乌司他丁对炎症组织灌注及脏器损伤的影响课件

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,1,乌司他丁对炎症、组织灌注及脏器损伤的影响,1乌司他丁对炎症、组织灌注及脏器损伤的影响,2,目录,乌司他,丁的药理作用,乌司他丁对血管内皮、血管通透性和灌注的影响,乌司他丁,对脏器,功能的影响,2目录乌司他丁的药理作用,Michael J.et al.Clin Chem Lab Med 2005;43(1):116,3,乌司他丁（,UTI,）是天然的炎症调节物质,C,端,K,区：,抑制多种水解酶,N,端,K,区：,抑制组织蛋白酶,G,和弹性蛋白酶,O-,硫酸软骨素糖链：,与细胞、,钙,结合,，,稳定,溶酶体膜、,抑制炎,性细胞因子释放,N-,糖链：,调节内皮细胞与单核细胞、,粒细胞、淋巴细胞的结合力,Michael J.et al.Clin Chem Lab,1.Caroline M,et al.Journal of Cell Science 116,1863-1873(2003)2.Naohiro Kanayama,et al.BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS 238,560564(1997)3.Hidenori Matsuzaki,et al.CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY,Nov.2004,p.11401147 4.Seiji Kanayama,et al.Journal of Endotoxin Research 2007 13:369,4,乌司他丁抑制炎症介质及溶酶体酶释放,Ca,2+,Ca,2+,Ca,2+,Ca,2+,Ca,+,Ca,2+,Ca,2+,TNF-a,刺激因子,Ca,2+,ERK1/2,磷酸化,NF-B/Egr-1,活化,TNF-a/IL-1,TNF-a,TNF-a,TNF-a,TNF-a,TNF-a,硫酸软骨素糖链,结合,Ca,2+,结合,细胞,X,X,X,抑制钙内流,，阻断信号转导，减少,TNF-a/IL-1,产生,X,稳定细胞膜,抑制,TNF-a/IL-1,释放，,阻断炎症,级联反应,稳定,溶酶体,膜,，抑制溶酶体酶释放，减少细胞损害,1.Caroline M,et al.Journal,5,乌司他丁抑制多种水解酶,酶的分类,酶的名称,抑制,50%,酶活性的,UTI,浓度（,U/ml,）,蛋白酶,胰蛋白酶,6.8,-,糜蛋白酶,9.4,粒细胞弹性蛋白酶,5.6,组织蛋白酶,G,15.7,纤溶酶,34.7,胰弹性蛋白酶,1,675,肠激酶,3,000,脂酶,脂肪酶,230,糖类水解酶,透明质酸酶,75,淀粉酶,2,500,乌司他丁抑制胰蛋白酶、,-,糜蛋白酶、透明质酸酶、弹性蛋白酶和纤溶酶等多种酶的活性,乌司他丁对粒细胞弹性蛋白酶的抑制活性最强,5乌司他丁抑制多种水解酶酶的分类酶的名称抑制50%酶活性的U,6,目录,乌司他丁的药理作用,乌司他丁对血管内皮、血管通透性和灌注的影响,乌司他丁,对脏器,功能的影响,6目录乌司他丁的药理作用,7,蛋白酶抑制剂对中性粒细胞介导的内皮细胞损伤的抑制作用,7蛋白酶抑制剂对中性粒细胞介导的内皮细胞损伤的抑制作用,Keigo Nakatani,et al.Journal,of Leukocyte Biology Volume 69,February 2001,8,中性粒细胞,/,炎症介质损伤内皮细胞,多种,因子,培育后洗脱的,HUVEC,（,51,Cr,标记），,在,TNF-a,激活的中性粒细胞介导下,，,51,Cr,释放,率和内皮细胞死亡率明显升高,TNF-a,+,IFN-,培育后洗脱的,HUVEC,（,51,Cr,标记），加入不同因子,激活的中性粒细胞混悬,液，,51,Cr,释放,率和内皮细胞死亡率明显升高,Keigo Nakatani,et al.Journal,Keigo Nakatani,et al.Journal of Leukocyte Biology Volume 69,February,2001,9,乌司他丁抑制中性粒细胞分泌弹性蛋白酶，减轻内皮细胞损伤,经,TNF-a,+,IFN-y,培育后洗脱的,HUVEC,，加入,TNF-a,激活,的,中性粒细胞，和不同,浓度的乌司他,丁,/,加倍酯,/,抑肽酶。只有乌司他丁培育组，细胞毒性释放呈浓度依赖性降低,Keigo Nakatani,et al.Journal,Keigo Nakatani,et al.Journal of Leukocyte Biology Volume 69,February,2001,10,乌司他丁抑制弹性蛋白酶活性，减轻内皮细胞损伤,弹性蛋白酶（,ug/ml,）,乌司他丁（,U/ml,）,TNF-,a+IFN-y,培育后洗脱的,HUVEC,，加入,不同,浓度的,弹性蛋白酶，,继续,培育,12h,。,内皮细胞,51,Cr,释放,率呈浓度依赖性升高,TNF-a+IFN-y,培育后洗脱的,HUVEC,，加入,25ug/ml,弹性蛋白酶，以及不同浓度的乌司,他丁培育后，,细胞毒性（,表示内皮细胞损伤程度）,释放呈浓度依赖性下降,Keigo Nakatani,et al.Journal,乌司他丁对严重脓毒症血清损伤人肺,血管内皮细胞,保护作用的实验研究,2011,年发表于,中国呼吸与危重监护杂志,李新宇等,乌司他丁对严重脓毒症血清损伤人肺,血管内皮细胞,保护作用的实验,研究,.,中国呼吸与危重监护杂志,.2011;10(6):547-551.,乌司他丁对严重脓毒症血清损伤人肺血管内皮细胞保护作用的实验研,研究设计,观察指标,：,人肺微血管内皮细胞（,PMVECs,）的增值活性,人肺微血管内皮细胞（,PMVECs,）,培养液中,NF-,B,人肺微血管内皮细胞（,PMVECs,）培养液中,TNF-,研究目的：,探讨乌司他丁保护严重脓毒症血清损伤离体人肺血管内皮细胞,(PMVECs),的,机制,。,人,PMVECs,细胞株,患者血清组,(S,组）：加,10%,严重脓毒症患者血清的,RPMI1640,培养基,正常培养组,(N,组）：加,10%FBS,的,RPMI1640,培养基,健康血清组,(H,组,),：加,10%,健康人血清的,RPMI1640,培养基,李新宇等,乌司他丁对严重脓毒症血清损伤人肺,血管内皮细胞,保护作用的实验,研究,.,中国呼吸与危重监护杂志,.2011;10(6):547-551.,乌司他丁组（,U,组）：加,1000U/ml UTI+10%,患者血清的,RPMI1640,培养基,研究设计观察指标：研究目的：人PMVECs细胞株患者血清组(,乌司他丁治疗可维持脓毒症血清中,PMVECs,增值活性的稳定,与,S,组相比，,U,组,1,、,2,及,6h,的,OD,值明显升高，,1,和,6h OD,值升高的差异更明显（,P0.01),，说明与患者血清组（,S,组）相比，乌司他丁组（,U,组）细胞增值活性明显升高。,李新宇等,乌司他丁对严重脓毒症血清损伤人肺,血管内皮细胞,保护作用的实验,研究,.,中国呼吸与危重监护杂志,.2011;10(6):547-551.,P0.05,乌司他丁治疗可维持脓毒症血清中PMVECs增值活性的稳定与S,乌司他丁可明显减轻脓,毒症血清,中的,NF-,B,的表达,N,组及,H,组,PMVECs,未见,NF-,B,表达，患者,血清,组（,S,组）,PMVECs,多数胞核呈明显阳性表达，乌司他丁组（,U,组）,PMVECs,仅少数胞核呈阳性表达。说明,UTI,可,NF-,B,的活化。,李新宇等,乌司他丁对严重脓毒症血清损伤人肺,血管内皮细胞,保护作用的实验,研究,.,中国呼吸与危重监护杂志,.2011;10(6):547-551.,乌司他丁可明显减轻脓毒症血清中的NF-B的表达N组及H组P,乌司他丁可明显减轻脓毒症血清中,的,TNF-,的,表达,李新宇等,乌司他丁对严重脓毒症血清损伤人肺,血管内皮细胞,保护作用的实验,研究,.,中国呼吸与危重监护杂志,.2011;10(6):547-551.,与,S,组相比，,U,组各时间点,TNF-,含量均明显减少（,P0.05),P0.05,乌司他丁可明显减轻脓毒症血清中的TNF-的表达李新宇等,乌,小结,研究显示：,严重脓毒症血清可激活,NF-,B,的表达及释放大量的,TNF-,，引起,PMVECs,增值活性下降,UTI,可以通过抑制,NF-,B,的活化，避免下游炎症介质,TNF-,等大量产生，从而起到维持,PMVECs,增值活性的稳定,结论：,乌司他丁可通过抑制,NF-B,活化，减少,TNF-,的释放，减轻严重脓毒症,血清损伤,离体,PMVECs,程度。,小结研究显示：结论：,乌司他丁抑制烫伤大鼠全身炎症反应，减少内脏血管通透性和组织含水量的动物研究,Hong-Min Luo,et al.,Burns 39(2013)916-922,SD,大鼠,64,只，随机分为四组：假烫伤,+N.S,组、假烫伤,+UTI,组、烫伤,+N.S,组、烫伤,+UTI,组,55%,总体表面积,III,度烫伤模型。于烫伤后即刻静脉分别注射生理盐水或乌司他丁,40000U/kg,乌司他丁抑制烫伤大鼠全身炎症反应，减少内脏血管通透性和组织含,乌司他丁降低血浆,CRP,含量,和髓过氧化物酶活性，抑制炎症反应,*,P0.05,与假烫伤,+N.S,组比较；,#,P0.05,与烫伤,+N.S,组比较,Hong-Min Luo,et al.,Burns 39(2013)916-922,乌司他丁降低血浆CRP含量和髓过氧化物酶活性，抑制炎症反应*,乌司他丁降低微血管通透性，减少血管内液体丢失，减轻内脏组织水肿,组织伊文思蓝含量（,ug/g,）,组织水含率（,%,）,肺,心,肝,肾,小肠,肺,心,肝,肾,小肠,*,P0.05,与假烫伤,+N.S,组比较；,#,P0.05,与烫伤,+N.S,组比较,Hong-Min Luo,et al.,Burns 39(2013)916-922,乌司他丁降低微血管通透性，减少血管内液体丢失，减轻内脏组织水,乌司他丁保护内皮、改善血管通透性，增加组织灌注的动物研究,30,只,新西兰白兔随机分为对照组、百草枯组和乌司他丁干预组,。,百草,枯组与干预组以,35mg/kg,剂量一次性腹腔注射百草枯，建立兔,ALI,模型，对照组以等体积生理盐水注射。干预组在,ALI,模型建立后立即以乌司他丁,1,00KU/kg,的剂量治疗。,实验,各组分别于建模,2h,、,4h,、,6h,时间点行,320,排,CT,灌注,扫描胸腔，得到,CTP,图像,及相关参数（包括,毛细血管通透性,rPS,；局部血,容量,rBV,；局部血流,量,rBF,）,，,并于耳缘静脉,采集,2ml,血液测定血管内皮生长因子（,VEG F,）质量浓度。,6h,后用空气栓塞法处死动物,，取,肺组织行病理观察。,Song et al.BMC Emergency Medicine 2013,13(Suppl 1):S7,乌司他丁保护内皮、改善血管通透性，增加组织灌注的动物研究30,乌司他丁减轻内皮细胞损伤和炎性浸润,A,.,对照,组,超微结构,无明显异常,改变,B,.,百草,枯组受损明显：细胞空泡状结构，肺泡腔见,中性粒细胞,、红细胞渗出，血管内皮细胞肿胀、基底膜断裂,C,.,乌司,他丁,组超微结构改变,轻于百草枯组，血管基底膜较完整，内皮细胞肿胀不明显，肺泡腔内渗出,较少,A,B,C,Song et al.BMC Emergency Medicine 2013,13(Suppl 1):S7,乌司他丁减轻内皮细胞损伤和炎性浸润A.对照组超微结构无明显异,乌司他丁减轻内皮细胞损伤，抑制,VEGF,的释放，减小血管通透性,*,*,*,*,*,*,同一时间点百草枯组与对照组,比较*,P0.05,，干预组与百草枯组,比较,P0.05,Song et al