血小板抗原抗体检测及其在血液病科临床应用ppt课件

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录,/,contents,血小板抗,原,血小板抗体与疾,病,血小板抗体检测的临床意义和临床应,用,04,临床治疗方案参,考,血小板简介,血小板：,D:2-5um,V:,红细胞*,1/5,功能：促进止血和加速凝血,正常范围：,100-30010,9,/L,骨髓干细胞,胞质块脱落,来源,：,多功能祖细胞,巨核祖细胞,幼巨核细胞,巨核细胞,血小板,血小板形态,静息状态,活化状态,血小板抗原,血小板“非特异性”抗原,血小板“特异性”抗原,HPA,抗原,HLA-,类抗原,ABH,抗原,血小板具有,HLA-,类抗原（,HLA-A,、,HLA-B,抗原和少量,HLA-C,抗原），无,HLA-,类抗原。故输注血小板要比器官移植所需配型简单。,血小板个体间,HLA-,类抗原位点数差别不大。,每个血小板上至少有,20000,个,HLA,抗原位点。,HLA,抗原,部分为血小板的固有蛋白，另一部分从血浆中吸附。,血小板上的,ABH,抗原个体之间表达不同，约,5%,的非,O,型个体为,A,抗原或,B,抗原的高表达者。,故血小板输血应同型输注；抗体检测应采用,O,型血小板，以排除,ABO,系统抗体的干扰。,GPIb,、,GPIIb/IIIa,、,GPIa/Iia,、,CD109,等也携带少量,ABH,抗原,ABH,抗原,主要存在于血小板膜的,GP,分子上，也少量存在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。,1990,年国际输血协会血小板免疫学工作组提出了,HPA,命名，以发现的时间顺序排列：,HPA-1,、,HPA-2,、,HPA-3,等系统。,HPA,抗原,已确定了,33,个,HPA,，其中,12,个抗原为双等位基因表达（,HPA-1,-2,-3,-4,，,-5,和,-15,）。其中高频率抗原命名,a,，低频率抗原命名,b,。其余,21,个抗原为低频率抗原，尚未发现对偶抗原，命名为,bw,。,单核苷酸多态性（,SNP,）,:33,个,HPA,中均已搞清楚基因背景，其中,32,个,HPA,的多态性型是由一个氨基酸置换所致，而这又是由编码血小板膜糖蛋白（,GP,）基因的一个核苷酸的不同所致。,HPA-14bw,不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在,AAG1929-31,。,HPA,抗原,HPA,抗原,HPA,抗原,血小板抗原定型,血清学定型,即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原,缺点：特异性抗体来源困难,-,人血清中血小板抗体通常为多特异性,-,单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有,HPA-1a,单抗，,无其它,HPA,单抗。,基因定型,限制性片段长度多态性分析（,RFLP,）,序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应,(PCR-SSO),序列特异性引物聚合酶链反应,(,PCR-SSP,),用途：,（,1,）健康人群,HPA,基因分型，建立已知,HPA,基因型的血小板献血员库。,（,2,）检测受者,HPA,基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其,HPA,基因型相,匹配的血小板供者。,（,3,）检测患者,HPA,基因型，辅助临床胎儿,/,新生儿免疫性血小板减少症、输,血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。,（,4,）对特定区域或种族人群,HPA,基因分型，可为人类遗传学研究提供相关,资料和证,据,。,1aa,2aa,3ab,4aa,5aa,6aa,7aa,8aa,9aa,10aa,11aa,12aa,13aa,14aa,15ab,16aa,17aa,血小板抗原定型,血小板抗体的产生方式,以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上的相应抗原结合，导致血小板被内皮网状系统清除。,怀孕,移植（骨髓、器官）,药物、自身免疫,输血小板、红细胞（尤其是没有滤白的红细胞）,血小板抗体与部分相关疾病,抗 体,分 类,疾 病,HLA / HPA,抗 体,其 它 抗 体,同 种,抗 体,格兰茨曼血小板功能,不全病,抗,G,Pb/a,抗体,同 种 异,体 抗 体,新生儿同种异体免疫,性血小板减少症,HPA1a(78%), HPA5b(19%),HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw,Anti-CD36,血小板输注无效症,HLA-I,抗体,5080%,HPA,1725%(,日本人为,HPA-2b), HPA-15,anti-CD36,极少数为,ABO,抗体,血小板输血后紫癜,HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15,anti-CD36,少数为抗,GPIa/IIa,抗体,被动同种异体免疫,性血小板减少症,HPA-1a,HPA-5b,移植相关同种异体,免疫性血小板减少症,HPA-1a,HPA-3,HPA-5b,自 身,抗 体,自发性血小板减少症,多数位于,GP,b/a,GP,Ib/IX/V,，少数位于,GP,IV/V,和,GPIa/IIa,继发于母体自发性,血小板减少症,同上,药物依,赖性抗,体,奎宁,/,奎尼丁抗体,所致疾病,抗原位于,GP,b/a,和,GP,Ib/IX,肝素抗体所致疾病,抗原表位是,PF4,血小板抗体检测常用方法,功能性试验,酶标法,荧光法,固相凝集法,应用范围,抗体检测,交叉配型,性能,灵敏度,低,高,极高,高,特异性,不好,好,一般,较好,反应时间,长,2h,2h,1h,所用仪器,不定,酶标仪,荧光显微镜,或流式细胞仪,平板离心机,16th,版,AABB,评价,未提及,特异性鉴定的可靠方法,敏感性高,特异性不足,血小板交叉配型应用最为广泛的方法,方法,指标,血小板抗体检测方法,-,固相凝集法,血小板抗体筛检，,包括,HLA,抗体、,HPA,抗体及其它血小板反应性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。,血小板交叉配型,，为患者筛选相容性的血小板或血小板供者，避免血小板输注无效症的发生。,患者自身抗体检测,，包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。检测血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后，直接加入抗人,IgG,和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗体可通过患者自身血小板和血清反应来检,测,。,用途：,血小板抗体检测方法,-,固相凝集法,1.,预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板输注有效率，防止血小板输注无效症的发生。,2.,自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜等。,血小板抗体检测的临床意义,3.,药物性抗体的检测：某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等，选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能，使血小板的生成减少，同时应用某种药物后，产生药物相关抗体，药物抗体复合物附着血小板膜上与补体结合，使血小板聚集破坏，一些药物进入人体后也可直接破坏血小板，造成血小板破坏增多，从而引发血小板减少。,血小板抗体检测临床意义,预防血小板输注无,效,自身免疫性疾病的辅助诊,断,药物性抗体检,测,血小板抗体检测临床应用,预防血小板输注无效,现状,1.,很多地区成分血不滤白；,2.,血小板盲输现象非常普遍；,血液病患者输血小板时进行配型的重要性！,预防血小板输注无效,困惑,患者抗体阳性，没有配合的血小板怎么办！,预防血小板输注无效,反向推动血站配合临床供应配型相合的血小板,提前告知患者输注风险,针对患者个体状况采取针对性临床干预,血小板输注无效的危害,1,）患者发生免疫反应，加重病情。,2,）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。,3,）浪费财力、物力、宝贵的血小板资源。,4,）存在医疗纠纷隐患。,5,）不利于采供血机构和医疗机构业务水平的提高。,预防血小板输注无效,血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防,血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防,血小板输血采用随机供者血小板有效率不超过,30%,；,采用交叉配型相容性血小板有效率为,92%,，而对于重度血小板免疫患者，输注相容性血小板有效率为,70%,。,血小板交叉配型意义,预防血小板输注无效,对,844,例贫血、白血病、血小板减少及肿瘤等疾病患者进行血小板抗体检测。其中有效病例,766,例，其余,78,例患者病例不祥。检测结果统计如下：,病例数,男性,女性,平均年龄,血小板抗体阳性数,抗体阳性率,贫血,（包括再障和溶血性贫血）,303,140,163,45.95,51,16.8%,白血病,99,52,47,41.60,25,25.25%,血小板减少,27,11,16,42.30,9,33.33%,肿瘤,60,21,39,56.33,1,1.67%,出血,90,42,48,52.34,6,6.67%,骨髓纤维化及,骨髓异常综合症,19,12,7,55.74,7,36.84%,其它病症,168,79,89,48.12,13,7.74%,总计,766,357,409,47.54,112,14.62%,临床数据：,预防血小板输注无效,海南省人民医院,共检测,102,例患者，阳性,18,例，平均阳性率,17.6%,预防血小板输注无效,9,例抗筛阳性患者，,8,例寻找到了相合的血小板，输注效果良好。,中华临床医师杂志,2012/01,预防血小板输注无效,57,例血小板输注无效患者中，血小板抗体阳性患者为,21,例（,37,）,采用固相凝集法对有血小板抗体的21例患者进行输注前交叉配型来筛选血小板供者。选择交叉配型阴性或反应最弱的的供者血小板给患者输注。21例患者输注相容性血小板后，所有患者,1h,CCI,7.510,9,，,24h,CCI,4.510,9,，有效率为,100,。,吉林大学第三医院,中国实验诊断学,2013,年第,1,期,预防血小板输注无效,广州血液中心,95例血小板输注患者经固相凝集法检测，血小板抗体,阳性,32,例，抗体阳性率为,33.7%,。,将血小板抗体阳性患者随机分成未配型组和配型组，各,16,例。,广东医学院学报,2012/,1,预防血小板输注无效,进行血小板抗体检测，可以辅助诊断血小板免疫性疾病，如,ITP,。,自身免疫性疾病的辅助诊断,一般认为，,ITP,的发病机制包括血小板自身抗体导致的血小板破坏和清除。,检测患者血小板自身结合抗体，了解血小板是否在体内致敏，是血小板自身抗体导致,ITP,发生的,直接证据,检测患者血小板自身游离抗体，了解血浆中的自身抗体是否能在体外与患者自身血小板结合，是血小板自身抗体导致,ITP,发生的,间接证据,自身免疫性疾病的辅助诊断,血液病患者血小板抗体检测及其与血小板输注疗效的相关性研究,夏世勤 苏莉 刘秋洪 杨眉,安邦权 王茂玲 于慧芳,1,贵州省人民医院输血科 ，,2,遵义医学院检验系，,结论 血小板抗体的产生与血小板输注疗效密切相关，血小板抗体是直接影响血小板输注效果 的重要免疫因素之一 ；,血液病患者的病因与血小板抗体的产生有一定相关性,； 血小板抗体的产生与患者性别无关 ； 血小板输注次数与血小板抗体产生密切相关： 血小板抗体的产生与输注的血小板种类有关，单采组明显低于浓缩组。,医学检验, 2013,年,8,月第,2O,卷第,22,期,流式细胞技术检测血小板相关抗体在,ITP,诊断中的应用研究,吴国才，王珍,(,广东医学院附属医院 血液内科 ，广东 湛江,524001),摘要 ：目的 探讨流式细胞技术检测血小板相关抗体在,ITP,诊断中的意义 。方法 选择,2012,年,5,月至,2013,年,6,月在我院血液科住院的,3O,例,ITP,患者为观察组,同期本院健康体检正常者,3O,例为对照组，采用流式细胞技术检测两组对象的外周血血小板相关抗体,PAIg(PAIgG,、,PAIgM,、,PAIgA ),水平 。结果,FCM,检测观察组患者血小板抗体 ，,PAIgG,阳性率为,7O,平均荧光强度为,(25.154-2.61),，对照组平均荧光强度为 士,0.54),两组比较有显著性差异,(P O.05);,观察组,PAIgM,阳性率为,8O,，平均荧光强度士,2.25),，对照组平均荧光强度为,(5.184-0.58),，两组 比较有显著性差异,(P 0.05),。结论,流式细胞仪检测血小板相关抗体 在,ITP,诊断中具有重要的临床意义,中国实验诊断学,2O14,年,6,月第,18,卷第,6,期,自身免疫性疾病的辅助诊断,许多药物会导致血小板减少，常见的有肝素、奎宁、奎尼丁等，均会诱导产生药物依赖性血小板抗体，从而产生血小板减少症,。,药物性抗体产生的机制尚不完全明了。目前认识,的产生机制主要有：,免疫复合物机制,：药物与抗体结合形成免疫复合物,，,与血,小板上的,Fc,受体结合，介导血小板的破坏。,半抗原机制,：药物小分子与血小板膜蛋白结合，形成新的,抗原，刺激免疫系统产生抗体，从而破坏血小板。,药物性抗体检测,血液科患者可能产生药物性抗体的用药：,抗生素类：,头孢他啶、头孢曲松、磺胺类、万古霉素,镇痛剂,：芬太尼、布洛芬、对乙酰氨基酚,消化系统用药,：雷尼替丁、,心血管系统用药,：,ACEI,、,阻滞剂,抗肿瘤药,：奥沙利铂,2. MF Leach.,Detection of drug-dependent platelet antibodies by use of solid-phase red cell adherence assay.,British Journal of haematology,1997,97,755-761.,1. Alan D. Michelson,Platelets, Third Edition,，,Chapter 42,药物性抗体检测,怀疑患者因应用药物而导致血小板减少症时，应准备相应的药物。如果为液体剂型，可以直接使用。如果为固体剂型，需要将其破碎、溶解于蒸馏水中。,对于免疫复合物机制，可以将药物直接加入待检标本中；对于半抗原机制，可将其加入,0.5%,缓冲液中。,检测时加入药物的浓度，应参照相应药物的药代动力学数据，选用下列三个浓度：,1.,略低于谷浓度,2.,峰浓度,3.,峰浓度的,5-10,倍。,药物性抗体检测,对照标本与血小板,无药物性血小板减少症的健康人标本，作为本实验的对照标本。,4-6,人份混合，,O,型血小板。该血小板与待检血小板做配型实验，结果应为阴性。,药物性抗体检测,每一个标本使用三条试剂，一条用于免疫复合物机制，两条用于半抗原机制。,浓度,1,浓度,2,浓度,3,浓度,1,浓度,2,浓度,3,PC,NC,免疫复合物机制,半抗原机制,对 照 标 本,阳 性 对 照,阴 性 对 照,检 测 标 本,药物性抗体检测,操作步骤：,免疫复合物机制,1.,将血小板包被在微孔板上，洗板,3,次,2.,加入两滴低离子强度溶液,3.,加入两滴已加入不同浓度药物的待检标本（同时加入不添,加药物的待检标本作为对照）,4.,向阳性对照、阴性对照对照孔中分别加入试剂盒中的阳性,对照、阴性对照,5. 37,气育,45,分钟,6.,洗板,5,次,7.,立即加入抗人,IgG,及指示红细胞，混匀,8.,离心，观察结果,药物性抗体检测,操作步骤：半抗原,机制,1.,将血小板包被在微孔板上，洗板,3,次,2.,加入两滴低离子强度溶液,3.,加入,三,滴已加入不同浓度药物的,BSA,溶液,4. 37,气育,30,分钟,5.,洗板,3,次,6.,向,相应孔中加入两滴低离子强度溶液，待检标本、对照表本；,阳性对照、阴性对照对照孔中分别加入试剂盒中的阳性对照、阴性对照,（每种药物浓度均做阳性对照、 阴性对照）,7. 37,气育,45,分钟,8.,洗板,5,次,9.,立即加入抗人,IgG,及指示红细胞，混匀,10.,离心，观察结,果,药物性抗体检测,血小板抗体相关的血小板免疫性疾病的治疗推荐使用大剂量丙球或糖皮质激素。,治疗方案应结合患者及其它合并症综合考虑。有出血倾向者推荐以下治疗方案：,（,1,）轻微出血倾向：使用激素者维持之前用量。,（,2,）明显出血倾向：起始剂量为泼尼松,1020 mg/d,，起效后逐渐减至维持量,510 mg,。,（,3,）首次诊断者出现明显血小板减少及出血倾向：起始剂量为泼尼松,0.51 mg/,（,kg,d,），血小板计数维持（,2030,）,10,9,/L,以上且出血倾向改善后,2,周可,逐渐减量。,（,4,）严重出血倾向：期待快速起效时，可考虑大剂量的丙球,0.4 g/,（,kg,d,）持续,35 d,，或甲基泼尼松龙,1 g/d,持续,3 d,，同时可输注血小板。,（,5,）糖皮质激素和丙球可同时使用。,临床治疗方案参考,Thank You !,