药物代谢动力学在药物分析中应用沈阳药科大

Click to edit Master title style,药物代谢与药物动力学实验室,LC/MS,n,在药物分析中的应用,Unknown User:,沈阳药科大学 钟大放,LC/MS,n,在药物分析中的应用,合成产物结构鉴定,鉴定伪劣药品,药物中毒检测,天然产物组分分析,药物动力学分析,药物代谢产物鉴定,Finnigan LCQ,液相色谱-离子阱质谱联用仪,1997年12月安装,合成产物结构鉴定,西地那非衍生物结构鉴定,衍生物,A,衍生物,B,西地那非衍生物,A,的多级质谱,m/z 487,西地那非衍生物,B,的多级质谱,m/z 487,Adefovir,抗,HIV,病毒,抗乙肝病毒,生理,pH,下解离,口服不吸收,阿地福韦结构及药理作用,阿地福韦衍生物结构,阿地福韦双吡呋酯,阿地福韦单吡呋酯,阿地福韦,Finnigan LCQ,液相色谱-质谱联用仪（离子阱质谱仪）,电喷雾离子化源（,ESI）,源电压：4.2,kV,毛细管温度：180,C,正离子方式检测,药物用甲醇溶解，经注射泵进样,质谱条件,阿地福韦一级全扫描质谱图,阿地福韦二级全扫描质谱图,阿地福韦三级全扫描质谱图,阿地福韦单吡呋酯一级全扫描质谱图,阿地福韦单吡呋酯二级全扫描质谱图,阿地福韦单吡呋酯三级全扫描质谱图,阿地福韦单吡呋酯四级全扫描质谱图,阿地福韦单吡呋酯五级全扫描质谱图,阿地福韦双吡呋酯一级全扫描质谱图,阿地福韦双吡呋酯二级全扫描质谱图,阿地福韦双吡呋酯三级全扫描质谱图,阿地福韦双吡呋酯四级全扫描质谱图,阿地福韦双吡呋酯五级全扫描质谱图,ESI,质谱断裂途径设想,质谱断裂机理,ESI,质谱断裂机理验证,阿地福韦衍生物,A：,二级全扫描质谱图,ESI,质谱断裂机理验证,阿地福韦衍生物,B,：,二级全扫描质谱图,ESI,质谱断裂机理验证,结论,电喷雾质谱的,MS,n,断裂主要丢失中性分子；,含磷酸酯侧链的结构可能在气态下发生分子内重排；,在,MS,n,条件下，碳原子和杂原子之间的单键更容易断裂,相关论文,钟大放,.,阿地福韦及其衍生物的电喷雾质谱裂解机理,.,中国质谱学会第六届会员代表大会暨学术报告会. 四川绵阳，,2001,邢杰，孙璐，钟大放,.,西地那非衍生物的电喷雾质谱分析,.,质谱学报,，待发表,鉴定伪劣药品,非法掺入的皮质激素类药物,假冒天然口服降糖药,假冒天然治胃病药物,假冒镇痛药物,鉴定中药制剂里非法掺入的西药,抗哮喘药物？口服降糖药？治胃病药物？,九种皮质激素包括氢化泼尼松、氢化可的松、17,-羟基醋酸去氧皮质酮、醋酸泼尼松、醋酸可的松、醋酸氢化可的松、醋酸地塞米松、醋酸曲安奈德和醋酸氟轻松,六种口服降糖药包括二甲双胍、苯乙双胍、格列齐特、格列吡嗪、格列本脲和格列喹酮,醋酸地塞米松的色谱和质谱,醋酸地塞米松,C,24,H,31,FO,6,MW 434,2,4,6,8,10,12,14,Time (min),0,20,40,60,80,100,Relative Abundance,9.07,150,200,250,300,350,400,m/z,0,20,40,60,80,100,Relative Abundance,415.0,397.0,337.2,m/z,435 ,- 20,u,- 18,u,- 60,u,皮质激素类药物,LC/MS,n,分析,氢化可的松,17,-羟基醋酸去氧皮质酮,M.W. 362 M.W. 388,皮质激素类药物,LC/MS,n,分析,醋酸泼尼松 醋酸可的松,M.W. 400 M.W. 402,皮质激素类药物,LC/MS,n,分析,醋酸氢化可的松 醋酸地塞米松,M.W. 404 M.W. 434,皮质激素类药物,LC/MS,n,分析,醋酸曲安奈德 醋酸氟轻松,M.W. 476 M.W. 494,口服降糖药苯乙双胍的色谱和质谱,苯乙双胍,C,10,H,15,N,5,MW 205,2,4,6,8,10,Time (min),0,20,40,60,80,100,Relative Abundance,6.83,80,120,160,200,m/z,0,20,40,60,80,100,Relative Abundance,60.2,189.1,164.2,m/z,206,0,2,4,6,8,10,12,14,Time (min),0,20,40,60,80,100,Relative Abundance,10.36,100,200,300,400,500,m/z,0,20,40,60,80,100,368.9,MW 493,C,23,H,28,ClN,3,O,5,S,m/z,494,格列苯脲的色谱和质谱,口服降糖药物,LC/MS,n,分析,二甲双胍,M.W. 129,格列吡嗪,M.W. 445,口服降糖药物,LC/MS,n,分析,苯乙双胍,M.W. 205,格列苯脲,M.W. 493,口服降糖药物,LC/MS,n,分析,格列齐特,M.W. 323,格列喹酮,M.W. 527,待测样品的,LC/MS,n,检测结果,发现,伪劣药品,抗哮喘药,“,三补定喘胶囊,”,里含有醋酸泼尼松,降糖药,“,三消丸,”,里含有苯乙双胍,治胃病的某,“,纯中药制剂,”,含法莫替丁和奥美拉唑,镇痛药,“,痛可宁,”,含高剂量安定,相关论文,郭继芬，陈笑艳，钟大放. 六种口服降糖药的液相色谱,质谱分析.,分析测试学报，,2000，19(6): 5-8,郭继芬，钟大放，陈笑艳. 液相色谱,质谱联用法鉴定九种皮质激素.,药学学报,，1999, 34: 928-932,郭继芬，钟大放，陈笑艳,.,液相色谱,-,质谱联用法鉴定中药制剂里非法掺入的西药,.,见：,中国药学会中国药学杂志编辑部编现代药物分析论坛，,244-250,，香港，世界医药出版社，,1999,药物中毒检测,艾司唑仑,阿普唑仑,三唑仑,相关论文,顾景凯，夏荣，钟大放，孙璐.,LC/MS,n,法同时检测人尿中艾司唑仑、阿普唑仑和三唑仑.,药学学报，2002，138-140,李雪庆，钟大放，宋鸣，阎立志. 液相色谱,质谱联用法检测体液中三唑仑及其代谢产物.,沈阳药科大学学报，,2001，18: 120-124,郭继芬，孙璐，钟大放. 用液相色谱,电喷雾离子阱质谱联用法检测兔体液中阿普唑仑及其主要代谢物.,沈阳药科大学学报，,2000，17: 358-360,顾景凯，钟大放，姜浩，陈笑艳. 用电喷雾离子阱质谱法分析生物样品中艾司唑仑及其主要代谢物.,药物分析杂志, 1999, 19: 150-154,天然产物组分分析,黄酮类组分分析,人参皂苷组分分析,微生物来源的氨基寡糖组分分析,黄酮化合物组分分析,目标化合物：野黄芩苷,M.W. 462,黄酮化合物组分分析,共检测出 7 种化合物：,（1）2 种葡萄糖苷酸结合物（,M.W. 462）,色谱图,黄酮化合物组分分析,葡萄糖苷酸结合物,MS/MS,黄酮化合物组分分析,(2) 结构中少一个羟基的 3 种葡萄糖苷酸结合物 （,M.W. 446）,色谱图,黄酮化合物组分分析,结构中多一个羟基的 2 种葡萄糖苷酸结合物,（,M.W. 478）,色谱图,人参皂苷组分分析,人参皂苷组分分析,微生物来源的氨基寡糖组分分析,药物动力学分析,福辛普利药物动力学分析,必特螺旋霉素药物动力学分析,普罗帕酮对映体药物动力学分析,研究背景,我国创制的新抗生素,正在进行临床试验,开展了临床前药物动力学研究,必特螺旋霉素,血浆中必特螺旋霉素代谢物的典型色谱图,内标,螺旋霉素,III,螺旋霉素,II,螺旋霉素,I,血浆药物浓度-时间曲线,大鼠灌胃给予必特螺旋霉素后,SPM-I、SPM-II,和,SPM-III,的平均血浆药物浓度-时间曲线,福辛普利药物动力学分析,福辛普利,福辛普利拉,药物动力学分析结果,志愿受试者口服,20,mg,福辛普利后活性代谢物福辛普利拉的平均血浆浓度-时间曲线,相关论文,李文彦，计家珠，郭继芬，张逸凡，钟大放. 中国健康受试者口服福辛普利的药代动力学研究.,药学学报，,2000，35: 601-604,Chen XY, Zhong DF, Blume H. Stereoselective pharmaco-kinetics of propafenone and its major metabolites in healthy Chinese volunteers.,European Journal of Pharmaceutical Sciences, 2000, 10: 11-16,药物代谢产物鉴定,乌头碱代谢产物鉴定,士的宁和马钱子碱代谢产物鉴定,9-硝基喜树碱代谢产物鉴定,普罗帕酮代谢产物鉴定,SFZ-47,代谢产物鉴定,苯丙哌林代谢产物鉴定,罗红霉素的代谢产物鉴定,氧化,还原,水解,构型转化,结合,酶,药物,一,相代谢物,ROH,RNH,2,RCOOH,RSH,二相代谢物,葡糖苷酸,硫酸酯,谷胱甘肽,药物代谢反应类型,在药物代谢研究中的应用,普罗帕酮羟基化代谢物的鉴定,MS,3,m/z,358 ,m/z,340 ,普罗帕酮羟基化代谢物的色谱图和质谱图,在药物代谢研究中的应用,苯丙哌林羟基化代谢物的鉴定,m/z 126,MS,2,m/z,326 ,MS,2,m/z,326 ,苯丙哌林羟基化代谢物的色谱图和质谱图,研究背景,生物碱衍生物,实验阶段的抗癌新药：拓扑异构酶抑制剂,已完成临床前药物动力学研究,9,-硝基喜树碱,Full scan MS,Full scan MS/MS,m/z,394,9,-硝基喜树碱代谢初步研究,m/z,541, 365,m/z,541, 397,m/z,670, 541,m/z,364, 420,m/z,406, 362,9,-硝基喜树碱代谢初步研究,9,-硝基喜树碱在大鼠体内代谢途径,罗红霉素的结构特点,M.W. = 836,LC/MS,n,测定人胆汁中罗红霉素的代谢产物,罗红霉素：主要代谢途径,罗红霉素,罗红霉素：代谢产物的抗菌活性,实验菌株：藤黄微球菌、枯草杆菌、短小芽孢杆菌,体外抗菌活性,罗红霉素,O,-,去甲基代谢物抗菌活性基本不变,去肟醚侧链代谢物抗菌活性基本不变,C=N,双键构型转化使抗菌活性明显降低,N,-,去甲基代谢物抗菌活性明显降低,脱红霉糖代谢物没有抗菌活性,相关论文,顾景凯，初大丰，钟大放，李艳，周慧，沈家骢. 新型抗炎镇痛剂,SFZ-47,及其代谢物的电喷雾离子阱质谱研究.,高等学校化学学报，,2002,，23: 207-209,郭继芬，陈笑艳，钟大放. 液相色谱,电喷雾离子阱质谱联用法检测体液中士的宁、马钱子碱及其主要代谢物.,药物分析杂志，,2001，21: 167-170,Zhong DF, Li XQ, Wang AM, Xu YJ, Wu SD. Identification of the metabolites of roxithromycin in humans.,Drug Metabolism and Disposition, 2000, 28: 552-559,顾景凯，钟大放，陈笑艳，周慧，沈家骢，林阳.,LC/MS,n,法鉴定乙氧苯柳胺在家兔体内的主要代谢产物.,高等学校化学学报，,2000, 21: 690-693,相关论文,顾景凯，钟大放，郭继芬，周慧，沈家骢. 新型抗炎镇痛剂,SFZ-47,在家兔体内羟基化及其结合型代谢产物的鉴定.,药学学报，,2000, 35: 161-164,钟大放，田蕾，李雪庆，许佑君. 罗红霉素及其代谢物的电喷雾离子阱质谱研究.,高等学校化学学报,，2000, 21: 31-35,Gu JK, Zhong DF, Chen XY. Analysis of,O,-glucuronide conjugates in urine by electrospray ion trap mass spectrometry.,Fresenius Journal of Analytical Chemistry,1999, 365: 553-558,杜宗敏，黄海华，陈笑艳，钟大放,.,人尿中苯丙哌林羟基化代谢产物的研究,.,药学学报，,2000，35: 916-920,相关论文,Zhong DF, Chen XY. Enantioselective determination of propafenone and its metabolites in human plasma by liquid chromatography-mass spectrometry.,Journal of Chromatography B,1999, 721: 67-75,李雪庆，钟大放，吴硕东，王爱民，田蕾，于宏,.,人胆汁中罗红霉素代谢产物的研究,.,药学学报,1999, 34: 49-53,钟大放，顾景凯，姜浩，周慧,.,用电喷雾离子阱质谱法对,SFZ-47,在家兔体内两主要代谢物的分析,.,沈阳药科大学学报,1999, 16: 1-5,陈笑艳,钟大放,姜浩,顾景凯,.,电喷雾离子阱质谱法直接测定几种药物的葡萄糖苷酸型代谢物,.,药学学报,1998, 33: 849-854,讨 论,不同类别药物的检测灵敏度,不同形式的准分子离子,多级质谱在结构分析中的作用,辅助软件的作用,确证结构的必要条件,存在的问题,离子抑制,原因：生物样品中内源性物质影响分析物离子化,后果：使信号强度下降，甚至消失,发现： 配制生物样品，与溶液样品对比,解决方法,：改进样品预处理方法；色谱分离,存在的问题,加合离子,溶剂加合离子：甲醇、乙腈,无机离子：铵离子、钠离子等,分析物聚合：二聚体、三聚体等,解决办法,尝试不同的流动相组成、源内碰撞诱导解离,存在的问题,不同官能团质谱响应的差异,有机碱性化合物：正离子检测，灵敏度最高,酸性化合物：负离子检测，灵敏度较高,两性化合物：分子内电荷中和，灵敏度下降,中性化合物：难电离，灵敏度低,改进方法,调节流动相,pH,和组成,存在的问题,不易离子化的分子,烷烃和烯烃化合物难于发生大气压离子化,建议采用气相色谱,质谱联用仪,存在的问题,生物样品预处理,液,液萃取,自动化固相萃取,串联柱切换技术,沉淀蛋白后直接分析,优势与发展前景,高度专属性,对多数药物检测灵敏度超过其他方法,对混合物中微量组分进行结构分析,将成为药物动力学和代谢研究的主流分析技术,合同分析实验室？,感谢国家自然科学基金的项目支持（39930180）,感谢,ThermoFinnigan,公司的技术支持,下列人员参与了本报告内容的研究工作：,陈笑艳 博士 司端运 博士 黄海华 教授,李雪庆 博士 顾景凯 博士 杜宗敏 硕士,徐海燕 硕士 杨汉煜 硕士 邢杰 硕士生,致 谢,