糖类脂肪蛋白质鉴定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验,：,生物组织中可溶性还原糖、,脂肪、蛋白质的鉴定,（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定,当质量浓度为g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH),2,悬浊液。 Cu(OH),2,与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu,2,O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。,R,CHO,+2Cu(OH),2,R,COOH,+,Cu,2,O,+2H,2,O,做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织有无色素是影响实验结果及其观察的最重要因素。,因此要选用可溶性,还原糖含量高,、,白色或近于白色,的植物组织，其中以,苹果、梨,最好，也可用白萝卜替代。,甲液（g/mL的氢氧化钠溶液）,斐林试剂,乙液（g/mL的硫酸铜溶液）,甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。,（1）制备组织样液（教师制备）,（2）鉴定样液,先在试管中加入2mL组织样液,再加入2mL刚配制的斐林试剂,水浴煮沸2分钟,注意观察整个实验过程中，溶液颜色的变化！,还原糖检测实验的实验结果,（二）生物组织中脂肪的鉴定,苏丹是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹染色后，在显微镜下可以看到细胞内橘黄色的颗粒。,做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。,将花生种子经过3-4小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。,苏丹溶液：将g苏丹干粉溶于100mL体积分数为95%的酒精溶液中，待全部溶解后即成。,（1）切片制作,去掉花生种皮,用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（,为什么？,）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。,刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（,注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。,）如此连续动作，切下一些薄片。,（2）染色,用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央滴苏丹溶液2-3滴于花生子叶薄片上2-1min后，吸去染液,滴50%的酒精洗去浮色,吸去多余酒精再滴1-2滴蒸馏水盖上盖玻片，制成临时装片。,（3）镜检鉴定,在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（,最好只有1-2层细胞,），移至视野的中心换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内,橘黄色,的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。,若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来,。,脂肪检测实验的实验结果,若用物理方法如何鉴定脂肪的存在?,烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪。,（三）生物组织中蛋白质的鉴定,1 实验原理,在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H,2,NOC-NH-CONH,2,）能与Cu,2+,作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。,A液（g/mL的氢氧化钠溶液）,双缩脲试剂,B液（g/mL的硫酸铜溶液）,做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆(可用豆浆替代）或鸡蛋清。,4.实验步骤：,（1）制备生物组织样液（教师制备）,（2）鉴定,先加2mL组织样液,再加2mL双缩脲试剂A液,加3-4滴双缩脲试剂B液,蛋白质检测实验的实验结果,注意：在鉴定蛋白质时要分别滴加两种试剂，并且硫酸铜只能加34滴，不能过量如过量，CuSO,4,在碱性溶液中生成大量蓝色Cu（OH）,2,沉淀，遮盖了紫色。,鉴定蛋清组织中存在蛋白质时，要充分稀释。,如稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后，会粘固在试管内壁上，使反应不易彻底，并且试管中也不易冲洗干净。,5.,如稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后，会粘固在试管内壁上，使反应不易彻底，并且试管中也不易冲洗干净。,6.若用物理方法如何鉴定脂肪的存在?,烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪,