新细胞培养医学课件共174页

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,新细胞培养医学课件,11、不为五斗米折腰。,12、芳菊开林耀，青松冠岩列。怀此贞秀姿，卓为霜下杰。,13、归去来兮，田蜀将芜胡不归。,14、酒能祛百虑，菊为制颓龄。,15、春蚕收长丝，秋熟靡王税。,新细胞培养医学课件新细胞培养医学课件11、不为五斗米折腰。,12、芳菊开林耀，青松冠岩列。怀此贞秀姿，卓为霜下杰。,13、归去来兮，田蜀将芜胡不归。,14、酒能祛百虑，菊为制颓龄。,15、春蚕收长丝，秋熟靡王税。细胞原代培养一、组织块培养法,“课前候课”，即指体育教师在上课前几分钟提前到操场，事先准备好场地，做好上课的准备。课前候课无论对教师、对学生、对上好每一节课都有很好的帮助作用。为此，笔者结合的自己的教学实践经验，谈小学体育课“课前候课”应该关注的四点问题和体现的四点作用的思考，与大家共同探讨学习。,一、“课前候课”应该关注的四点问题,（一）关注室外场地器材的安全检查,体育教师提前候课对体育课所需场地、器材进行检查，是体育课安全进行的前提保证。课前体育教师要对体育课所需场地进行巡查，主要巡查：场地的划线是否规范、场地平整性如何、场地布置是否合理、场地是否与其他体育教师有无冲突、场地是否存在安全隐患，通过以上的场地、器材安全巡查，为执教者上好本节体育课打下良好的基础。,（二）关注教师身体状态的自我调节,上课前体育教师要对自己的服装进行检查、整理，体育课中教师保持干净、整洁的运动服装能给自己和学生带来良好的精神状态。如本节体育教师运动量教大或技能动作难度较大的，体育教师一方面要提前活动好自己的身体关节，使身体有一个预热准备；另一方面要本课中技能动作进行一次事先演练预习，避免出现示范不到位，起不到教师榜样示范作用，影响着学生教学技能的掌握。,（三）关注课堂教学内容的再次梳理,体育教师要利用课前候课的几分钟，对本课的所上教学内容进行回忆，特别要对本课教学的教学策略、组织队形的变动进行有重点的一一梳理，避免出现教学内容漏上或场地调动的混乱，会影响本课教学目标的达成。,（四）关注学生上课情况的基本了解,体育教师可以利用课前几分钟，对提前到操场的学生进行目光观察和语言交流，观察他们穿的服装是否规范，对学生服装佩戴着的不安全物件提醒学生进行摘除，并可以提前询问体育委员本节课上课学生的生病、受伤等情况进行基本了解，做到心中有数，以便在体育教学中区别对待。通过与学生的语言交流，了解学生对本课教学内容的基础情况，这样可以根据学生情况在课堂中提前思考调整教学目标、教学策略。,二、“课前候课”应该体现的四点作用,（一）课前候课有利于发挥教师表率作用,体育教师长期坚持课前候课，会养成自己对工作高度负责、认真的工作态度，可在学生心目中塑造可敬的形象，形成榜样的作用，会带来学生积极主动、自觉地来上体育课。,体育教师课前候课能使学生养成不迟到、守纪律的好习惯；能使学生在上课几分钟及时回想上节课所上内容的重点、难点、关键点以及教师布置的课后练习自己完成情况等，使学生养成课后复习，课前加深记忆的习惯；课前候课还能积极有效地督促学生终身每一节课、上好每一节课。,（二）课前候课有利于提高教师教学能力,体育教师可在课前候课时的几分钟内集中精力，对自己本课上预设的教学内容、组织教学、练习手段进行一次全面的回忆，也可以针对当前的气候、天气、室外环境等外界环境的变化对本课预设的教学策略作进一步的强化和调整，使教学思路进一步条理化，以便开课后尽快进入角色，指导学生练习。,（三）课前候课有利于加强课堂安全管理,开课前体育教师可以对上课所需的场地、器材提前做认真仔细地检查、布置，并迅速回想一下以往上这些内容的课时自己所采用的练习方法、学生在练习中的表现及所容易出现的问题等，以此预测本节课学生练习种可能出现的一些意外情况，做到心中有数，以便做好保护欲帮助的准备，防止意外事件发生。,（四）课前候课有利于增强师生感情交流,在课前候课过程中可以与上课学生进行语言交流，初步了解本班学生对本课即将学习的体育知识和技能基础进行一次了解，也可无形地暗示体育委员做好课前准备，师生之间共同来布置好场地，放置好所需器材，提示学生提前调整好自己的学习情绪，提前进入该节课的学习状态。课前师生之间的有效语言交流可以拉近师生之间的距离，为课堂中创设和谐民主的课堂气氛创造条件。,因此，体育教师要上好每一节课，首先应该要从课前候课做起，把课前候课当作一堂成功体育课的重要部分，切忌临时抱佛脚，切忌等上课铃声响起才匆匆到场地，不打无准备之仗。我们要对学生高度负责、教学认真的职业道德对待体育教学工作，要时刻把握好自己的角色特点，当好一节体育课的出色演员，才能使体育课堂真正起到应用的作用。,学数学教学中如何来引导小学生主动地、创造性地学习数学，是当前小学实施素质教育的大课题。然后，由于传统的原因“老师讲，学生听；老师演示，学生看；老师考，学生背”的现象比较严重，学生被动学习，不会学习，教学效率低，效果差，课业负担重，既影响学生的身心健康，又束缚学生的个性发展和思维发展。特别是农村小学教育处于相对封闭的状况，教学设备和手段滞后，教育观念陈旧，而学生独生子女居多，来源多数是农家子女，家庭经济不富裕，家长文化素质较低，人们按一定传统方式生活，这些客观条件都给学生学习数学带来不利影响。因此，必须改进教学方法，培养学生的创新意识，使学生学会学习，才能适应课题改革的需要，学生的素质才能全面提高。,一、教师教学观念的创新是培养学生创新意识的前提,教学改革的前提就是解放思想，更新观念，实现教学观念的现代化。反思传统的课堂教学状况，我们不难发现，教师未按学生的认识规律组织课堂教学，视学生为盛装知识的“容器”，单纯地进行“灌输式”教学。重教，轻学；重结果，轻过程；重书本知识，轻实践应用；重知识的传授，轻能力的培养。这样教学手段收益不高，显然这种教学方法是过时的，是与素质教育相违背的，培养不了学生创新意识。,作为现代的教师应树立一种创新的观念。在教学中要相信每个学生都具有创新潜能。树立正确的学生观，充分发扬教学民主，创造条件，放手让他们去实践，去探索，他们的个性和才能定能得到发展，那创造性的幼芽就会萌发出来。同时要保护学生的好奇心，好奇心是学生的天性，是创新意识的萌芽，“学起于思，思源于疑”，产生疑问，引起思考，是学习的开始，疑问使学生萌发求知的欲望。无论儿童提出问题正确与否老师都应从正面引导学生积极思考，鼓励他们发表见解，爱护和培养学生的好奇心。,二、求异思维的培养创新是培养学生创新意识的基础,求异思维是一种不依常规地从多种假设和构思中寻求答案的一种思维形式。求异思维是创造思维的核心。正因为求异思维往往产生新奇、独特的见解，这种思维方式不依常规，寻求变异，不受传统知识的束缚，敢于打破固定模式，从而形成新思路、新见解。因此，要发展创造力，培养创新精神，就必须注重求异思维的训练。在课堂教学中，通过开展一题多变、一题多解、一题多编等竞赛活动，创造一个竞争的环境气氛，是有利于激发学生的求异思维，培养学生创新能力。,三、类比联想能力的提升是培养学生创新意识的重点,类比联想是创新的翅膀；是以记忆表象为基础的由某概念引起其他相关概念的心理活动。鲁班发明锯子牛顿发现万有引力现象无一不是他们受外界某一现象的启发，接着进行联想、类比、灵感才产生的。,可见，联想类比可提高思维的灵活性、独创性。是培养学生创新意识的重要方式。从数学学科角度上讲，也是从一个数学问题想到另一个数学问题心理活动，学生通过联想，能够发现新问题，还能通过联想相关均知识创造性地解决当前淤塞难解的问题。加强联想的引导有利于培养学生的创新意识。,例如：在学生学习乘法分配律后安排这样一个习题： ，教师启发学生利用恒等变形，把算式变成符合乘法分配律，然后运用乘法分配律进行简便计算：,（算式恒等变形）,这样通过类比联想开阔了学生的视野，使学生将知识融会贯通，充分利用联想把用学过的知识来解决新问题。会让学生体验到成功的喜悦。,四、质疑习惯的养成是培养学生创新意识的核心,质疑，本身就蕴含思维的火花，也是创新的起点，古人云：“小疑则小进，大疑则大进，不疑则不进。”爱因斯坦曾说：“提出一个问题，往往比解决一个问题更重要，因为解决一个问题，也许只是一个数字上或实验上的技能而己，而提出新问题，新的可能性，从新的角度看新的问题却需要创造性的想象力。”因此，教师要鼓励学生敢于质疑、寻根问底，大胆发表不同的意见，敢于互相争论，在交流和争论中建立自信。另外还要鼓励学生不要被条条框框约束，一个问题要从不同角度多方面的思考。,例如，二年级学习用竖式计算“万以内的加减法”后计算：475+6935+613=，教材选用竖式计算，教师并不满足书上的一种算法，当学生用竖式计算之后，提出质疑，还可以怎么算？当学生思考之后，站起来回答说：“我按照数的组成，先把接近整百或整千的数看做整百、整千进行计算，再加上或减去少加或多加的数，可以口算。即：475+6935+613=400+7000+600+75-65+13=8000+23=8023。最后让学争论哪种算法比较好。这样使课堂气氛热烈，给学生多种思路促使创新能力的萌芽。,五、动机的激发是培养学生创新意识的关键,苏霍姆林斯基说：“在手和脑之间有着千丝万缕的联系，这些联系起着两分面作用，手使脑得到发展，使它更明智；脑使手得到发展，使它变成创造的、聪明的工具，变成思维工具和镜子”。教学时，教师要放手让学生参与操作，通过摆、拼、剪、折、量、捏、切、拆、画等操作实践活动，从而通过学生手、脑并用过程发展学生的创新意识。例如：教学“同分母带分数加法”这部分知识，教与学都没有很大困难，但要真正既理解算理又长智慧的目的，教师在教法上是大有文章可做的。,学生通过自己操作理解把整数部分与分数部分分别合并，再把两部分的结果合起来的算理。从而概括出同分母带分数加法法则。这样使学生在操作过程中形成强烈的创新意向和动机。,注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文,细胞原代培养,一、组织块培养法,实验目的,原代培养方法之一,：,组织块法,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,超净工作台,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,培养箱,CO,2,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,倒置显微镜,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,水浴锅,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,解剖器材,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,玻璃器皿,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,其它器材,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,液与培养液,PBS,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,小牛血清,设备与器材,设备,器械,试剂,材料,怀孕大白鼠,培养要点,一）材料新鲜,二）严格无菌操作,三）剔除脂肪等附着组织,四）组织块剪小（直径5mm）,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,击头致死,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,酒精浸泡,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,送入无菌室,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,再次消毒,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,剪开皮肤、腹肌、腹膜,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,取出胎鼠,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,挑开胎鼠腹腔取出肝组织,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,PBS液冲洗（45次）,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,剔除其它组织,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,PBS液再次冲洗,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,剪碎肝组织,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,将组织移入培养瓶,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,加入培养液37C培养,操作演示,处死,解剖,冲洗,剪碎,培养,观察,一天后倒置显微镜观察,初学者易犯的错误,操作中不更换器械,冲洗次数不够,组织碎片太大,组织块摆放太密,培养液加入太多,初学者易犯的错误,操作中不更换器械,冲洗次数不够,组织碎片太大,组织块摆放太密,培养液加入太多,初学者易犯的错误,操作中不更换器械,冲洗次数不够,组织碎片太大,组织块摆放太密,培养液加入太多,初学者易犯的错误,操作中不更换器械,冲洗次数不够,组织碎片太大,组织块摆放太密,培养液加入太多,初学者易犯的错误,操作中不更换器械,冲洗次数不够,组织碎片太大,组织块摆放太密,培养液加入太多,二、消化培养法,实验目的,掌握消化法培养原代细胞的步骤,设备与器材,设备、器械、试剂、材料都与原代培养基本相同。,新需试剂有,胰蛋白酶液,设备与器材,血球计数板、器,培养要点,肝组织剪碎至1mm,左右。,合适的胰蛋白酶浓度（通常为0.25%）,合适的消化时间：消化时，待组织块变得较疏松，颜色暗白为止（通常为37C 2040分钟之间）,实验材料，前期步骤同细胞原代培养。,将剪碎的鼠肝脏组织进行消化,操作演示,加胰蛋白酶液消化,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,操作演示,37C水浴锅内消化,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,操作演示,过滤,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,操作演示,平衡、离心,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,操作演示,弃胰蛋白酶液，加入培养液,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,操作演示,细胞浓度以5x10 为宜。,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,5,操作演示,分装,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,操作演示,培养,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,操作演示,24小时后倒置显微镜下观察,准备,取材,剪碎冲洗,消化,过滤,离心,加培养液,计数,分装培养,观察,初学者易犯的错误,水浴锅未预热,组织块太大,胰蛋白酶消化,不足或过度,吹打用力过度,初学者易犯的错误,水浴锅未预热,组织块太大,胰蛋白酶消化,不足或过度,吹打用力过度,初学者易犯的错误,水浴锅未预热,组织块太大,胰蛋白酶消化,不足或过度,吹打用力过度,初学者易犯的错误,水浴锅未预热,组织块太大,胰蛋白酶消化,不足或过度,吹打用力过度,细胞传代培养,实验目的,细胞在原培养瓶内分离稀释后传到新培养瓶的操作叫传代。要获得稳定的细胞株或得到大量同种细胞，当培养细胞形成致密的单层后需要进行传代培养。,实验材料,培养瓶里已长成单层的细胞,演示操作,传代前准备,1.预热培养用液,2.用75%酒精擦拭双手和工作台面,3.摆放使用器械,4.点燃酒精灯,5.取出已预热的培养用液,6.从培养箱中取出细胞,7.各种器皿火焰消毒,演示操作,传代前准备,胰蛋白酶消化,1.加入消化液,2.显微镜下观察细胞,3.吸弃消化液，加入培养液,演示操作,传代前准备,胰蛋白酶消化,吹打分散细胞,1.吹打制悬,2.吸细胞悬液入离心管,3.平衡离心,4. 弃上清液，加入新培养液,演示操作,传代前准备,胰蛋白酶消化,吹打分散细胞,分装稀释细胞,1.分装,2.显微镜下观察细胞,演示操作,传代前准备,胰蛋白酶消化,吹打分散细胞,分装稀释细胞,继续培养,用酒精棉球擦拭培养瓶，旋松瓶口，放入CO2培养箱中培养。,注意事项,严格无菌操作,污染细胞,未污染细胞,瓶口碰到酒精灯,X,手在瓶口上方移动,X,注意事项,严格无菌操作,适度消化,未消化细胞,细胞消化过程,细胞计数,实验目的,学习并掌握培养细胞数目的测定方法,学会使用血球计数板,设备与器材,设备、器械、试剂、材料都与传代培养基本相同。,新需试剂有,设备与器材,光学显微镜,设备与器材,台盼蓝,0.4%,实验原理,当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中细胞的数目，即可换算出每毫升悬液中的细胞数目。,操作演示,准备工作,取一瓶传代的细胞，按传代细胞培养方法（消化法）介绍的方法繁殖细胞，待长成单层后以备使用。,操作演示,准备工作,细胞悬液的制备,用0.25%的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液（或Hanks液，PBS等平衡溶液），吹打制成待测细胞悬液。,操作演示,准备工作,细胞悬液的制备,细胞计数,盖好盖玻片,制备计数用的细胞悬液,将细胞悬液滴入计数板,统计四个大格的细胞数,计算细胞悬液细胞数,操作演示,准备工作,细胞悬液的制备,细胞计数,细胞计数要点,初学者易犯的错误,未将悬液吹打均匀,X,初学者易犯的错误,未将悬液吹打均匀,X,盖玻片下有气泡,X,初学者易犯的错误,未将悬液吹打均匀,X,盖玻片下有气泡,X,细胞悬液流入槽中,X,细胞冻存,实验目的,学习掌握细胞冻存技术,了解培养细胞的运输方法,设备、器械和试剂,设备、器械、试剂、材料都与原代培养基本相同。,新需器材、试剂有,液氮罐,-20,C,冰箱,-80,C,冰箱,冻存细胞登记本,手套、冻存管等,甘油、二甲亚砜,实验原理,细胞培养的需要,实验原理,细胞培养的需要,直接冷冻的危害,冰晶形成,实验原理,细胞培养的需要,直接冷冻的危害,细胞冻存的原则,加保护剂：甘油或二甲亚砜（DMSO）可使细胞内冰点下降：膜透性增加。,缓慢冷冻：细胞内水份逐步均匀的减少，避免冰晶大量形成。,冻存方案,标准方案,室温 -25,C,：,降温速率是12,C/min；,25 -100,C：,降温速率是510C/min；,-100C以下：,直接放入液氮中。,标准冻存方案,冻存方案,标准方案,简易冻存方案,简易冻存方案,冻存管用厚棉花分隔，放入盒子中；,置于-20,C冰箱内2小时；,立即转入-80C冰箱内4小时；,再迅速置入-196C液氮内长期保存。,操作演示,细胞冻存,细胞冻存,一、筛选细胞,1、观察细胞,2、做标记,3、换培养液,细胞冻存,一、筛选细胞,二、细胞消化（第二天）,细胞消化,方法同传代培养细胞消化。,细胞冻存,一、筛选细胞,二、细胞消化（第二天）,三、细胞离心,细胞离心,按传代培养离心标准，收集细胞。,细胞冻存,一、筛选细胞,二、细胞消化（第二天）,三、细胞离心,四、细胞计数,细胞计数,细胞冻存,一、筛选细胞,二、细胞消化（第二天）,三、细胞离心,四、细胞计数,五、分装细胞,1、弃去上清液,2、加入冻存液,3、装入冻存管,4、用棉花包装,细胞冻存,一、筛选细胞,二、细胞消化（第二天）,三、细胞离心,四、细胞计数,五、分装细胞,六、简易冻存,1、-20,C,冰箱预冻,2、-80,C,冰箱预冻,3、作好标签,4、液氮罐中冻存,5、登记入册,冻存注意事项,细胞复苏,实验目的,掌握细胞复苏的方法,设备、器械和试剂,同上述细胞冻存,实验原则,操作演示,一、实验前准备,查找电脑上细胞记录,冻存本上查找细胞,水浴锅37,C预热,操作演示,一、实验前准备,二、取出冻存管,寻找标签,取出冻存管,操作演示,一、实验前准备,二、取出冻存管,三、迅速解冻,在水浴锅内迅速解冻,酒精棉球擦拭冻存管,操作演示,一、实验前准备,二、取出冻存管,三、迅速解冻,四、平衡离心,平衡离心,按传代培养离心标准，收集细胞。,操作演示,一、实验前准备,二、取出冻存管,三、迅速解冻,四、平衡离心,五、制备细胞悬液,吸出上清液,加入培养液吹打制悬,操作演示,一、实验前准备,二、取出冻存管,三、迅速解冻,四、平衡离心,五、制备细胞悬液,六、细胞计数,细胞计数详细方法参考细胞计数实验,细胞稀释浓度 5 x 10 /ml,5,操作演示,一、实验前准备,二、取出冻存管,三、迅速解冻,四、平衡离心,五、制备细胞悬液,六、细胞计数,七、培养细胞,分装培养,完,56,、书不仅是生活，而且是现在、过去和未来文化生活的源泉。,库法耶夫,57,、生命不可能有两次，但许多人连一次也不善于度过。,吕凯特,58,、问渠哪得清如许，为有源头活水来。,朱熹,59,、我的努力求学没有得到别的好处，只不过是愈来愈发觉自己的无知。,笛卡儿,60,、生活的道路一旦选定，就要勇敢地走到底，决不回头。,左,拉,