细胞工程120321

疑 难 解 析生 物 组 李 庆 伟 PCR技 术 多 聚 酶 链 式 反 应 ， 一 种 体 外 快 速 扩 增 特 定基 因 或 DNA序 列 的 方 法 。 原 理 ： DNA双 链 复 制 ： 模 板 DNA、 脱 氧 核 苷 酸 、 解 旋 酶 、 DNA聚 合 酶 ATP供 能DNA复 制 需 要 引 物 ： 模 板 DNA、 脱 氧 核 苷 酸 、 解 旋 酶 、 DNA聚 合 酶 ATP供 能DNA复 制 需 要 引 物DNA复 制 (子 链 延 伸 )的 方 向 ： 从 5 3 PCR反 应 体 系 模 板 目 的 基 因 引 物 人 工 设 计 并 合 成 的 单 链 DNA 酶 热 稳 定 DNA聚 合 酶 （ Taq酶 ） 原 料 dNTP 缓 冲 液 pH、 Mg2+ PCR循 环 过 程 预 变 性 （ 90 -95 ） 2min 变 性 （ 90 -95 ） 30s 退 火 （ 55 -60 ） 15s 延 伸 （ 70 -75 ） 1min 反 应 30个 循 环 目 的 基 因2n-2n 标 记 基 因or 探 针 检 测 分 子 杂 交 探 针 被 放 射 性 同 位 素 标 记 目 的 基 因 片 段 基 因 组 DNA 适 当 的 限 制 酶 切 割 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 转 膜 变 性 杂 交 洗 膜 检 测 分 子 杂 交 探 针 目 的 基 因 的 一 段 基 因 组 DNA 适 当 的 限 制 酶 切 割 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 转 膜 变 性 杂 交 洗 膜 检 测 转 膜 变 性 杂 交 洗 膜 检 测 重 组 质 粒 是 不 是 只 有 整 合 到 染色 体 DNA上 才 能 完 成 表 达 ？ 离 体 的 植 物器 官 、 组 织或 细 胞 脱 分 化 愈 伤 组 织 再 分 化芽 、 根 发 育 植 物 体胚 状 体丛 芽 与 胚 状 体 愈 伤 组 织 的 颜 色 关 于 愈 伤 组 织 再 分 化 ，先 “ 生 芽 ” 再 “ 生 根 ” 关 于 动 物 细 胞 的 传 代 培 养 单 克 隆 抗 体 的 两 次 筛 选一 、 筛 选 杂 交 瘤 细 胞 HAT培 养 液核 苷 酸 合 成 途 径从 头 合 成 D途 径补 救 合 成 S途 径 筛 选 原 理 B淋 巴 细 胞 D途 径 被 阻 断 ， S途 径 正 常 无 体 外 增 殖 的 能 力未 融 合 的 B淋 巴 细 胞 和 B-B融 合 的 细 胞 被 淘汰 。 骨 髓 瘤 细 胞 D途 径 被 阻 断 ， 自 身 缺 陷 型 ， 无 S途 径未 融 合 的 瘤 细 胞 和 瘤 -瘤 融 合 的 细 胞 被 淘 汰u只 有 杂 交 瘤 细 胞 才 能 存 活 单 克 隆 抗 体 的 两 次 筛 选二 、 筛 选 产 生 特 异 性 抗 体 的 杂 交 瘤 细 胞 “有 限 稀 释 法 ” 抗 体 检 测