利用SELEX技术筛选获得结核患者血清IgG抗体适体36张课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,利用 SELEX技术筛选获得结核,患者血清lgG抗体适体,秦莲花崔振玲胡忠义,上海市结核病(肺)重点实验室,同济大学附属上海市肺科医院,2011.10,利用SELEX技术筛选获得结核患者血清IgG抗体适体利用 SELEX技术筛选获得结核,患者血清lgG抗体适体,秦莲花崔振玲胡忠义,上海市结核病(肺)重点实验室,同济大学附属上海市肺科医院,2011.10,研究背景,细菌学,菌阳肺结核,分子生物学,肺结核,菌阴肺结核,5070%,结核病,免疫学,淋巴结核,肺外结核结核性脑膜炎,重组抗原,免疲动物,抗体,抗体检测,抗原检测,菌阴,早期诊断,无痰,并器结的肺,发,核鉴结,肺外结核,结移性别核,核植脑诊与,结核流行病学,术膜断肺,后炎,癌,研究背景,细菌学,菌阳肺结核,分子生物学,肺结核,菌阴肺结核,5070%,结核病,免疫学,淋巴结核,肺外结核结核性脑膜炎,重组抗原,免疲动物,抗体,抗体检测,抗原检测,菌阴,早期诊断,无痰,并器结的肺,发,核鉴结,肺外结核,结移性别核,核植脑诊与,结核流行病学,术膜断肺,后炎,癌,存在的问题之一,机体免疫功能不同导致对抗原识别具有差异性,机体对抗原的识别存在阶段特异性,机体的抗体反应是针对多个抗原的,单一的抗原无法检测出所有结核患者的抗体,筛选多个结核病特异性抗原组成联合抗原进行抗,体检测,是血清学诊断的重要研究方向之一,存在的问题之二,高活性特异抗体、抗原的制备瓶颈,限制了结,核病免疫学诊断的临床应用价值,寻找抗原、抗体制备的新途径和检测新方法,提高结核病免疫学诊断的特异性和灵敏性,是,结核病免疫学诊断研究中迫切需要解决的问题。,寡核苷酸适体,血清学诊断研究的新思路,Primary Target,Secondary aptamer,conjugated to a reporter,aptamer,适体用于诊断研究的优点,高亲和力,高特异性,靶分子广,可体外筛选,易人工合成,分子较小,稳定性好,易修饰,可反复使用,能长期保存,寡核苷酸适体的产生 SeLeX技术,20世纪90年代初,美国科罗拉多大学的Tuek和Go1d研究出,的一种新型体外筛选技术,基于进化过程的变异、选择、复制,被命名为“指数富集配,体的系统进化”(Systematic Evolution of Ligands by,EXponential enrichment,SELEX),现被广泛应用到分子生物学、基因组学、临床医学等众多研,究领,自出现以来,已筛选出一些针对病毒、细菌等病原体特异寡,核苷酸适体,为流行性疾病的诊断和基础研究寻找到了一条,新的途径,筛选原理,单链文库(DNA、RN),D,D去掉未结合,寡核苷酸序列,基础研究,新的筛选扩增,诊断研究,适体。0,洗脱结合的3,序列,治疗研究,单链文库的特点及容量,固定序列,固定序列,口,随机序列,在理论上,体外化学合成的随机寡核苷酸的库容为4个DNA片段,(n为随机序列的个数),如:一个随机碱基序列为40的DNA库,库中包含不同碱基序列的单链DNA片段,440=1.21024,当然,一个典型的1微摩尔水平的固体DNA合成片段的复杂度一般,限制在10141015。,