微生物的测医学宣教培训课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物的测医学宣教,*,微生物的测医学宣教,微生物的测医学宣教,一、分类,碳酸饮料(品)(汽水)类,果汁(浆)及果汁饮料(品)类,蔬菜汁及蔬菜汁饮料(品)类,含乳饮料(品)类,植物蛋白饮料(品)类,瓶装饮用水类,茶饮料(品)类,固体饮料(品)类,特殊用途饮料(品)类,微生物的测医学宣教,2,一、分类碳酸饮料(品)(汽水)类 微生物的测医学宣教2,总酸度、pH值、还原糖含量,食品中微生物的检测,细菌总数,大肠菌群数,食品添加剂的检测,甜味剂糖精钠、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜。,防腐剂苯甲酸、山梨酸,微生物的测医学宣教,3,总酸度、pH值、还原糖含量微生物的测医学宣教3,二、微生物检验,1、细菌总数,菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。它可以反应食品的新鲜度、被细菌污染的程度、生产过程中食品是否变质和食品生产的一般卫生状况等。因此它是判断食品卫生质量的重要依据之一。,微生物的测医学宣教,4,二、微生物检验1、细菌总数微生物的测医学宣教4,流程,检样做成几个适当倍数的稀释液选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内每皿内加入46适量营养琼脂菌落数报告,微生物的测医学宣教,5,流程检样做成几个适当倍数的稀释液选择2-3个适宜稀释度各,（1）样品的无菌处理,以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。,固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。,微生物的测医学宣教,6,（1）样品的无菌处理以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪,（2）稀释、接种,用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。,微生物的测医学宣教,7,（2）稀释、接种用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿,微生物的测医学宣教培训课件,根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择23个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。,稀释液移入平皿后，应及时将凉至46营养琼脂培养基可放置在（461）0C）水浴锅内保温注入平皿15ml，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。,等琼脂凝固后，翻转平板，置（361）0C恒温箱内培养（482）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。,微生物的测医学宣教,9,根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择23个适宜,菌落计数方法,做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。,平板菌落数的选择,选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。,微生物的测医学宣教,10,菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检,稀释度的选择,应选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。,若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。,若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。,若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。,微生物的测医学宣教,11,稀释度的选择应选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘,简便方法：菌落总数测定纸,微生物的测医学宣教,12,简便方法：菌落总数测定纸微生物的测医学宣教12,使用方法,微生物的测医学宣教,13,使用方法微生物的测医学宣教13,2、大肠菌群的测定,大肠菌群是指在37、24h能发酵乳糖，产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰式阴性无芽孢杆菌。,大肠菌群数以每100ml（g）检样中大肠菌群最可能数（MPN）表示。,微生物的测医学宣教,14,2、大肠菌群的测定大肠菌群是指在37、24h能发酵乳糖，产,流程,乳糖胆盐发酵管变黄浑浊，,微生物的测医学宣教,15,流程乳糖胆盐发酵管变黄浑浊，微生物的测医学宣教15,培养基配方,乳糖胆盐发酵双料:,(1)蛋白胨 40g,(2)牛胆盐 10g,(3)乳糖 20g,(4)蒸馏水 1000ml,(5)溴甲酚紫（1.6g/t）2ml,(6)PH值7.2-7.4,乳糖发酵管,(1)蛋白胨 20g,(2)乳糖 10g,(3)蒸馏水 1000ml,(4)溴甲酚紫 （1.6g/t）1ml,(5)PH值7.2-7.4,微生物的测医学宣教,16,培养基配方乳糖胆盐发酵双料:乳糖发酵管微生物的测医学宣教16,伊红美蓝培养基：,成分：,蛋白胨10g,乳糖10g,磷酸氢二钾2g,琼脂 17g,2伊红水溶液 20ml,0.65美蓝水溶液 13ml,蒸馏水 1000ml,pH为7.1,制法：,将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于热蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50-55，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。,微生物的测医学宣教,17,伊红美蓝培养基：微生物的测医学宣教17,伊红美兰琼脂平板,划线培养,大肠菌群的典型菌落,（1）深紫黑色，具有金属光泽的菌落,（2）紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落,（3）淡紫红色、中心色较深的菌落。,微生物的测医学宣教,18,伊红美兰琼脂平板划线培养大肠菌群的典型菌落（1）深紫黑色，具,革兰氏染色阴性菌,微生物的测医学宣教,19,革兰氏染色阴性菌微生物的测医学宣教19,纸片法,微生物的测医学宣教,20,纸片法微生物的测医学宣教20,MPN表,阴性管数 MpN 95可信限,100 mL(g),1mL(g)，*30.1mL(g)*30.0lmL(g)*3 下限上限,0 0 0 30 5 ,0 0 1 30 ,0 0 2 30 90 ,0 0 3 30 ,0 1 0 30 5 ,0 1 1 60 130,0 1 2 90 ,0 1 3 120 ,续表,阳性管数 MPN 95可信限,100mL(g),1mL(g)3 0.l mL(g)x3 0.0lmL(g)X3 下限上限,0 2 0 60 ,0 2 1 90 ,0 2 2 120 ,0 2 3 160 ,0 3 0 90 ,0 3 1 130 ,0 3 2 160 ,0 3 3 190 ,1 0 0 40 5 200,1 0 1 70 10 210,1 0 2 110 ,1 0 3 150 ,1 1 0 70 10 230,1 1 1 110 30 360,1 1 2 150 ,1 1 3 190 ,1 2 0 110 30 360,1 2 1 150 ,1 2 2 200 ,1 2 3 240 ,1 3 0 160 ,1 3 1 200 ,1 3 2 240 ,1 3 3 290 ,2 0 0 90 10 360,2 0 1 140 30 370,2 0 2 200 ,2 0 3 260 ,2 1 0 150 30 440,2 1 1 200 70 890,2 1 2 270 ,2 1 3 34o ,微生物的测医学宣教,21,MPN表,革兰氏染色,革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。2）草酸铵结晶紫染1分钟。3）自来水冲洗。4）加碘液覆盖涂面染1分钟。5）水洗，用吸水纸吸去水分。6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。7）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。,微生物的测医学宣教,22,革兰氏染色革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步,分光光度计使用方法,微生物的测医学宣教,23,分光光度计使用方法微生物的测医学宣教23,微生物的测医学宣教,24,微生物的测医学宣教24,2使用方法,（1）预热仪器 将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。,（2）选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长。,（3）固定灵敏度档 使用时，调到“1”挡。,（4）调节T=0%轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为“00.0”，（此时试样室是打开的）。,（5）调节T=100%将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。,（6）吸光度的测定 将选择开关置于“A”，盖上试样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后，打开试样室盖，切断光路。,重复上述测定操作1-2次，读取相应的吸光度值，取平均值。,（8）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架用软纸擦净。,3注意事项,（1）为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开，使光路切断，以延长光电管的使用寿命。,（2）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。,（3）比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。,微生物的测医学宣教,25,2使用方法微生物的测医学宣教25,