急性经口毒性实验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,急性经口毒性实验（,Acute Oral Toxicity Test,）,一、实验目的：,（一）通过本次实验,掌握经口灌胃技术,，半数致死剂量的意义。,（二）通过本次实验,学习半数致死剂量的计算及毒性判定,。,二、测定方法：,本实验以灌胃方式测定敌敌畏,DDV（80g/100ml）,的半数致死量（LD,50,）。,（一）实验动物与分组：,首选健康成年小鼠(18g25g)和大鼠(180g220g) 。,实验前动物要在实验环境中适应35 d 时间，以了解其正常活动情况和健康状况，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物,。,本次实验取体重18-25 g 的小鼠，实验时，将小鼠,称体重、编号、按随机分组原则，将实验动物分成5组，每组8只,。,（二）剂量选择：,首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似的化学物的LD,50,，以此值作为受试化学物的预期毒性中值，即,中间剂量组,，再上下各推1-2 个剂量组，进行预实验。,各剂量组的间距可根据LD,50,计算方法要求按等比级数或等差级数安排。,本实验用,机率单位法,计算LD,50,，要求按等,比级数,排列，常用,1：0.8,，如敌敌畏的最高剂量为125 mg/kg，其次剂量组为125 mg/kg *0.8=100 mg/kg ，依次类推为80 、64 和51.2 mg/kg五个剂量组。,（三）受试化学物配制与稀释,1. 溶剂：,水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶液。,脂溶性受试化学物以吐温-80、二甲基亚砜、植物油等配制。,（三）受试化学物配制与稀释,2. 受试物的稀释,等容量稀释法，,各个剂量组的动物均给予,相同单位体重体积,的受试化学物，按照,事先设计的剂量,分别稀释,配制为几种不同的浓度,的受试物溶液。,例如本次实验五个剂量组:,各剂量组动物给予,相同单位体重体积,受试物均为10ml/kg。,等容量稀释法,D：设计的染毒剂量， mg/kg,V：动物给药量（相同单位体重体积）均为10ml/kg,X：各组需配制的受试物溶液的浓度（mg/ml）,如：第一组染毒剂量D=51.2mg/kg，动物按V= 10ml/kg体重给药，配制的受试物浓度为X=51.2mg/10ml,，,依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为,第一组：51.2mg/10ml,第二组： 64mg/10ml,第三组： 80mg/10ml,第四组： 100mg/10ml,第五组： 125mg/10ml,各剂量组小鼠灌胃容量计算:,小鼠灌胃容量V ml=体重（g）10ml/1000g,各剂量组小鼠染毒剂量,:,小鼠染毒剂量= V ml 各组的受试物浓度（mg/10ml),（四）灌胃方法：,小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其,体位垂直,，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器，,将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。,若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部，,一般进针深度小鼠2.54cm,，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万,不能强行插入,，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。,小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg,（五）中毒体征和死亡情况观察,染毒后,观察和记录中毒体征,及出现的时间、,死亡数量和时间,及死亡前的特征。,高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观察。,根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。,观察的项目包括：,（1）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝；,（2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪；,（3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸深缓、呼吸过速、仰头呼吸、；,（4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀；,（5）皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽；,（6）眼：眼球突出、结膜充血、角膜浑浊、血性分泌物；,（7）消化系统：腹泻、厌食。,三、LD,50,计算：,可采用多种方法测定LD,50,，有机率单位法、霍恩氏法、寇氏法等，机率单位法能计算出任何反应率水平的剂量，且实验2-5组均可。,机率单位法遵守的要求：,1. 剂量按等比级数排列，相邻两剂量组间的比值常用1：0.8,2. 各实验组动物数相等,机率单位法计算LD,50,公式（用五个剂量组时）,X,3,-为第三个组的剂量对数(X3=log 80， 80mg/kg),i-为相邻两组剂量比值（以高剂量组为分子）的对数(i=log(125/100),y-为死亡率相应的机率单位（查附表）,-为五个剂量组的死亡率相应的机率单位的均数。,1、2、3、4、5为小剂量组到大剂量组的顺序。,5.0-为死亡率是50%时所相当的反应率的机率单位,LD,50,的95%可信限=log,-1,(X,+,1.96 S,X,),四、结果评价：,根据实验动物中毒体征、死亡时间、根据得出的LD,50,及受试物的种类，按相应的国家标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准（课本 215页-农药的急性毒性分级）对受试物进行毒性定级，判断受试物的毒性大小。,五、注意事项,：,1.灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管,2.正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损伤,3.灌入量计算和操作要准确，否则影响结果,4.防止操作者中毒。注意通风，不要把药品撒到手、脸部皮肤及身体其他部位，操作过程中要小心。,六、实验报告应包括以下内容：,1实验动物的种属。,2实验动物体重和随机分组情况。,3受试物的名称、性状等情况。,4受试物的配制和溶剂。,5描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。,6LD,50,的计算方法和结果。,7受试物的急性毒性分级、分级依据和结果评价。,THANK YOU!,