《革兰阴性球菌》PPT课件

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,革兰阴性球菌,“伯杰鉴定细菌学手册”第9版将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科,概述,奈瑟菌属对人致病,的,有,脑膜炎奈瑟菌,(,N.gonorrhoeae,)和,淋病奈瑟菌,（,N.,meningitidis,），其余均为人类呼吸道正常菌群,莫拉菌属中的,卡他莫拉菌,（,M.catarrhalis,）,是致病菌,目前对卡他莫拉菌的归属尚未定论,一、分类,淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病,寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌,解乳糖奈瑟菌,、,干燥奈瑟菌,、,微黄奈瑟菌,、,粘,液奈瑟菌,、,浅黄奈瑟菌,、,灰色奈瑟菌,、,延长奈,瑟菌,、,去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌,第一节 奈瑟菌属,二、脑膜炎奈瑟菌临床意义,寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过,呼吸道,分泌,物或空气微滴核而传播。,流行性脑脊髓膜炎,冬末春初，多为学龄儿童、青少年,感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，形成化脓性脑膜炎,可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激,症阳性、甚至休克和,DIC,等；菌血症和细菌的损,伤作用使约半数患者出现,皮下瘀斑,尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染，急性发病，发病时机体内缺乏杀菌抗体。,主要致病物质是,内毒素,：可引起发热、微循环障碍，严重者可致内毒素休克、血栓、DIC等,依据荚膜多糖的抗原成分可分为：,A、B、C、,等13个血清群，我国,A,群,占95.8%，其余为,B、C,等群。,淋病奈瑟菌临床意义,淋病的病原菌,主要通过,性接触,直接感染,在分娩时通过,产道感染,新生儿,临床表现为：,单纯性,淋病,盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病,淋菌性结膜炎,播散性淋病,致病物质包括,菌毛,、,外膜蛋白,、蛋白水解酶、,脂多,糖,和铁调节蛋白,奈瑟菌形态,革兰阴性双球菌,直径0.61.5,m,肾形或咖啡豆样，凹面相对,某些菌种形成荚膜,三、生物学特性,2培养特性,营养要求高,专性需氧，初次分离需5%7%,CO,2,和高湿度,低于30不生长,孵育24,h,后在培养基上,自溶,脑膜炎奈瑟菌,血琼脂平板或巧克力琼脂平板,：光滑、湿润、,透明或半透明、直径12,mm,的不溶血、圆形、,露珠状菌落,卵黄琼脂平板：无色、光滑、湿润奶油状菌落,淋病奈瑟菌,巧克力或,MTM,选择性培养基（万古霉素）,:,菌落圆形，光滑湿润、凸起、半透明,自溶,淋病奈瑟菌在巧克力琼脂平板上的菌落特征,3生化特性,氧化酶阳性，触酶阳性,4抵抗力,很弱,四,敏感,：,热、寒冷、干燥、消毒剂,对青霉素敏感,近年来由质粒介导的,内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多,四、微生物检验,（一）脑膜炎奈瑟菌,1,、标本采集,脑脊液,、关节液、,血液、瘀点穿刺液,等,采集后立即送检,标本运送时需要,35保温,血平板床边接种后置35孵育,血标本接种在血液培养瓶中置35孵育,2,、标本直接检查,直接涂片检查,脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片,皮肤瘀点渗出液涂片,见,白细胞内外革兰阴性双球菌,，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断,抗原检查,胶乳凝集试验和其他凝集试验,包括,A、C、Y、W125,血清型的多价抗体和血清型,B,抗体,检测结果结合涂片和培养结果,抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断,3,、分离培养鉴定,脑脊液,巧克力琼脂或羊血琼脂平板,咽拭子或鼻咽拭子,选择性培养基上如改良的,Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、New York City(NCY),等培养基,血标本,经增菌培养基增菌后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板,置5%7%,CO,2,35,孵育，每隔24,h,观察平板,鉴定,初步确定为,奈瑟菌属,直径12,mm，,灰褐色、光滑、半透明、稍扁的,菌落,涂片,革兰阴性双球菌,氧化酶触酶阳性,进一步：,葡萄糖和麦芽糖阳性,、其他糖,类阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌,用,分型血清确定,血清型别,平板上未发现菌落，继续观察72,h,后无菌生长可报,告为阴性,（二）淋病奈瑟菌,检验程序,1,标本采集,阴道和宫颈分泌物,用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1,cm,处,停留1015秒时间，蘸取,尿道分泌物,弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本,尿液,直肠肛拭标本,废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物,新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物,2,标本直接检查,革兰染色镜检,男性尿道分泌物标本中可见,中性多形核细胞内、外较多革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断,女性,宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、外大量革兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居，故涂片所见结果,必须由培养结果证实方可报告,新生儿结膜分泌物,可见胞内、外大量,革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎,3,分离培养与鉴定,选择培养基如,MTM，Martin-Lewis（ML），,或,NYC,5%,CO,2,孵育,每隔24,h,观察平板,（1）形态和生化学鉴定,可疑菌落,直径0.51,mm，,灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落,确认,菌落涂片，见革兰阴性双球菌,氧化酶和触酶试验阳性,葡萄糖阳性，其它糖类阴性,培养需观察72,h,后无菌生长可报告为阴性。,（2）免疫学鉴定,直接荧光染色,凝集试验或免疫渗滤技术,（3）分子生物学鉴定,检测靶片段的基因,隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌,胞嘧啶,DNA,甲基转移酶基因、透明蛋白(,opa),基,因、菌毛,DNA,探针、,rRNA,基因探针和,por,A,假,基因。,基因探针杂交、核酸扩增,药物敏感性试验,奈瑟菌药敏试验选择药物为青霉素、头孢菌素及环丙沙星等。治疗首选药物为青霉素。,第二节 卡他莫拉菌,卡他莫拉菌（,M.catarrhalis,）,又称为卡他布兰汉菌（,Branhamaceae,catarrhalis,）,可存在于健康人群的上呼吸道,导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎,免疫抑制和,ICU,患者可导致菌血症,社区呼吸道感染的主要病原体之一。,形态,G-,双球菌,有抗退色倾向,卡他莫拉菌革兰染色,营养要求不高,血平板或巧克力平板：菌落灰白色、不透明、光滑凸起；继培养，菌落干燥、坚硬，,整体推移感,，不易乳化，,NS,中自凝,微生物检验,中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本,呼吸道感染患者采取合格痰标本或支气管灌洗液,口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本,痰液标本直接涂片革兰染色,如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为0.51.5,m,革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染,培养及鉴定,血琼脂或巧克力琼脂：直径13,mm，,灰白色、光滑，用接种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动,氧化酶和触酶阳性,不发酵任何糖类,大多数菌株还原硝酸盐和产生,DNA,酶,三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟菌属鉴别,奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定,