丙种蛋白的制备

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第六组 钱龙,项目二 丙种球蛋白的制备,概述,预防病毒性传染病。丙球中含甲肝抗体可有效地预防甲型肝炎。但对己发病者无效。,治疗免疫缺陷病如先天性丙球缺乏症、易变型免疫缺陷症、免疫球蛋白合成异常的细胞缺陷症。,治疗大面积烧伤、严重创伤感染以及败血症或内毒素血症早期给予大剂量丙球可使死亡率显著下降。,性质,人免疫球蛋白的生物半衰期为1624天。,冻干制剂应为白色或灰白色的疏松体，液体制剂和冻干制剂溶解后，溶液应为接近无色或淡黄色的澄明液体，微带乳光。但不应含有异物或摇不散的沉淀。,注射丙种球蛋白是一种被动免疫疗法。它是把免疫球蛋白内含有的大量抗体输给受者，使之从低或无免疫状态很快达到暂时免疫保护状态。,电泳的基本原理,电泳带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis)。,电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。,应用：,1、分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等,2、分析某种物质的纯度及分子量,3、电泳技术与层析法结合可用于物质的结构分析,4、免疫电泳可提高对蛋白质的鉴别能力,影响电泳速度的因素：,样品本身：带电量，分子大小，形状,电场强度：电压,电泳介质的pH和离子强度,电渗作用,实验器材,试剂,牛血清样品、分离胶缓冲液、凝胶溶液、四甲基乙二胺、10%过硫酸铵（AP）、电极缓冲液、固定液、染色液、脱色液,仪器,圆盘电泳槽、电泳仪、电泳玻璃管、滴管、烧杯、刻度吸管、加样枪、注射器等。,步骤：,装管,配胶,灌胶,制样,点样,电泳,剥胶,固定,染色,脱色,结果分析,welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience,1.装管,取一根洁净的电泳玻璃管，将一端垂直插入橡皮垫,2.配胶,按右表配置胶液,并混匀。,备用。,操作步骤,3.灌胶及封胶,将混匀好的胶液，用滴管缓慢注入玻璃管，当加,到液面距离电泳玻璃管上口 1cm 时停止。注意,在加的过程中不要混进空气，,随即用注射器经针头沿凝胶管壁缓慢加入蒸馏水,至管满，防止氧化，室温下聚合15-20min。,4.制样,取血清30ul，加0.025%溴酚蓝5ul，20%蔗,糖65ul，混匀即可。,5.点样,等胶完全凝结后，用滤纸小心吸去表面的水层（切勿,破坏胶面的完整性）。,将制好的胶管装入电泳槽中调节高度并塞紧，然后分,别在电泳槽的上下槽体内注入电泳缓冲液，下槽的液面,应没过玻璃管的下管口及电极丝，上槽的液面应没过玻,璃管口0.5-1cm；排气泡。,用微量注射器或加样枪吸取 50l 样品小心的加入,玻璃管内（注意不要让样品溢出管口）。,6电泳,（1）电流电压条件,圆盘电泳：刚接通电源时，直流稳流电流强度通常为1mA/管，10分钟后直流稳流电流强度通常为 4mA/管。,（2）电泳时间,一般约需 2.5 小时。样品中溴酚蓝电泳至距分离胶前缘约 1cm 处时即可停止电泳。,7.剥胶,电泳结束后，取下玻璃管，用带长针头的注射器（内盛蒸馏水）从浓缩胶一端紧贴玻璃管壁缓慢插入针头，一面注入蒸馏水一面缓慢旋转玻璃管。靠水流的压力和润滑作用使凝胶和玻璃管的内壁分开，待水流从另一端流出时，再慢慢将针头退出（注意操作中不要把胶条搅碎）。然后用洗耳球轻轻在胶管的一端加压，将胶条从玻璃管中缓慢滑出（置培养皿中）。,8.固定,剥胶完毕后，将胶条置于固定液中固定20-30,分钟。,9.染色,将胶条放入考马斯亮蓝染色液中，室温染色,50-60分钟。,10.脱色,将胶条以自来水冲洗两次，然后在脱色液中脱,色约 10 分钟，共3次（脱色过程需振摇，如脱,色效果不好，则需过夜）。,welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience,11.结果分析,（1）观察结果,脱色完全后（背景清晰），观察区带的,数量、大小、颜色深浅等，记录（画图）,（2）分析,标准结果,welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience,2,1,清蛋白,注意事项,1丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，对皮肤有刺激作用，注意避免直接接触。,2制胶时，要充分摇匀，加速剂TEMED最后加。,3灌凝胶时不能有气泡，以免影响电泳时电流的通过。,4.注意观察实验现象：分界面等。,5脱色染液回收。,6.固体胶切忌倒入水池。,Thank you!,