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Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,BEA Confidential. |,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,BEA Confidential. |,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,BEA Confidential. |,1,小组成员：郑丽金,施桂姣,张宁,指导老师：汪世华 教授,T-2,毒素诱导,BALB/C,小鼠肝脏损伤差异表达蛋白质分析及其意义的初步研究,2,课题的研究意义,4,结果分析与讨论,3,实验的技术路线,提 纲,5,实验展望,1,课题的相关背景,T-2,毒素是镰刀菌属真菌,(,主要是三线镰刀菌,Fusarium trieinetum),的一种代谢产物，是隶属单端孢霉烯族霉素毒性最强的一种毒素，广泛存在于粮食作物及其半成品中。,1,课题的相关背景,T-2毒素是由Bamburg于1968年首次别离提纯并确认其化学结构，属A组单端孢霉烯族毒素。它是由镰刀菌产生的一种有毒代谢产物，其化学名称为4,15-二乙酰氧基-8-12,13-环氧单端孢霉-9-烯-3-醇 。,人畜误食污染的谷物后，可引起呕吐、腹泻、发烧等急性中毒病症，严重时损害造血系统，造成人畜死亡。1973年联合国粮农组织FAO和世界卫生组织WHO在日内瓦召开的联席会议上，把T-2毒素同黄曲霉素一样作为自然存在的最危险的食品污染源。,本研究通过蛋白质组学比较正常和染毒情况下小鼠肝脏蛋白质的差异表达情况，找到与病理改变有关的一系列疾病特异性差异蛋白质。,本实验以昆明鼠作为试验模型，不但大大降低了试验本钱，而且为T-2毒素致病机理的研究指明方向，为完善由T-2毒素诱导的疾病发生信号通路提供新的信息。,2,课题的研究意义,3,实验的技术路线,T-2,毒素配制,双向凝胶电泳,提取肝脏总蛋白,灌胃感染小鼠,PD Quest,软件分析蛋白质,寻找差异蛋白,4,结果分析与讨论,4.1 经灌胃十六周后小鼠状态比较,4.2 不同组小白鼠的肝脏比较,4.3 蛋白质标准曲线制作及不同组鼠肝蛋白浓度测定,4.4不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳分析,4.1,小鼠免疫,图5不同组小白鼠的体形比较图,经灌胃十六周后小鼠状态比较,A,B,C,4.2 不同组小白鼠的肝脏比较,C,图,6,不同组小白鼠的肝脏比较图,A,B,4.3,蛋白质标准曲线制作及不同组鼠肝蛋白浓度测定,图,7 Bradford,法测蛋白质标准曲线,根据蛋白质标准曲线求出,A,、,B,、,C,三组小白鼠肝脏蛋白的浓度分别为,2.4 g/L,，,5.2 g/L,，,6.3 g/L,。,4.4,不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳分析,图,8,不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳图,4.4.1,双向电泳差异图谱,IEFpH 3.5-10：pH 5-8=1：3,A,对照组,SDS-PAGE,B,小剂量毒素组,图,8,不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳图,C,大剂量毒素组,图,8,不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳图,三组鼠肝蛋白的2-DE图谱比较分析,图9 不同组小白鼠肝脏蛋白局部新增差异表达蛋白图谱放大比较图,A B C,A B C,图7 不同组小白鼠肝脏蛋白含量降低差异表达蛋白图谱放大比较图,A B C,图7 不同组小白鼠肝脏蛋白含量降低差异表达蛋白图谱放大比较图,图10 不同组小白鼠肝脏蛋白局部消失差异表达蛋白图谱放大比较图,A B C,A B C,图10 不同组小白鼠肝脏蛋白局部消失差异表达蛋白图谱放大比较图,5.,实验展望,将对照组、小剂量毒素组和大剂量毒素组小白鼠肝脏蛋白的2-DE图谱进行比较分析，三者的主要蛋白质组分非常相似，但也存在大小和有无的差异，本研究共发现9个差异蛋白质点。,下一步我们将采用质谱分析得到蛋白的氨基酸序列，用生物信息学软件分析预测其结构及功能。,这能够为系统地揭示,T-2,毒素的致病机制铺平道路，为完善肝癌的发生通路提供有益信息，为疾病的诊断提供新的分子标记，为治疗和药物开发提供有效的靶标，具有重要的理论和实际指导意义。,在汪世华老师的悉心指导和实验室师兄、师姐们的帮助下，本实验得以顺利完成，在此向他们表示衷心的感谢！,致 谢,Thanks For Your Attention !,
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