免疫学检测技术课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,免疫学检测技术,体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素,检测抗原或抗体的体外试验,免疫细胞功能的检测,抗原抗体反应特点,抗原抗体反应的特异性,抗原抗体反应的可逆性,抗原抗体反应的可见性,抗原抗体比例合适出现肉眼可见,IC,凝集物，沉淀物,受温度、,PH,、电解质影响,第一节,体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素,抗原抗体反应的影响因素,抗 原 抗 体 复 合 物 的 形 成,抗原多于抗体,抗原与抗体数量相当,抗原少于抗体,凝集反应（,agglutination reaction),沉淀反应,(precipitation reaction),标记物标记技术,检测抗原或抗体的体外试验,1.,凝集反应,概念：颗粒性抗原（细菌或细胞等）与相应抗体结合在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物。,类型：直接凝集反应,间接凝集反应,直接凝集反应,玻片法：,定性，已知抗体测未知抗原,细菌的鉴定和分型,人类,ABO,血型测定,试管法：,定量，用已知抗原测未知抗体的量,肥达氏试验,-,诊断伤寒和付伤寒,抗原,抗原,抗原,抗体,抗原,抗原,抗原,颗粒抗原,凝集颗粒,间接凝集反应,可溶性抗原 载体颗粒 免疫微球,（致敏载体）,抗体,凝集,可溶性抗原先吸附在一与免疫反应无关的颗粒载体上，成为致敏颗粒，再与相应抗体结合，出现的凝集现象,.,2.,沉淀反应,概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在,一定条件下形成沉淀物的现象,.,可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、组织浸出,液、细菌滤液等,.,类型：,1,）单向琼脂扩散试验,2,）双向琼脂扩散试验,用于血清中,IgM,、,IgG,、,IgA,、补体,C3,等,含量的测定,.,单向琼脂扩散试验,双向琼脂扩散试验,3.,免疫标记技术,将已知的抗体或抗原标记上,荧光素,、,酶、放射性核素,等示踪物质，通过检测标记物，测定抗体或抗原的方法。,常用标记技术：,1,）免疫酶测定,(enzyme immunoassay,EIA),酶联免疫吸附试验,(,ELISA,）,2,）免疫荧光技术,(,immunofluorescence technique,),3,）放射免疫测定法,(radioimmunoassay,RIA),4,）化学发光物质等,酶免疫测定,用酶标记抗体进行的抗原抗体反应，通过酶作用于底物后显色来判断结果。,抗原抗体反应酶促反应,酶联免疫吸附试验,（,enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA,）,将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，再用酶标抗体进行检测的抗原抗体反应。,特点：敏感性高（,ng-pg,），,操作简便,类型：直接法,(,双抗体夹心法,):,Ab+Ag+Ab*,间接法,:,Ag+Ab+,抗,Ab*,双抗体夹心法,放射免疫测定法,(radioimmunoassay,RIA),原理：用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术,常用放射性核素：,125,I,、,131,I,应用：测定血清、尿液等液体中的微量抗原或半抗原物资，如激素、药物等。,敏感性很高，应用广泛。,灵敏度达,pg/ml,水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及,IgE,等。,放射免疫检测法,（,RIA,）,竞争法,免疫印迹法,Western blotting,病毒,浸于,固相载体,大小不同的蛋白,电 泳,裂 解,将各蛋白分开,待检血清,转 印,加底 物,洗 涤,酶标二抗,观察结果,免疫细胞功能的检测,免疫细胞的分离,免疫细胞的功能测定,一、免疫细胞的分离,外周血单个核细胞（,PBMC,）的分离,淋巴细胞分离：葡聚糖,-,泛影葡胺密度梯度离心法,单核细胞,淋巴细胞,磁珠分离法,淋巴细胞及其亚群的分离和分析,流式细胞术,抗原肽,-MHC,分子四聚体技术,检测特异性,TCR,抗原特异性,T,细胞检测,链霉亲合素,荧光素,生物素,MHC,分子,抗原肽,结合特异性,CTL,的,TCR,T,细胞功能检测：,T,细胞增殖试验：,淋巴细胞转化试验有形态计数法、,MTT,法,和同位素法三种,细胞毒试验：,51,Cr,释放法、凋亡细胞检查法等,细胞因子检测：,生物活性测定法等,皮肤试验（体内法）：,OT,试验,免疫细胞功能的测定,结核菌素,注射受试者前臂内侧皮内,红肿硬结,0.5cm,阳性,观察局部超敏反应,24,48,小时后,无红肿硬结,或,0.5cm,阴性,原理：,型超敏反应,步骤：,皮肤试验（结核菌素试验）,OT,试验,B细胞功能测定,(1)单向琼脂扩散试验等测定Ig的含量,(2)抗体形成细胞测定,溶血空斑形成试验,谢谢,