实验六氨基酸的纸层析法

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验六,氨基酸的纸层析法,一、原理,以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。,将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。,在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、,PH,值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（,Rf,值）,Rf,=,原点到层析点中心的距离,/,原点到溶剂前沿的距离,用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转,90,度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。,本试验主要介绍的是单向层析法。其中,混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。,二、实验仪器,1,、,新华滤纸,2,、,层析缸,3,、,细线,4,、,点样管,5,、,橡皮筋,6,、,电吹风,7,、,喷雾器,三、实验试剂,1,、,混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸）,2,、展层剂：正丁醇：,12%,氨水：,95%,乙醇：蒸馏水,=13,：,3,：,3,：,1,（,v:v,）,3,、,0.5%,茚三酮,无水丙酮溶液：,0.5g,茚三酮溶于,100ml,无水丙酮，贮于棕色瓶中,四、试验步骤,1,、取滤纸剪成,20,10,厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端,23cm,处用铅笔画一横线，中间画一圆点,（原点）,。,2,、取毛细管一支,(,回收,),，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不宜超过,5mm,每点一次用吹风机吹干，点,23,次为佳。,3,、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端,12cm,处时，停止展层（大约,23,小时）。,4,、取出滤纸，用铅笔记下溶剂前沿，然后用热风吹干（或烘箱,60,）烘干。,5,、均匀喷上茚三酮,无水丙酮液，,注意使溶液不倒流，不间断。,6,、用吹风机吹干，观察层析点，确定其几何中心。,7,、量取数值，计算各自的,Rf,值，与表中标准氨基酸,Rf,值比较，确定样品氨基酸种类。,（书上图谱横着看）,