ABO正反定型、RH血型鉴定及ABO血清效价滴定和亲和力试验

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,Company Logo,*,单击此处编辑母版标题样式,血型输血实验一,ABO正反定型 ABO血清效价滴定和亲和力试验 Rh血型鉴定,实验目的,重点掌握ABO血型正反定型的原理、方法、临床意义,熟悉效价滴定和亲和力实验,熟悉Rh血型鉴定的原理、方法、临床意义,ABO血型正反定型,原理,用已知特异性的抗体检测试剂检查红细胞的抗原（forward typing，正向定型或红细胞定型）,用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体（reverse typing，反向定型或血清定型），结合正反定型来判断红细胞的ABO血型,正向定型,玻片法,1.标记玻片 将玻片分为两区分别标记抗A、抗B,2.在相应区域滴加抗A/抗B试剂1d,3.滴加血液各1d，不断轻摇玻片，充分混匀，2min内判断结果,forward typing（cell typing）,anti-A anti-B,Testing result,O,+,A,+,B,+,AB,反向定型,试管法,1.制备2标准红细胞生理盐水悬液,1d已知血型RBC+49d生理盐水 混匀,2.分离血浆 2500r/min 3min,3.取两支试管分别标记A,1,、B，加入待检血浆各2d,4.将A,1、,B型标准红细胞生理盐水悬液1d加入相应标记的试管 混匀 1000r/min 30sec,5.观察结果 观察上层有无溶血 管底有无凝集 再用低倍镜观察,reverse typing（serum typing）,A,C,B,C,Testing result,+,O,+,A,+,B,AB,blood group,antigen in red blood cell,antibody in serum,A,A,anti-B,B,B,anti-A,O,anti-A,anti-B,AB,A、B,ABO blood group,注意事项,1.严格标记 摇动玻片动作要轻,2.所有器材干燥清洁、防止溶血，避免交叉污染,3.血型试剂平衡至室温再使用，用后尽快放回冰箱,4.玻片法注意防止干涸，以免误判为凝集,5.试管法 若溶血表明有补体激活（应区别标本采样等其它因素引起的溶血），视为凝集,6.防止冷凝集素干扰，室温（20-24）下试验,临床意义,ABO血型系统，是迄今为止发现的最具临床价值的一个血型系统，它将人的红细胞分成A、B、O和AB四种血型，是输血医学和器官移植中最重要的血型系统之一。,ABO血清效价滴定和亲和力试验,原理,将标准血清用生理盐水经最大倍数稀释与相应的红细胞抗原发生一定强度以上的凝集即为该血清的效价，也就是血清中所含抗体的浓度,亲和力试验是指该血清中抗体与相应红细胞发生凝集的强度与速度,效价滴定,试管号,1 2 3 4 5 6 7 8 9,(空白),生理盐水（,抗A血清（ml）0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2,2A红细胞（,最后稀释度,1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512,混匀 1000r/min 2min 观察结果,+凝集成大块，几乎无游离红细胞,+凝集块稍小，有少量游离红细胞,+凝块更小，游离红细胞占1/2,+细小凝块，游离更多,凝集程度+时对应稀释度的倒数为该抗体的效价,弃去,亲和力试验,已知抗体待测血清1d于玻片上，10相应红细胞生理盐水悬液2d加于血清液滴旁（不相接触）,玻棒混合两者，同时开动秒表，轻转玻片，混匀,记录出现凝集时间和3min时凝块大小,（要求15s内开始凝集，3min时凝块1mm,2,）,Rh血型鉴定,原理,单克隆混合试剂检测法,用Rh各抗血清（IgM+IgG型）试剂通过凝集反应对红细胞上Rh抗原进行鉴定。,试管法,1.试管内加1dRh抗血清试剂,d待测血,3.轻轻混合，离心。,4.观察试管底并轻摇重悬，观察有无凝集,注意事项,1.Rh血型系统的抗体多由后天免疫刺激（主要是输血或妊娠）而产生，故不需做反定型,2.若为阴性反应，应进一步做Rh阴性确认试验。用抗D、E、C、c、e（IgG+IgM）混合型血清定型试剂鉴定待测红细胞上的全部Rh抗原,临床意义,Rh血型系统是当前发现的红细胞血型系统中最复杂的一个，其重要性仅次于ABO血型系统。,D抗原是Rh抗原中免疫性最强的抗原，通过输血和妊娠，50%75%的Rh阴性的个体，可因D抗原阳性红细胞免疫而产生抗D，并可导致严重的溶血反应。,受血者或孕妇血浆中如含有Rh抗体，在输入含相应抗原的血液后，将引起严重的溶血性输血反应或新生儿溶血病，以抗D与D红细胞尤为显著。IgG类的Rh抗体，由于能通过胎盘，从而破坏胎儿有相应抗原的红细胞，引起新生儿溶血病。,