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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,菊花的组织培养,制备,MS,固体培养基,外植体消毒,接种,培养,栽培,实验具体操作过程,移栽,实验具体操作过程,（一）制备,MS,固体培养基,MS,培养基包括,20,多种,营养成分，实验室一般使用,4,。,C,保存配制好的培养基母液来制备。,1,、配置各种母液,无机物中大量元素浓缩,10,倍，微量元素浓缩,100,倍，常温保存,激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按,1mg/ml,的质量浓度单独配制成母液,用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量,实验具体操作过程,2,、配置培养基,定容,调,PH,培养基的分装,实验具体操作过程,实验具体操作过程,3,、灭菌,分装好的培养基连同其他器械一起进行,高压蒸汽灭菌,。,注意：,温度为,121,时，维持,15-20,分钟。若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。,某些生长调节剂如赤霉素等以及某些维生素遇热是不稳定的，不能同培养基一起高压灭菌，而需要进行,过滤灭菌,。,实验具体操作过程,1,、选材：,菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝,（二）外植体消毒,考虑的因素,说,明,外植体的年龄,选择,幼嫩的组织或器官,作为外植体,外植体的大小,选择,大小适中,的作为外植体,外植体所在部位,选择,芽尖、根尖或幼嫩的茎,作为外植体,外植体外观形态,选择,表面相对光滑易消毒,的作为外植体,2,、表面消毒,流水冲洗,菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗,20min,左右,酒精处理,无菌水冲洗,用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为,70,的酒精中摇动,2,3,次，持续,6,7s,，立即将外植体取出，在无菌水中清洗,氯化汞（升汞）,无菌水冲洗,取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为,0.1,的氯化汞溶液中,1,2min,，取出后在无菌水中至少清洗,3,次，漂净,消毒液,实验具体操作过程,流水冲洗,实验具体操作过程,实验具体操作过程,（三）接种,1,、接种室消毒,污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用,70,的酒精,喷雾使空气消毒，酒精擦洗工作台并用紫外线照射,20,分钟。,2,、无菌操作要求,操作要在,酒精灯火焰旁,完成，每次使用器械后，都需要用,火焰灼烧灭菌,，接种后立即盖好瓶盖。,实验具体操作过程,插入时应注意方向，,不要倒插,，茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分。,3,、材料的切取和接种,实验具体操作过程,进行外植体的接种,接种前用体积分数为,70%,的酒精将工作台擦拭一遍，打开紫外灯照射,20,分钟。工作台消毒后，首先点燃酒精灯。,酒精摇动,倾倒酒精,无菌水冲洗,升汞消毒,倾倒升汞,无菌水冲洗,特别提醒：,接种过程必须始终在酒精灯旁进行，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，操作过程中避免双手从培养皿上方移动。,特别提醒：,每瓶内接种材料不宜过多（建议,4-5,个），彼此之间留出一定空间，从而避免互相污染。,思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？,每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。,实验具体操作过程,实验具体操作过程,（四）培养,无菌箱中培养，定期消毒，保持适宜的温度，光照,接种后的锥形瓶放在培,养箱或培养室中培养。,培养条件：,18-22,，,每日光照,12,小时,。,实验结果,5-7,天，外植体膨胀、生长，颜色变浅，若出现染菌，及时转瓶。,实验结果,2-3,周，愈伤组织开始形成。,染菌,5-7,天后,染菌,1-2,周后,实验结果,3-5,周之后，诱导出的新叶片和芽。,实验具体操作过程,（五）移栽,移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日,1,、打开封口膜,2,、清洗转移,用流水清洗根部的培养基，,将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下,生活一段时间,实验具体操作过程,珍珠岩：,固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性,好，适合栽培。,蛭石,是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从外形上它看上去像云母。蛭石是一定的花岗岩水合时产生的。它一般与石棉同时产生。由于蛭石有离子交换的能力，它对土壤的营养有极大的作用。,蛭石的化学式为（,Mg,，,Ca,）,0.7,（,Mg,，,Fe,，,Al,）,6.0,（,Al,，,Si,）,8.0,（,OH4.8H2O,）。,实验具体操作过程,（六）栽培,幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花,幼苗的移栽和栽培,无菌条件如何保证？,需要保证无菌条件步骤,关键操作,培养基及实验器材的灭菌,高压蒸汽灭菌,灭菌干燥后直接拿到无菌操作台中,外植体的消毒,酒精、,升,汞,、,无菌水彻底清洗,接种的,无菌操作,始终在酒精灯旁进行,每次使用器械后，都需要浸泡在,95%,的酒精中,每次使用器械前，都需要用火焰灼烧灭菌,操作过程中避免双手从培养皿上方移动,每瓶内接种材料不宜过多,培养箱,中的培养,观察时不打开封口膜,手持锥形瓶锥形瓶观察时正握,发现染菌外植体，及时转瓶，打开封口膜前先高压蒸汽灭菌,三、课题延伸,1,、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养,2,、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季,总结植物组织培养过程,:,离体组织或细胞,植物体,脱分化,细胞分裂素生长素,愈伤组织,芽,根,细胞分裂素,生长素,细胞分裂素,生长素,再分化,本课题内容小结,菊花组织培养,基础知识,实验操作,植物体的组织培养,影响组织培养的因素,细胞分化,细胞全能性,组织培养过程,营养,激素,环境条件,MS,固体培养基制备,外植体消毒,接种,培养,移栽,栽培,
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