获取,第二步：基因表达载体的构建,第三步：将目的基因导入受体细胞,第四步：目的基因的检测和鉴定,第一步：目的基因的获取,1.目的基因是指：_的结构基因,原核基因采取_获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有_法和_法。,编码蛋白质,直接分离,反转录,化学合成,概念：PCR全称为_，是一项,在生物_复制_的核酸合成技术,条件：_ 前提条件,_、_、,_,_,.,原理：_,方式：以_方式扩增，即_（n为扩增循,环的次数）,结果：,聚合酶链式反应,体外,特定DNA片段,DNA复制,一段已知目的基因的核苷酸序列,四种脱氧核苷酸,一对引物,热稳定DNA聚合酶（Taq酶）,指数,2,n,使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增,(二)利用PCR技术扩增目的基因,第二步：基因表达载体的构建,组成：复制原点+启动子+目的基因+终止子+标记基因,