实验五福医大计数

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验五 血小板计数,（临检指导,P48,）,目的,掌握普通光学显微镜直接,血小板,计数,法。,1.,概述,血小板是由骨髓中成熟巨核细胞的胞质分割而生成。其生成受,血小板生成素,（,TPO,）的调节。,正常静息状态下，血小板为双面微凸的圆盘形，,直径,2,4m,、平均体积,7.2fl,的非细胞结构成分。,染色后镜下可见血小板的,胞质呈淡蓝色,，内含,较多的,紫红色嗜天青颗粒。,血涂片上，为红细胞数的,1/301/20,，,通常每个,油镜,视野可见,735,个，,分散或,35,成群分布。,2.,光学显微镜直接计数法,（,1,）,原理,血液,(20l),经稀释液,(0.38ml),按一定比例稀释和破坏红细胞后，充入血细胞计数池内，在显微镜下计数一定范围内的血小板数，经换算求出每升血液中的血小板数量。,由于血小板易黏附、聚集以致破坏，,优质的血小板稀释液应具备的条件是：,（,1,）有效地阻止凝血。,（,2,）很快地固定血小板，防止血小板聚集和变形。,（,3,）溶血稀释液要求红细胞破坏完全。,（,4,）组成简单、容易保存、不长细菌。,根据所采用的稀释液不同而又分为,破坏红细胞稀释法（溶血法）：,草酸铵溶血法：,对红细胞破坏力强，血小板形态清楚。,为,首选常规,计数方法。,复方尿素溶血法：,尿素可溶解红细胞、甲醛可固定血小,板和防腐，稀释后血小板胀大易辨认，,尿素容易分解，试剂容易失效。尿素,不能完全破坏红细胞。,高铁氰化钾溶血法：,试剂稳定易于长期保存但不能完全,破坏红细胞。,不破坏红细胞稀释法：,复方碘稀释液。红细胞未破坏及试剂易细菌生长，干扰计数，已被淘汰,。,实验五 血小板计数,（,2,）操作步骤,1,）吸取稀释液：,准确吸取,10g/L,草酸铵溶血剂,0.38ml,于小,试管内。,2,）采血：,准确采血,20l,加入上述试管，立即充分混匀。,3,）静置：,待完全溶血后再混匀,1min,。,4,）充池：,混匀血小板悬液，并取,1,滴充入血细胞计数池，,静置,10min,。,5,）计数：,用高倍镜计数,中央大方格内的,中央及四角共,5,个,中方格内,的 血小板数量。,实验五 血小板计数,（,3,）计算,血小板数,/L=N5102010,6,=N10,9,/L,参考值：,（,100300,）,10,9,/L,实验五 血小板计数,（,4,）注意事项,1,）稀释液必须符合优质的血小板稀释液，,因此稀释,液必须新鲜、洁净，无杂物和细菌污染；定期检,查稀释液的质量，实验前应先做稀释液空白计,数，符合仪器使用说明方可使用。,2,）器材及操作必须标准化和规范化,所用器材必须校准、洁净、干燥。,采血、充液、计数均应规范，避免血小板激活或破坏。,血,小板悬液,充入计数池后必须静置,15min,再计数，并在采,血后,1h,内完成计数。时间过短或过长则可导致血小板未完,全下沉或失去光泽，使计数结果偏低。,充液前必须轻轻摇动血小板悬液,2min,或,200,次以上，但用力不宜过大，以免造成血小板破坏或产生气泡，引起计数误差。,镜下观察时的光线要适中，并注意与细胞碎片、灰尘、微生物等鉴别。,3,）及时核准血小板计数结果,由经验丰富的检验人员进行。,常用的方法有：,用同,1,份血标本制备良好的血涂片，观察血小板数量、形,态和分布情况，进行核对。,用血小板计数的参考方法核对计数结果。,每份标本最好做,2,次计数，若,2,次计数误差小于,10%,，取,其均值报告；若计数误差大于,10%,，应做第,3,次计数，取,2,次相近结果的均值报告。,4,）排除非技术因素的影响,某些病理情况可干扰计数，出现血小板假性减少或增多。,血小板聚集或凝集、异常蛋白血症、巨大血小板、卫,星现象、高脂血症导致血小板假性减少。,HbH,包涵体病人的红细胞碎片、慢性淋巴细胞性白血,病病人的淋巴细胞核和细胞质碎片、小红细胞等可被,误认为血小板，导致血小板假性增多。,5,）标本采集,最好清晨采血，采集过程中应避免反复握拳、拍打采血部位、扎止血带的时间过长（,1min,），以免血小板激活而影响计数结果。,采血后立即进行血小板检测。,（,5,）方法学评价,1,）普通光学显微镜直接计数法：,以,草酸铵溶稀释液法,为常规方法和参考方法。,2,）相差显微镜直接计数法：,此法计数的准确性高，血小板易于识别，并可于照相,后核对计数结果，是计数血小板的参考方法。但由于,所用仪器昂贵，临床上较少选用。,3,）血细胞分析仪计数法：,简便、快速、重复性好，可同时测定血小板、,MPV,及,PDW,等多个指标的特点，已广泛用于临床。但由于电阻抗法不能完全区分血小板与其他类似大小的物质，致使计数结果的误差较大，其计数结果有时仍需要显微镜直接计数法进行复核。,4,）流式细胞仪：特异、准确、但需特殊仪器和试剂。,