第七章杂环类药物的分析

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第七章 杂环类药物的分析,杂环化合物：指环状有机化合物的碳环中夹杂有非碳元素原子（如O、S、N等）的化合物,第一节 吡啶类药物的分析,异烟肼（isoniazid）,吡啶（pyridine）,尼可刹米（nikethamide）,异烟腙（ftivazide）,丙硫异烟胺（protionamide）,一、结构与性质,1. 吡啶环,弱碱性,p,K,b,8.8，,非水碱量法含量测定或沉淀反应鉴别,吡啶环可发生开环反应,，可用于吡啶类药物的鉴别,2. 取代基：,（1）,异烟肼,位上酰肼基,弱酸性,非水酸量法,还原性,鉴别或氧化还原滴定法含量测定,可,与某些羰基试剂发生缩合反应,鉴别或比色法含量测定,酰胺键易水解,引入特殊杂质,游离肼,（2）,尼可刹米,位上酰胺基,易水解，,遇碱水解后，释放出具有碱性的二乙胺，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色，故可以此进行鉴别。,（3）,丙硫异烟胺,位上硫代甲酰胺基,易水解，,加酸水解后，释放出硫化氢，能使湿润的醋酸铅试纸显黑色，故可以此进行鉴别。,3. UV和IR,二、鉴别试验,（一）吡啶环的反应,1. 沉淀反应,（1）与氯化汞的反应,（2）与铜盐的反应,尼可刹米 ChP（2005）,【鉴别】,（3）取本品 2 滴，加水 1 ml ，摇匀，加硫酸铜试液 2 滴与硫氰酸胺试液 3 滴，即生成草绿色沉淀。,2. 吡啶环的开环反应,适用于吡啶,、未取代，以及 、 为烷基或羧基的衍生物,（1）戊烯二醛反应（K,ning反应）,尼可刹米 ChP（2005）,【鉴别】,（2）取本品 1 滴，加水 50 ml，摇匀，分取 2 ml，加溴化氰试液 2 ml与 2.5% 苯胺溶液 3 ml，摇匀，溶液渐显黄色。,异烟肼：,（2）二硝基氯苯反应,异烟腙 ChP（2005）,【鉴别】,取异烟腙约50 mg，加2,4二硝基氯苯50 mg与乙醇3 m1，置水浴中煮沸2,3 min，加10氢氧化钠溶液2滴，静置后，即显鲜明的红色。,异烟肼不经处理的反应,：,（二）酰肼基团的反应,1. 还原反应,异烟肼 ChP（2005）,【鉴别】,（2）取异烟肼约10 mg，置试管中，加水2 ml溶解后，加氨制硝酸银试液1 m1，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。,2. 缩合反应,异烟肼 ChP（2005）,【鉴别】,（1）取本品约0.1 g，加水5 ml溶解后，加10香草醛的乙醇溶液1 m1，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶，滤过，用稀乙醇重结晶，在105干燥后，测定熔点，其熔点为228,231，熔融时同时分解。,（三）分解产物的反应,1. 尼可刹米 ChP（2005）,【鉴别】,（1）取本品 10 滴，加氢氧化钠试液 3 ml ，加热，即发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。,2. 丙硫异烟胺 ChP（2005）,【鉴别】,（1）取本品约 50 mg，加盐酸溶液（9100）3 ml ，缓缓加热，发生的气体可使湿润的醋酸铅试纸显黑色。,（四）紫外吸收光谱特征,丙硫异烟胺 ChP（2005）,【鉴别】,（1）取本品，加乙醇制成每1 ml 中含 20,g 的,溶液，照分光光度法（附录A）测定，在 291 nm 的波长处有最大吸收，吸收度约为0.78。,（五）IR,尼可刹米 ChP（2005）,【鉴别】,（4）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 135 图）一致。,三、杂质检查,杂质来源,原料引入、降解产生,（一）异烟肼中游离肼的检查,1. 薄层色谱法（TLC）,（1） ChP（2005）,杂质对照品法,取本品，加水制成每 1ml 中含 50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每 1ml中含 0.20mg（相当于游离肼50g ）的溶液，作为对照溶液。吸取供试品溶液 10l 与对照溶液 2l 分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙酮（32）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，,在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。,（2） BP（1998）,游离肼,杂质对照品法,有关物质,高低浓度对比法,2. 比浊法 JP（13）,检查方法,灵敏度法,反应原理,游离肼+水杨醛水杨醛腙,优点：,不用对照品，价廉、简单易行,缺点：,准确度差,3. 差示分光光度法,游离肼+对二甲氨基苯甲醛黄色缩合物,于456nm波长处有最大吸收,异烟肼+对二甲氨基苯甲醛缩合物 于456nm波长处,无,吸收,游离肼+3%丙酮,无色,的二甲基甲酮连氮,参比：,异烟肼+游离肼+对二甲氨基苯甲醛+3%丙酮,样品：,异烟肼+游离肼+对二甲氨基苯甲醛,测定，对照法定量,（二）尼可刹米中有关物质的检查,ChP（2005）,TLC,高低浓度对比法,配制两种不同浓度的对照溶液,四、含量测定,（一）异烟肼的含量测定,1. 氧化还原滴定法,（1）溴酸钾法,ChP（2005）原料及制剂,反应摩尔比 32,取本品约 0.2g，精密称定，置 100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取25m1，加水50m1、盐酸20ml与甲基橙指示剂1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mo1/L）缓缓滴定（温度保持在18,6,H,7,N,3,O。,（2）溴量法 反应摩尔比 14,（3）剩余碘量法 反应摩尔比 14,2. 非水溶液滴定法,（1）非水酸量法,（2）非水碱量法,（二）尼可刹米的含量测定,1. 非水溶液滴定法,ChP（2005）原料,2. 紫外分光光度法,ChP（2005）注射液,内容量移液管,用内容量移液管精密量取本品1m1，置 100ml 量瓶中，用 0.5 硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加,0.5硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，加0.5硫酸溶液稀释成每1ml中约含尼可刹米20g的溶液，在263nm的波长处测定吸收度，按C,10,H,14,N,2,O的吸收系数（ ）为292计算，即得。,（三）异烟腙的含量测定,非水溶液滴定法 电位法指示终点,ChP（2005）原料及片剂,（四）丙硫异烟胺的含量测定,1. 非水溶液滴定法,ChP（2005）原料,2. 银量法,ChP（2005）片剂,取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于丙硫异烟胺0.3g）置具塞锥形瓶中，加丙酮20ml使丙硫异烟胺溶解，精密加入硝酸银滴定液（0.1mo1/L）50m1，摇匀，放置15min，加水50m1、硝酸3m1、硝基苯5ml与硫酸铁铵指示液2m1，用硫氰酸铵滴定液（0.1mo1/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硝酸银滴定液（0.1mo1/L）相当于,9,H,12,N,2,S。,例题. 下列药物中，哪一个药物加氨制硝酸银能产生银镜反应,A. 地西泮,B. 阿司匹林,C. 异烟肼,D. 苯佐卡因,E. 苯巴比妥,例题,用于吡啶类药物鉴别的开环反应有,A. 茚三酮反应,B戊烯二醛反应,C坂口反应,D. 硫色素反应,E二硝基氯苯反应,例题,. ChP（2005）异烟肼的测定方法为,A. 溴酸钾滴定法,B. 溴量法,C. TCL,D. NaNO,2,E. 比色法,例题,. 能和2,4一二硝基氯苯发生呈色反应的药物是,A. 异烟腙,B. 硫酸奎宁,C. 阿莫西林,D. 四环素,E. 炔孕酮,例题,. 能和硫酸铜及硫氰酸铵反应，生成草绿色沉淀的药物为,A. 对乙酰氨基酚,B. 异烟肼,C. 尼可刹米,D. 地西泮,E. 维生素E,例题,. 经高锰酸钾或溴水氧化后，可发生开环形成戊烯二醛反应的药物为,A. 葡萄糖,B. 皮质酮,C. 维生素C,D. 土酶素,E. 异烟肼,例题,. 溴酸钾法测定异烟肼含量的方法是,A. 属于氧化还原滴定法,B. lmol溴酸钾相当于3/2mol的异烟肼,C. 采用永停滴定法指示终点,D. 在HCl酸性条件下进行滴定,E. 还可以用于异烟肼制剂的含量测定,例题,. 异烟肼可由原料反应不完全或贮藏中的降解反应而引入哪种杂质,A. 间氨基酚,B. 水杨酸,C. 对氨基苯甲酸,D. 游离肼,E. 其他甾体,例题,. 可用于异烟肼鉴别的反应有,A. 与氨制硝酸银的反应,B. 戊烯二醛反应,C. 坂口反应,D. 硫色素反应,E. 二硝基氯苯反应,第二节 吩噻嗪类药物的分析,吩噻嗪类药物的基本结构,奋乃静,癸氟奋乃静,盐酸氟奋乃静,盐酸三氟拉嗪,盐酸二氧丙嗪,一、结构与性质,（一）结构分析,1. 硫氮杂蒽母核,（1）含S、N的三环共轭的大,体系，S、N与苯环形成p-,共轭具有紫外吸收光谱特征,（2）硫氮杂蒽环上硫原子为,-,2价，具有还原性，易氧化呈色,（3）硫氮杂蒽环上硫原子有两对孤对电子，易与金属离子络合呈色,2. 取代基,R：脂烃胺基、哌嗪基，具碱性,R,：卤素,（二）性质,1. 紫外与红外吸收光谱,本类药物的紫外特征吸收，主要由,母核三环的系统,所产生，一般具有,三个峰值,。即在 204209nm（205nm附近）、250265nm（254nm附近）和300325nm（300nm附近）。,最强峰多在 250265nm。,2位上的取代基（R）不同，会引起吸收峰发生位移。,其结构中-2 价的硫，易氧化，氧化产物砜及亚砜有四个吸收峰。,吩噻嗪类药物随取代基 R 和R的不同，产生不同的红外吸收光谱。,2. 易被氧化呈色,3. 易与金属离子络合呈色,4. 碱性,二、鉴别试验,（一）UV和IR,奋乃静,ChP（2005）,鉴别 （2）取本品，加无水乙醇制成每1ml 中含 7,g 的,溶液，照分光光度法（附录A）测定，在 258nm 的波长处有最大吸收，吸收度约为0.65。,（3）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 243 图）一致,（二） 显色反应,1. 氧化剂氧化显色,氧化剂,硫酸、硝酸、过氧化氢,奋乃静,ChP（2005）,鉴别 （1）取本品 5mg，加盐酸与水各 1ml，加热至80，加入过氧化氢溶液数滴，即显深红色；放置后，红色渐褪去。,盐酸异丙嗪,ChP（2005）,鉴别 （1）取本品约 5mg，加硫酸5ml 溶解后，溶液显樱桃红色；放置后，色渐变深。,（2）取本品约 0.1g，加水 3ml 溶解后，加硝酸 1ml，即生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为橙黄色。,癸氟奋乃静,ChP（2005）,鉴别 （2）取本品约 5mg，加甲醇2ml 溶解后，加 0.1% 氯化钯溶液 3ml，即有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。,2. 与钯离子络合显色,（三）分解产物的反应,癸氟奋乃静,ChP（2005）,鉴别 （1）取本品 15,20,mg，加碳酸钠与碳酸钾各约0.1g，混匀，在 600 炽灼 1520分钟，放冷，加水2ml 使溶解，加盐酸溶液（12）酸化，滤过，滤液加茜素锆试液 0.5ml，应显黄色。,（四）氯化物的反应,盐酸氯丙嗪,ChP（2005）,鉴别 （3）本品的水溶液显氯化物的鉴别反应（附录 ）。,三、有关物质检查,1. 癸氟奋乃静及其注射液,TLC 参比杂质对照品法,以盐酸氟奋乃静为对照品,2. 其他药物,TLC 高低浓度对比法,四、含量测定,（一） 非水溶液滴定法 原料药,HClO,4,在冰醋酸溶液中，具强氧化性，可氧化吩噻嗪类药物产生红色的氧化物，干扰指示剂终点的观察。排除方法：,（1）改用中性溶剂,（2）加抗坏血酸,（3）电位法指示终点,（二）紫外分光光度法,1. 直接分光光度法,盐酸异丙嗪,：片剂测定波长为249nm（ 为910）；注射液为了消除抗氧剂维生素C（,max,243nm）对测定的干扰，测定波长改为299nm（ 为108）。,同理，,盐酸氯丙嗪,片剂测定波长为254nm（ 为915）；注射液测定波长改为306nm（ 为115）,。,2. 萃取后分光光度法,盐酸氯丙嗪注射液,3. 二阶导数分光光度法,盐酸氯丙嗪注射液,抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定,因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰,266nm,谷,254nm,距离，标准曲线法定量,4. 萃取双波长分光光度法,（1）原理,在待测组分（a）的最大吸收波长（测定波长，,1,）处测定待测组分和干扰组分（b）吸收度的总和；另选一适当波长（参比波长，,2,）测定吸收度，并使干扰组分在测定波长和参比波长处的吸收度相等，即 ，而待测组分在这两个波长处吸收度的差值足够大。,（2）定量依据 样品在二波长下吸收度差值（,A,）：,即，吸收度差值（,A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除。,（3）必要条件, 干扰组分在两个波长处吸收度相等, 待测组分在两个波长处吸收度相差足够大,（4）应用,萃取,除去抗氧剂的干扰,双波长分光光度法测定,排除氧化产物的干扰,测定波长,254nm,参比波长,277nm,对照法定量,（三） 铈量法,自身指示终点或电位法、永停法指示终点,优点：,硫酸铈作滴定剂具有高的氧化电位，且为一价还原；不存在对环取代基的副反应，专属性高。,本法既可用于原料，亦可用于片剂的测定,（四）比色法,1. 钯离子比色法,反应在 pH20.1 的缓冲液中进行,优点：,钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定,2. 铁盐比色法,例题,盐酸氯丙嗪的含量测定方法有,A. 中和法,B. 非水滴定法,C. 紫外法,D. 旋光法,E. 铈量法,例题,. 中国药典（2005年版）对盐酸异丙嗪注射液的含量测定，选用299nm波长处测定，其原因是,A. 299nm处是它的最大吸收波长,B. 为了排除其氧化产物的干扰,C. 为了排除抗氧剂的干扰,D在299nm处，,它的吸,收系数最大,E. 在其他波长处，因其无明显吸收,例题,. 有氧化产物存在时，吩噻嗪类药物的鉴别或含量测定方法为,A. 非水溶液滴定法,B. 紫外分光光度法,C. 荧光分光光度法,D. 钯离子比色法,E. pH指示剂吸收度比值法,例题,. 检查盐酸氯丙嗪中“有关物质”时，采用的对照溶液为,A. 杂质的标准溶液,B. 标准“有关物质”溶液,C. 供试品溶液,D. 供试液的稀释溶液,E. 对照溶液,例题,. 某药物于酸性溶液中，加硫酸铈试液则产生红色，继续滴加硫酸铈试液，红色由浅变深，继由深又变浅直至红色消失，该药物应为,A. 雌二醇,B. 氯丙嗪,C. 诺氟沙星,D. 硫酸镁,E. 苯巴比妥钠,例题,. 吩噻嗪类药物与钯离子反应，需在以下哪种酸性条件下进行,A. pH4,D. pH1,E. pH5,第三节 苯并二氮杂卓类药物的分析,环庚三烯,草,卓,硝西泮,氯硝西泮,奥沙西泮,盐酸氟西泮,艾司唑仑,阿普唑仑,一、结构与性质,1. 苯并二氮杂卓母核 弱碱性，UV,2. 结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。,3. 含卤素,二、鉴别试验,（一）化学反应,1. 沉淀反应,氯氮卓,ChP（2005）,【鉴别】,（2）取本品约 1,0,mg，加盐酸溶液（91000）10ml 溶解后，加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,阿普唑仑,ChP（2005）,鉴别 （1）取本品约 5mg，加盐酸溶液（91000）2ml 溶解后，分为两份：一份加硅钨酸试液 1 滴，即生成白色沉淀；另一份加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,2. 水解后重氮化偶合反应,氯氮卓、艾司唑仑、奥沙西泮,氯氮卓,ChP（2005）,鉴别 （1）取本品约 1,0,mg，加盐酸溶液（12）15ml，缓缓煮沸 15 分钟，放冷，溶液显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）。,3. 水解后呈茚三酮反应 地西泮,4. 硫酸荧光反应,地西泮,ChP（2005）,鉴别 （1）取本品约 1,0,mg，加硫酸3ml，振摇使溶解，在紫外灯（365nm）下检视，显黄绿色荧光。,氯氮卓黄色,艾司唑仑亮绿色,硝西泮淡蓝色,5. 分解产物的反应,地西泮,ChP（2005）,鉴别 （2）取本品 2,0,mg，用氧瓶燃烧法（附录 C）进行有机破坏，以 5% 氢氧化钠溶液 5ml 为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸 2 分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录 ）。,（二）UV 和 IR,（三）TLC,三、特殊杂质的检查,（一） 有关物质的检查,1. 地西泮中有关物质的检查,地西泮的原料及片剂,TLC 高低浓度对比法,2. 氯氮卓中有关物质的检查,USP（24） TLC,氧化物、氨基物 杂质对照品法,有关物质 参比杂质对照品法,BP（1998）TLC 高低浓度对比法,3. 氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法,（二）降解产物的检查,地西泮注射液,分解产生2-甲氨基-5-氯二苯甲酮,HPLC 主成分自身对照法,1. 峰面积归一化法,取一定量供试品溶液进样，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不能超过限量。注意溶剂峰不应计算在总峰面积内。,优点：不需杂质对照品，简便易行。,缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量，准确度差。,2. 主成分自身对照法,杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时应用。,方法,分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照溶液主成分峰面积比较，控制供试品中杂质的量。,缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，准确度差,优点：不需杂质对照品，可同时控制各个杂质及其总量限度,3. 内标法测定供试品中杂质的总量限度,方法,供试品供试品溶液,1,图1,供试品+内标供试品溶液,2,图2,判断,若图1无与内标峰保留时间相同的杂质峰，则图2中各杂质峰面积之和应小于内标物质峰面积（溶剂峰不计在内）,若图1有与内标峰保留时间相同的杂质峰，则将图2上的内标峰面积减去图1中此杂质峰面积，,得内标物质峰的校正面积,；图2中各杂质峰面积加上图1此杂质峰面积，得各杂质峰的校正总面积；各杂质峰校正总面积应小于内标物质峰的校正面积。,4. 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量,准确测定杂质含量,方法,内标+杂质对照品溶液，进样，测定，计算校正因子,供试品+内标供试品溶液，进样，测定杂质和内标峰面积或峰高，计算杂质量,5. 外标法测定供试品中某个杂质的量,供试品供试品溶液,杂质对照品对照品溶液进样，测定，计算杂质的含量,缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样,四、含量测定,（一）非水溶液滴定法 原料,（二）紫外分光光度法,（三）比色法,1. 地西泮经水解后氯仿提取液的比色测定法,2,. 地西泮水解产物甘氨酸与茚三酮反应后比色测定法,3,. 氯氮卓经酸水解后的重氮化偶合比色测定法,（四）HPLC,1. 地西泮注射液的 HPLC 法,内标法加校正因子定量,2. 三唑仑的 HPLC 法,内标法加校正因子定量,例题,A. 氯氮卓（利眠宁） B地西泮（安定）,C两者均能 D. 两者均不能,1分子母核属于苯并二氮杂卓,2用氧瓶燃烧法破坏后，显氯化物反应,3水解后呈芳伯胺反应,4与三氯化锑反应生成紫红色,5溶于硫酸后，在紫外光下显黄绿色荧光,(C),（C）,（A）,（D）,（B）,例题,. 硫酸荧光反应为地西泮的特征鉴别反应之一。地西泮加硫酸溶解后，在紫外光下显,A. 红色荧光 B. 橙色荧光,C. 黄绿色荧光 D. 淡蓝色荧光,E. 紫色荧色,例题,. 某药物经酸水解后呈茚三酮反应，溶液显紫色，该药为,A. 氯氮卓,B. 地西泮,C. 盐酸普鲁卡因,D. 阿司匹林,E. 尼可刹米,例题,. 某药物经酸水解后可用重氮化偶合反应鉴别，此药物是,A. 盐酸氯丙嗪,B. 氯氮卓,C. 地西泮,D. 醋酸氢化可的松,E. 维生素C,