地中海贫血基因检测的临床应用课件

,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,地中海贫血基因检测的临床应用,地中海贫血基因检测的临床应用地中海贫血基因检测的临床应用,地中海贫血基因检测的临床应用地中海贫血基因检测的临床应用地中,地中海型,贫,血,简,介,地中海贫血（,Thalassemia,）,又称,海洋性贫血,。为一组遗传性溶血性贫血。其共同特点是由于人体珠蛋白基因突变或者缺失而导致的某种珠蛋白链合成障碍，造成，-珠蛋白肽链合成速率的不平衡而导致的溶血性贫血。地中海贫血可主要分为两大类，分别有甲型（）和乙型（）。另外亦有轻型、中型及重型地中海贫血之划分。,2,地中海型贫血简介地中海贫血（Thalassemia）又称海洋,全球有,3.5,亿,人为地中海贫血基因携带者（占总人口的,2%,）,中国南方高发地区人群携带率最高可达到,24%,地中海贫血的地域分布,-地贫分布,-地贫分布,3,全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）地,中国南方地贫基因携带率,地区,携带率,(%),地贫,地贫 合计,广东,8.53,2.54 11.07,广西,14.95,6.78 21.73,四川,1.92,2.18 4.1,台湾,4.20,1.10 5.3,香港,5.02,3.41 8.43,Xu, et al.,J Clin Pathol,2004, 57:517-22.,Cai, et al.,Chi J Epidemiol,2002,23:281-5,.,在我国，地中海贫血主要在南方,广东、广西、海南、四川、重庆,等省市发病率较高，以,广西、广东,最为严重。,4,4,中国南方地贫基因携带率 地区携带率(%) 地贫地贫,1.,血红蛋白由一个珠蛋白和四个血红素（又称亚铁原卟啉）组成，,珠蛋白的一条肽链及一个血红素结合成为血红蛋白的一个亚单位，,每个血红素又由四个吡咯类亚基组成一个环，环中心为一个亚铁离子。,2.,组成珠蛋白的四条肽链成年人可由2条链和2条链构成，称HbA。胎儿由2条链2条链构成，称HbF。出生后不久由HbA取代。,3.,血红蛋白四个亚单位之间及亚单位内部以盐键相互结合。每个血红素基团中间的亚铁则可以及氧结合使之成为氧合血红蛋白。及氧结合或解离将影响盐键的形成或断裂，使Hb的四级结构发生改变，其及氧的亲和力亦随之改变,.,血红蛋白构造,5,1.血红蛋白由一个珠蛋白和四个血红素（又称亚铁原卟啉）组成，,血,红,素,英文,缩写,血,红,蛋白,所含比例,胎,儿,血,红,素,HbF,2,成人,血,红,素,HbA,95,成人,血,红,素,二,HbA2,3,6,血红素英文缩写血红蛋白所含比例胎儿血红素HbF2成,根据珠蛋白肽链基因（简称,基因或,基因）缺失、缺陷或基因突变和珠蛋白肽链合成障碍的不同，可将地贫分为,型、,型、,型和,型四种，其中以,型和,型地贫较为常见。,地中海贫血定义及分类,7,根据珠蛋白肽链基因（简称基因或基因）缺失、缺陷或基因突变,人类血红蛋白的合成和演变,胚胎期,胎儿期,成人,gower 1-,22,gower 2-,22,Portland-,22,H,b,F-,22,HbA-,22,H,b,A-,22,Hb,A2-,22,HbF-,22,8,人类血红蛋白的合成和演变胚胎期胎儿期成人gower 1- ,地贫血红蛋白的组成,正常成人血红蛋白（,Hb,）有三种：,HbA(22)(,96.5-97.5%,),、,HbA2(22)(,2.5,3.5%,),、,HbF(22)(,0-1.0%,),。,9,地贫血红蛋白的组成正常成人血红蛋白（Hb）有三种：HbA(,染色体,第,11,号染色体,珠蛋白基因,第,16,号染色体,珠蛋白基因,来源,：,T,10,染色体 第11号染色体 第16号,地中海贫血及基因型,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,1,血红蛋白正常,轻型：,2,个,基因缺失或突变,中间型（,HbH,疾病）：,3,个,基因缺失或突变,Hb Barts,：,3,个,基因缺失或突变,静止型：,1个 缺失或突变,11,地中海贫血及基因型a2a1a2a1a2a2a1a2a1a2,重型,地贫：又叫,HbBarts,水肿综合征，,4,个,基因都缺失了,(,-,SEA,/,-,SEA,),，在孕,后期或出生后即死亡。,12,重型地贫：又叫12,中间型,地贫：缺失,3,个,基因,(,-,/,-,SEA,),或缺,2,个,基因另有一个,基,因突变,( ,T,/,-,SEA,),，,又叫,HbH,病，电泳大多可,见,HbH,区带。,Hb,大多在,T,60-100g/L,左右。,13,中间型地贫：缺失3个13,轻型,地贫：缺失,2,个,基因,( /,-,SEA,),(,-,/ ,-),或,2,个,基,因突变,( ,T,/ ,T,),T T T,或缺,1,个,基因另有一个,基因突变,(,-,/ ,-),，,又叫,地贫,1,。轻度贫血,或不贫血。,14,14,静止型,地贫：缺失,1,个,基因,(/,-),或,1,个,基因突变,(/,T,),又叫,地贫,2,，不会贫血。,T,15,静止型地贫：缺失1个15,地贫：以临床贫血程度分级,重型,地贫：,Hb,在,60g/L,以下。,中间型,地贫：,Hb60-100g/L,之间。,轻型,地贫：贫血但在,100g/L,以上。,静止型,地贫：不贫血。,正常,16,地贫：以临床贫血程度分级重型地贫：Hb在60g/L以下。,地中海贫血的临床特征,临床特点,静止型,（,地贫,2,）,轻型或标准型（,地贫,1,）,中间型（,HbH,病,/CS,型,HbH,病）,重型,HbBarts,胎儿水肿综合征）,发病年龄,3,个月,儿童，成人,儿童，成人,胎儿,贫血程度,无,无或轻度,中度重度,重度,黄疸,无,无,轻度中度,无或轻度,肝脾肿大,无,无或轻度,轻度中度,重度,血片,RBC,：,形态异常,正常,轻度,中度重度,重度,血红蛋白电泳,正常,正常,HbH,带或伴,HbBarts,HbConstantSpring,大量,HbBarts,伴,HbPortland,少量,HbH,HbF,正常,正常,正常或轻度减少,无,HbH,包涵体,无,无或可有,强阳性,阳性,/,11,0.7,0.95,0.3,0.6,基因诊断,缺失,1,个或突变,/-,，,T,/,缺失,2,个或突变,/-,或,/,T,-,缺失,3,个或突变,-/-,，,T,/-,缺失,4,个,-/-,17,地中海贫血的临床特征临床特点静止型轻型或标准型（地贫1）,-,地贫血红蛋白比较,表型,Hb A,Hb Barts,Hb H,正常人,97-98%,0,0,静止型携带者,96-98%,0-2%,(At birth),0,轻型地贫症状,85-95%,2-8%,(At birth),2%,Hb H,疾病,下降,G),13,HBB,CD43,CD43 GT,2,HBA,QS125,Codon 125(T-C),14,HBB,-29,-29AG,3,HBA,CS142,Codon 142(T-C),15,HBB,Int,起始密码子,ATGAGG,4,HBA,-SEA,SEA,缺失,16,HBB,CD14-15,CD14-15(+G),5,HBA,-3.7,3.7,缺失,17,HBB,CD27-28,CD27-28(+C),6,HBA,-4.2,4.2,缺失,18,HBB,-32,-32CA,7,HBB,CD41-42,CD41-42 (-TCTT),19,HBB,-30,-30TC,8,HBB,IVS-2-654,IVS-2-654 CT,20,HBB,IVS-1-1,IVS-1-1 GT,9,HBB,CD17,CD17 AT,21,HBB,IVS-1-5,IVS-1-5 GC,10,HBB,-28,-28AG,22,HBB,CD31,CD31(-C),11,HBB,CD26,CD26 GA,23,HBB,Cap,CAP +40-+43(-AAAC),12,HBB,CD71-72,CD71-72(+A),人,DNA,样本的地中海贫血基因型（包含,3,种,突变、,3,种,缺失及,17,种,突变）中国常见的突变基因型的检测，可用于人地中海贫血的,辅助诊断,及适用于大样本量的,携带者筛查,和,产前基因诊断,。,31,序号基因缩写突变位点描述序号基因缩写突变位点描述1HBAWS,目前，国内地贫分子诊断方法主要有,Gap-PCR,、反向斑点杂交,(RDB),、导流杂交、测序等。其中,Gap-PCR,只能检测出地贫中的缺失型，反向斑点杂交需要两次检测才能完整的检出、,-,地贫；导流杂交技术不能做到基因位点的准确分型；而测序方法需要昂贵的仪器,，,复杂序列分析，,人工经验要求高，,不利于大规模筛查。,国内现有地中海贫血基因检测技术及现状,32,目前，国内地贫分子诊断方法主要有Gap-PCR,-,地中海贫血,-,地中海贫血,亚能生物技术,(,深圳,),有限公司,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(gap-PCR,法,) (,国食药监械,(,准,),字,2012,第,3401088,号,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(,反向点杂交法,) (,国食药监械,(,准,),字,2013,第,3400676,号,中山大学达安基因股份有限公司,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(gap-PCR,法,) (,国食药监械,(,准,),字,2011,第,3401628,号,-,地中海贫血基因分型检测试剂盒,(PCR-,反向点杂交法,) (,国食药监械,(,准,),字,2012,第,3401665,号,珠海经济特区海泰生物制药有限公司,东南亚型,-,地中海贫血,Zeta,链蛋白检测试剂盒,(,酶联免疫法,) (,国食药监械,(,准,),字,2011,第,3400228,号,深圳益生堂生物企业有限公司,地中海贫血基因检测试剂盒,(PCR,探针法,) (,国食药监械,(,准,),字,2012,第,3400354,号,厦门致善生物科技有限公司,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(,荧光,PCR,熔解曲线法,) (,国食药监械,(,准,),字,2013,第,3401294,号,潮州凯普生物化学有限公司,-,和,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(PCR+,膜杂交法,) (,国食药监械,(,准,),字,2012,第,3400399,号,北京现代高达生物技术有限责任公司,-和-型地中海贫血基因检测试剂盒(PCR-杂交法) (国食药监械(准)字2013第3401572号,地中海贫血检测试剂盒,33,-地中海贫血-地中海贫血亚能生物技术(深圳)有限公司-,及现有地贫筛查方案结合的产品定位,34,及现有地贫筛查方案结合的产品定位34,谢 谢,35,谢 谢35,谢谢观赏,谢谢观赏,