脐带间充质干细胞杨洁

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,脐带间充质干细胞杨洁,目录,定义,技术流程,临床应用,优势,前景,什么是脐带间充质干细胞？,脐带间充质干细胞（,Mesnchymal Stem Cells,，,MSCs,）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞。,工艺流程简介,供者筛选,采集,接收,制备,培养,冻存,复苏,发放,运输,临床应用,信息反馈,供者筛选,供者需要提供供者的既往病史、现病史、家族史等资料。,样本采集运输要求,脐带采集标准：,1.,脐带长度不得低于,20cm,2.,脐带两端均在,2-3cm,处结扎,3.,脐带保存液在有效期内，并且无明显颜色变化,4.,脐带保存瓶无漏液现象，密封严实、无裂横,5.,采集套装内容完整，无缺失,6.,采集信息登记完整、字迹清楚易辨认,7.,脐带运输时间在规定范围内,8.,温度控制在适度范围内（,0,度,-25,度）,样本接收标准,脐带的接收标准：,1.样本信息一致、无误，并能追溯至脐带所有人。,2.母血采集量,5,ml,脐血检测样本采集量,5,ml,3. 采集套装内容完整，无缺失；采集信息登记完整、字迹清楚易辨认。,4.无可能造成供者基因型异常的家族史。,5.供者健康调查表登记信息无异常。,间充质干细胞的制备方式,间充质干细胞的制备原理：,脐带华通氏胶内富含间充质干细胞，通过分离获得华通氏胶后，并进行体外培养，利用间充质干细胞贴壁生长和可体外扩增特性，可获得更多的间充质干细胞。,组织块分离法,免疫五项检测均为阴性,间充质干细胞的制备方式,华通氏胶的提取与培养,华通氏胶提取：,1.,消毒,2.,清洗,3.,分离出两条动脉和一条静脉,4.,剥取华通氏胶,5.,剪碎华通氏胶（大小,1mm3,）,6.,接种至培养皿培养（密度,2-3g/10cm,皿）,间充质干细胞的制备方式,注意事项：,1.,血迹清洗要彻底,2.,剥取动脉与静脉要干净,3.,尽量不要剥取羊膜组织,4.,使用合格器械，器械钝口和生锈的不要使用,5 .,接种后均匀平铺组织块,间充质干细胞原代培养,细胞补液和换液（原代培养）,1.,制备五天补液（观察是否有细胞爬出）,2.,八天换液,间充质干细胞的传代,细胞传代（原代）,接种时间：细胞融合度,40%-60%,最基本和重要步骤,间充质干细胞的传代,细胞传代（非原代）,接种时间：细胞融合度,85%,试剂标记、用前复核,间充质干细胞的冻存,细胞收集前须给检测送样做细菌检测和流式（,CD90+,、,CD105+,、,CD166+,）,冷冻保护剂（胎牛血清,+DMSO,） 配制：,DMSO 10%,冷冻方式 深低温冰箱梯度降温,间充质干细胞的冻存,注意事项,细胞冻存过程,降温要慢，缓慢冷冻,可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。,操作要迅速,间充质干细胞的复苏,细胞复苏过程要,迅速,，以降低,DMSO,对细胞的损伤，用生理盐水清洗两遍再接种培养；若直接回输则多洗一变。,细胞治疗程序,1、,治疗前咨询：,明确诊断,，明确疾病处于哪一期,；,2、治疗风险：,分析利弊；可能的副作用；获益,3、知情同意：,治疗前准备,1).,安全检测:,菌检；,2).,个体化治疗方案设计：每一位病人的治疗方案，都根据其评价结果具体制定,;,3).,需要的细胞数量；,4).,细胞的使用方法；,5).,可能出现的不良反应及应对措施。,间充质干细胞质量要求,细菌检测,内毒素检测,革兰氏检测,支原体检测,活性检测,90%,阴性,细胞发放,1.,细胞的保存,(,基质：生理盐水或者保存液）,2.,运输要求：时间、温度,3.,病人信息填写完整,4.,样本检测合格,MSC治疗禁忌证：,1.,怀孕。,2.,精神病。,3.,严重的心、肝、肾、肺功能不全。,3.,不能控制的严重感染。,4.,合并其他有致命危险的疾病。,5.,一般受者年龄不超过,65,岁 （,个别患者,65,岁,）。,6. 自体免疫性疾病晚期。,7. 恶性肿瘤,。,8. HIV 阳性,间充质干细胞治疗疾病的原理,替代和修复死亡和受损伤的细胞；,激活休眠和处于抑制状态的细胞；,旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗凋亡因子等）,间充质干细胞移植途径,腰穿途径,静脉途径,局部种植,介入途径,优势,1,、,取材方便,：采集过程简单、无痛苦，不影响母子健康；,2,、,细胞数量丰富,：增值能力强，可为组织器官的修复和再生提供所需的大量细胞；,3,、,免疫原性低,：具有独特的免疫调 节功能，自体使用不引起免疫排斥反应，异体移植还可降低免疫反应；,4,、不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。,脐带间充质干细胞具有哪些临床应用价值？,泌尿系统：肾实质的修复；,消化系统：肝组织的修复；,内分泌系统：胰岛细胞的修复；,神经系统：脑、脊髓损伤的修复；,血液系统：化疗、放疗后造血系统 的修复；,循环系统：心肌修复、血管修复；,免疫系统：调节免疫，移植治疗时可降低免疫排斥反应；,衰竭器官的结构和功能的修复和再生：最终替代组织和器官移植。,前景,干细胞治疗是继药物治疗、手术治疗之后的又一场医疗革命。目前，发达国家已经开始将干细胞治疗技术用于临床治疗自身免疫性疾病、心肌梗死、脊髓损伤、心力衰竭等疾病。,谢谢大家！,结 语,