实验三离体蛙心灌流

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验三,电刺激和化学因素对心脏活动的影响,一、实验目的,1.,学习离体蛙心灌流方法。,2.,观察在心脏活动周期内给予刺激所引起的期前收缩和代偿间歇。,3.,观察,Na,+,、,K,+,、,Ca,2+,、,Adr,（肾上腺素）、,Ach,（乙酰胆碱）对心脏活动的影响，理解内环境理化因素相对恒定对维持心脏正常活动的重要性。,1,、心肌的生理特性：,2,、两栖类动物的心起搏点：,3,、心肌兴奋性的周期性变化：,二、实验原理,自律性、兴奋性、传导性、收缩性。,静脉窦。,有效不应期；,相对不应期；,超常期。,有效不应期,=,收缩期,+,舒张早期,期前收缩：,给予心室肌一次有效刺激，产生一次正常节律以外的收缩反应，该收缩先于下一次正常窦房结兴奋引起的收缩。,1,、心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（离子浓度、,pH,等），内环境的变化直接影响到心脏的正常节律性活动。,2,、因此可用人工灌流的方法，观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。,无,Ca,2+,任氏液；,任氏液（,1% KCl,；,1% CaCl,2,；,2% CaCl,2,),。,二、实验原理,1,、神经调节：在体心脏受交感神经和迷走神经的双重支配。,交感神经,末梢,释放,NE,（去甲肾上腺素），,使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率,加快，即产生,正性变时、变力、变传导作用,；,迷走神经,末梢,释放,Ach,（乙酰胆碱），,使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率,减慢，即产生,负,性变时、变力、变传导作用,。,2,、体液调节,0.01% Adr,（肾上腺素）,0.01%,Ach,（乙酰胆碱,）,心脏活动调节,三、实验器材及药品,实验对象：蟾蜍,实验药品：,任氏液,无,Ca,任氏液,1 % KCl,1 % CaCl,2,2 % CaCl,2,0.01% Ach,0.01% Adr,实验器材：,张力换能器,蛙类手术器械一套,铁支架,双凹夹,蛙心套管,蛙心夹,刺激电极,滴管,烧杯,四、手术操作,1.,取,蟾蜍，破坏脑和脊髓、暴露心脏。,1,2,3,4,（腹面）,（背面）,（两栖类动物心脏解剖结构示意图）,2.,蛙心插管（操作难点）,1,2,3,4,蛙心插管步骤小结：,1、,在主动脉下穿线，备结扎用；,2、,在主动脉根部剪一斜切口；,3、,插管装任氏液，食指堵住上口；,5、,将插管转向插入心室（插入后有血液进入插管），将丝线结扎固定在蛙心套管上。,4、,将插管顺着主动脉方向插入动脉圆锥；,（腹面）,3.,游离蛙心,1、,轻提起蛙心插管，剪断动静脉,(,勿损伤静脉窦,），将心脏离体，观察插管内液面高度是否随着心脏的收缩和舒张而变化？,2、,用滴管吸净插管内余血，加入新鲜任氏液，反复换洗数次，直至液体完全澄清。,3、,始终,保持灌流液面高度恒定（,1-2cm,）,。,五、仪器连接,1,2,3,4,将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉，再将蛙心夹上的系线与张力传感器相连。,不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液,勿使灌流液滴到传感器上,仪器连接注意事项,六、软件操作,1.,描记,正常蛙心收缩曲线,曲线,疏密,：代表心跳频率。,曲线的,规律性,：代表心室的节律性。,曲线的,顶点,水平：代表心室收缩的程度。,曲线的,基线,：代表心室舒张的程度。,七、实验项目观察与记录,2.,期前收缩和,代偿间歇,3.,改变灌流液成分,对心脏活动的影响,对心脏活动的影响,（心率、收缩力度、基线水平）,无钙任氏液；,任氏液内分别添加,:,(,1% KCl,；,1% CaCl,2,；,0.01% Ach,；,0.01% Adr,；,2% CaCl,2,；,）,（,1,）,吸出插管内全部任氏液，,换入无钙任氏液，观察心缩曲线变化，待效应明显后，吸出灌流液，用新鲜任氏液换洗,3,次，直至心缩曲线恢复正常。,（,2,）加,1-2,滴,1% KCl,于新换入的任氏液中，观察心缩曲线的变化。待出现效应后，用新鲜任氏液换洗,3,次至曲线恢复正常。,（,3,）加入,1-2,滴,1% CaCl,2,于新换入的任氏液中，观察心缩曲线的变化。待出现效应后，用新鲜任氏液换洗,3,次至曲线恢复正常。,（,4,）加入,1-2,滴,0.01% Adr,于任氏液中，待效应出现后，用任氏液换洗至曲线恢复正常。,（,5,）加入,1-2,滴,0.01%Ach,于任氏液中，待效应出现,后，用任氏液换洗至曲线恢复正常。,（,6,）钙僵：,加入,4-5,滴,% CaCl,2,于新换入的任氏液中，观察心缩曲线的变化。,八、注意事项,1.,制备标本时，应按指导试探着插管，避免损伤心脏,(,包括静脉窦,),。,2.,每次换液时，插管内的液面均应保持恒定高度。,3.,各种试剂的滴管不要混淆,以免影响实验结果。,4.,药物作用不明显时，可适量增加。每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液体吸出。,5.,滴加任氏液于心脏表面使之湿润。,6.,固定换能器时应稍向下倾斜，以免自心脏滴下的液体进入换能器内造成短路。,观看实验录像,九、讨论分析,分析各观察结果的原因。,心肌有效不应期长的生理意义。,心率过慢，期前收缩后是否有代偿间歇？,实验中套管内液面为什么要保持相同高度？,部分结果分析,无钙任氏液，心跳减弱,心肌收缩活动有,Ca2+,触发，心肌肌浆网不发达，因此其收缩强弱依赖于细胞外,Ca2+,浓度,灌流液中缺乏,Ca2+,，心肌细胞内,Ca2+,大大减少，心肌兴奋,-,收缩藕联过程减弱，心肌收缩活动减弱,高,K+,任氏液，心跳明显减弱甚至停跳于舒张状态,部分结果分析,K+,与,Ca2+,有竞争性拮抗作用。细胞外,K+,浓度增加可抑制细胞膜对,Ca2+,的转运，从而使进入胞内的,Ca2+,减少，心肌兴奋,-,收缩藕联过程减弱，心缩力降低甚至停于舒张状态。,高,Ca2+,，心缩加强，舒张不完全，甚至停于收缩状态,部分结果分析,心肌舒缩活动取决于胞内,Ca2+,浓度，当,Ca2+,升高到,0.01mM,，肌钙蛋白可结合足够,Ca2+,发生构型改变而触发心肌收缩；当胞内,Ca2+,浓度降到,0.0001mM,时则可解离发生心肌舒张。高,Ca2+,使肌钙蛋白与,Ca2+,不能解离而造成心肌持续收缩。,部分结果分析,肾上腺素，心脏正性作用并且舒张完全,1.,肾上腺素与心肌细胞膜,受体结合，使心肌细胞膜上腺苷酸环化酶活化作用于,ATP,产生,cAMP,cAMP,的作用：,（,1,）激活,Ca2+,内流；,（,2,）肌浆网释放,Ca2+,因此心肌收缩加强,2.,肾上腺素使,Ca2+,泵活动增强，肌浆网摄取,Ca2+,向细胞外转运，胞内,Ca2+,减少，心肌舒张过程加快，舒张完全,乙酰胆碱，心缩减弱，心率减慢，兴奋传导速度变慢,部分结果分析,乙酰胆碱与心肌,M,受体结合：,1. K+,通透性增加：,（,1,）,动作电位,2,，,3,期缩短，,Ca2+,内流减少心缩力减弱；,（,2,）最大复极电位负值增加，离阈电位水平加大，心率减慢；,（,3,）舒张期自动去极化速度减慢，心率减慢,2.,抑制,Ca2+,通道，使房室交界细胞动作电位幅度降低，兴奋传导速度减慢，心率减慢,心肌的生理功能依靠内环境的稳态,;,各种离子对心肌收缩力的影响主要依赖,Ca,2+,来实现。,【,结论,】,