血清蛋白电泳

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2011,春季学期,19/4,*,生物化学与分子生物学实验教学中心,电泳分析,血清蛋白电泳血清免疫固定电泳,何肖娟,hxj50701,南方医科大学,生物化学与分子生物学实验教学中心,2011,春季学期,电泳技术,电泳：,溶液中带电粒子在电场中定向移动的现象称为电泳（,electrophoresis,）。,电泳技术,是利用带电粒子在电场作用下定向移动的特性，对混合物组分进行分离、纯化和测定的一项技术。,2011,春季学期,19/4,电泳的分类,按分离目的：分析电泳和制备电泳,按电场强度：常压电泳和高压电泳,按电泳媒介：自由电泳和区带电泳,区带电泳（按支持介质）：淀粉凝胶电泳,滤纸电泳,醋酸纤维素薄膜电泳,琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳,按支持介质形式：水平式电泳、垂直电泳,按缓冲液,pH,值：连续,pH,和不连续,pH,电泳,2011,春季学期,19/4,临床电泳项目,临床上以琼脂糖电泳法开展的电泳项目：,血清蛋白电泳,免疫固定电泳,尿蛋白电泳,同工酶电泳,脑脊液寡克隆电泳,本周氏蛋白电泳,脂蛋白电泳,2011,春季学期,19/4,血清蛋白电泳（,SPE,）,检测蛋白质水平病理改变的方法和手段。,主要用于肝病、肾病、自身免疫病、血液病、多发性骨髓瘤等蛋白质紊乱疾病的诊断。,电泳图谱不能直接对临床疾病进行确诊，但可通过特征性图谱对某些疾病进行分类，评估疾病的进程和活动状况，评价治疗方案是否有效。,2011,春季学期,19/4,血清免疫固定电泳（,IFE,）,是一种包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作，是免疫沉淀反应的一种混合技术。,优势：将血清蛋白电泳、高分辩率、抗原,-,抗体特异性免疫反应等有机结合，对蛋白进行分离和定型，形象地观察,Ig,的各类重链和轻链分型。,2011,春季学期,19/4,血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果,2011,春季学期,19/4,血清蛋白质的等电点、平均相对分子量、及正常含量,清蛋白,A,1,2, ,pI,相对分子量,（,10,4,）,含量（,%,）,4.88,6.9,5772,5.06,20,25,5.06,30,49,5.12,915,6.212,6.857.3,15.630,1220,球蛋白,2011,春季学期,19/4,正常血清蛋白质电泳图谱,2011,春季学期,19/4,血清蛋白电泳区带,白蛋白区带：主要由白蛋白构成。,1,-,球蛋白区带：,1,-,抗胰蛋白酶、,1,-,脂蛋白、,1,-,酸性糖蛋白、甲状腺结合球蛋白、凝血酶原等。,2,-,球蛋白区带：,2,-,巨球蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、,2,-,脂蛋白、红细胞生成素等。,-,球蛋白区带：主要含铁蛋白、,-,脂蛋白、补体,C3,、,C4,、,2,-,微球蛋白等。,-,球蛋白区带含,IgG,、,M,、,A,、,D,、,E,免疫球蛋白。,2011,春季学期,19/4,正常参考值,A,：,32,50g/L(60.3,71.4%,）,1,：,10,40g/L,（,1.4,2.9%,）,2,：,6,10g/L,（,7.2,11.3%,）,：,6,13g/L,（,8.1,12.7%,）,：,7,15g/L,（,8.7,16.0%,）,2011,春季学期,19/4,2011,春季学期,19/4,2011,春季学期,19/4,临床意义,1,、,M,蛋白（异常免疫球蛋白）血症： 在,-,球蛋白区、,-,球蛋白区或两者之间，出现区带细而浓，有时呈波浪状，在光密度计扫描图上呈尖陡高峰的,M,蛋白带,。,2,、蛋白质缺乏症,3,、肾病,4,、急慢性炎症,5,、肝病：肝硬化出现,“,-,桥”,原发性肝癌在,Alb,与,1,-,球蛋白之间出现一小的区带，称为,甲胎蛋白带,。,2011,春季学期,19/4,异常血清蛋白电泳图谱及临床分析,急性炎症及应激型：,当机体受到各种损伤或炎症刺激时的病理现象。,主要特征：,Alb,减少或正常，,1,、,2,-,球蛋白增高，,-,球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。,病理生理：,Alb,下降主要是由于蛋白分解亢进所致,1,和,2,-,球蛋白增加与急性时相反应蛋白,1,糖蛋白增加有关，,区带减少是由于转铁蛋白分解代谢增加所致。新生儿由于结合珠蛋白合成功能不完全，当有炎症病灶时，,2,区带无明显增高，而,1,区带可明显增高。,2011,春季学期,19/4,肾病型：,由于肾小球受损引起低蛋白血症，蛋白尿，高脂血症以及全身性水肿。,主要特征：,Alb,明显降低，,1,-,球蛋白轻度增加，,2,-,球蛋白明显增加，,-,球蛋白降低、正常或增高。小儿类脂样肾病时，,-,球蛋白可降低，有时可降低至零；成人肾病综合症时，,-,球蛋白通常增加，特别是狼疮性肾病。,病理生理：,Alb,降低是由于肾小球滤过增加所致。,1,-,球蛋白增加，主要是小分子量的,1,糖蛋白增加，可能是为了补偿由于,Alb,降低引起的低渗透压，虽然,1,糖蛋白也大量丢失于尿中，但体内合成量超过排泄量，故仍可增高。,2,-,球蛋白明显增加是由于,2,-,球蛋白和低密度脂蛋白相对增加所致。,球蛋白降低主要是分子量小的转铁蛋白排泄于尿中所致。,-,球蛋白降低主要是由于漏出于尿中及体内分解亢进所造成，而慢性肾炎、狼疮性肾炎等,-,球蛋白增加，可能是由于免疫刺激，使,IgG,增加所致。,2011,春季学期,19/4,弥漫性肝损伤型,主要特征：,Alb,明显降低, 1-,球蛋白在轻度时可略增加，但肝细胞破坏严重时，则,1,、,2,和,球蛋白通常均降低，在胆汁郁积性肝炎时，,2,和,球蛋白可增高，,-,球蛋白轻度或中度增高。,病理生理：,Alb,虽合成减少，但其半衰期长，其浓度减少多出现于发病后十天，随病情恢复而至正常,若为慢性则逐渐减少,其减少程度与肝炎的严重程度相一致。,1-,球蛋白在肝炎初期，作为急性期反应物质常增加，而肝损伤严重时则降低，在致命的肝功能衰竭时，,1-,球蛋白可降低到很低水平。,2-,球蛋白的降低，可能是由于结合珠蛋白合成降低所致，但胆汁郁积性肝炎时，由于脂蛋白增加，可见到,2-,球蛋白部位增高，当急性肝坏死时，,2-,球蛋白则明显减少。,球蛋白在肝炎早期几乎无变化，当肝细胞损伤严重时合成减少。几乎所有肝脏疾病,-,球蛋白因合成亢进均增高，其增加的范围与疾病的严重程度相一致。,2011,春季学期,19/4,肝硬化型,主要特征：,Alb,均有不同程度的降低，,1,、,2,和,球蛋白正常或降低，,-G,明显增高且宽度增加，可见,-,桥。,病理生理： 肝细胞受损导致,Alb,明显降低，,-,桥的出现与血清免疫球蛋白，特别是,IgA,、,IgM,、,IgG,同时增加有关，其中以,IgA,影响较大，当,IgA,和,IgM,泳动在,和,之间，使,区带与,区带融合而形成,-,桥。,2011,春季学期,19/4,原发性肝癌,主要特征： 在,Alb,与,1-,球蛋白之间出现一小的区带，称为甲胎蛋白带。,病理生理； 肝癌时，血清中的甲胎蛋白浓度为正常人的数十乃至数万倍。,2011,春季学期,19/4,宽幅高,-G,血症型（多株免疫球蛋白增高症）,主要特征：,-G,的宽度明显增加，呈宽幅高峰。,病理生理： 多株浆细胞以大致相同的速度增殖，大量合成免疫球蛋白所致，呈多株性，若合并急性感染，则,1,、,2,明显增高。,2011,春季学期,19/4,M,蛋白血症（单株免疫球蛋白异常症）,主要特征：,M,蛋白又叫异常免疫球蛋白，其区带宽度与,Alb,带大致相等或较其狭窄，常分布在,2,至慢,-G,部位。,病理生理：,M,蛋白是由某一细胞株分泌大量结构相同、电泳迁移率一致的蛋白。多发性骨髓瘤及原发性巨球蛋白血症时，,M,蛋白以外的其他免疫球蛋白明显降低，其可能是由于,M,蛋白大量消耗氨基酸，致使其他免疫球蛋白相对合成不足，以及,M,蛋白代谢亢进，其他免疫球蛋白的分解代谢也随之增加，故而含量降低。,2011,春季学期,19/4,双白蛋白血症型,主要特征：在白蛋白区有两个区带，光密度扫描出现双峰，呈剪刀状。,产生原因：双白蛋白血症分为持久型和暂时型两种。持久型主要是一种家族性血清蛋白异常的疾病，极少见，为常染色体不完全显性遗传； 而暂时型主要是指肾功能不全的患者在治疗期间使用大剂量的,-,内酰胺类抗生素，可形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断即逐渐消失。,2011,春季学期,19/4,先天性白蛋白缺陷型：,主要特征：由于血清白蛋白的显著降低，血清总蛋白也随之降低，,1,、,2,球蛋白明显增高，,球蛋白也增高。 严,;,重无白蛋白血症时，白蛋白有时可降为零。,产生原因：本病是极少见的先天性疾病，可能由于肝细胞内白蛋白合成功能遗传性缺陷或明显低下所致。该病患者的白蛋白含量尽管只有正常人的,0.05%,， 而其血浆胶渗透压仍为正常人水平的,1/2,左右， 这是由于球蛋白代偿性增加所致，如传铁蛋白为正常人的,20 -3,倍，,1,巨球蛋白为正常人的,3.5,倍，,脂蛋白为,3,倍，,IgM,为,3,倍，这时血清白蛋白的半衰期也明显延长， 可为正常人的,3-4,倍， 对维持血浆胶体渗透压均有一定作用。,2011,春季学期,19/4,几种疾病的蛋白电泳变化,病名,Alb,1,2,肾病,肝硬化,原发性肝癌,多发性骨髓瘤,慢性炎症,无丙种球蛋白症,双白蛋白血症,AFP,-,桥,2011,春季学期,19/4,2011,春季学期,19/4,Thank You !,2011,春季学期,