结核杆菌及其诊断

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,结核分枝杆菌及其临床诊断,郴州市第一人民医院医学检验中心,李胜涛,目录,1 结核分枝杆菌感染现状,2结核分枝杆菌生物特性、致病性及临床诊断,3 结核分枝杆菌检测方法及其应用,4本室目前结核分枝杆菌检测试剂情况分析,5病例分析,1 结核分枝杆菌感染现状,1 我国拥有近5.5亿的结核感染人群,2我国每年新发生肺结核患者100万例,3 结核病主要经呼吸道传播,4只要坚持正规治疗，绝大多数肺结核患者是可以治愈的,AIDS患者极易合并结核分枝杆菌感染,2 结核分枝杆菌生物特性与致病性,2.1生物特性,抵抗力强：尘埃上保持传染性810d，在干燥痰内可存活68个月，痰液可增强结核分枝杆菌的抵抗力。,变异性：可发生形态、菌落、毒力、免疫原性,易发生耐药性 ：MDR和XDR，每年有大约44 万例多药耐药型肺结核新患者出现，约15 万患者死于多药耐药型肺结核,2.2致病物质：,荚膜亲和吞噬细胞，含有多种酶，能抑制溶酶体同吞噬体结合,该菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%,索状因子主要损伤细胞线粒体和抑制氧化磷酸 化过程，抑制粒细胞游走和引起肉芽肿,磷脂能促进单核细胞增生，并使巨噬细胞转变 为类上皮细胞，从而形成肉芽肿,硫酸脑苷酯能抑制溶酶体同吞噬体结合,蜡质D可激发机体产生迟发超敏反应,蛋白质可激发机体产生超敏反应,2.3结核病的临床诊断,流行病学，临床表现，体征，胸部影像学,实验室检测：,痰涂片,细菌培养,结核菌素实验,结核抗体检查，可供参考,组织病理检查,3 结核分枝杆菌检测方法及其应用,3.1染色检测结核分枝杆菌方法,抗酸染色法：,玻片法：,浓集法：夹层杯法,妻-尼染色法,荧光染色法,3.2 微生物检测结核分枝杆菌的方法,细菌培养,罗-琴氏培养基：2周-5周才能长出菌落,Bactec TB 460、BactecMGIT 960：20天,液体变色培养基：德国MB Redox 系统,噬菌体裂解试验：噬菌体D29 对缓慢生长的结核分枝杆菌有亲噬性,结核杆菌L 型：涂片其形态不易与其他细菌的L 型相区别，蚌埠医学院研制的结核杆菌L 型液体培养基使结核杆菌L 型生长迅速,3.3 免疫学方法检测结核分枝杆菌抗体,PPD 试验：结核菌素蛋白衍生物皮肤试验,L AM(脂阿拉伯甘露聚糖) 抗原：敏感74.5%,结核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.9%,纯化B C G( 卡介苗) 蛋白：敏感性80.0%,PPD 抗原：敏感性83.6%,结核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD 等,新的免疫检测技术,T SPOT TB 技术，QuantiFERONTB,利用结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核特异的活化T 淋巴细胞, 这些淋巴细胞在受到结核杆菌特异抗原刺激后分泌干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。,3.4结核分枝杆菌分子生物学诊断技术,巢式PCR：,PCR-免疫层析法：,多重PCR:,定量PCR：,新的PCR技术应用于检测,SSCP：单链构象多态性分析，SSCP 用于结核杆菌基因的突变和耐药性的快速检测,PCR-RFLP 技术：PCR 和限制性内切酶相结合的技术，于鉴定分枝杆菌菌种，基因突变和耐药性检测,Gene Chips：检测结核杆菌、菌种鉴定、研究耐药基因以及基因组比较分析有灵敏快速、特异性高等特点。,纳米技术的应用,HSAM：杂交信号放大方法,利用Dynal 磁珠杂交分离靶基因省去了DNA,提取步骤，组装的纳米颗粒作为报告信号的结合载体，拥有数量巨大的亲和素位点，增加了报告信号( Biotin-FITC) 数量，放大了信号强度，提高了检测的灵敏度,3.5上述方法应用比较,染色检测：是临床诊断快速廉价易行的方法，但是阳性率太低。,细菌培养：结核菌感染的,诊断金标准,，速度太慢，阳性率仍然较低。,免疫学方法：一种快速、简单、有较好敏感性和特异性的结核病辅助诊断，但检测敏感性和特异性有待提高，但新的免疫方法的应用带来希望，但还需要大量的样本认证。,分子生物学方法:快速、有效、特异性和敏感性均较高。,4免疫室目前结核分枝杆菌检测试剂应用情况报告,1.检测结核抗体,2.采用是金标法,3.应用过二种以上的金标试剂,4.采用的原理相同，但针对的特异性抗体不相同,5.试剂的准确度、敏感性及特异性还有较大的提升空间,5 病例分析,一、男性患者，31岁。因反复咳嗽、咳痰、发热、盗汗伴游走性关节疼痛及结节性红斑1年，患者1年前因受凉后发热、咳嗽、咯痰，在某院诊为“上感”，经抗生素及对症治疗病情无缓解，咳嗽日渐加重，伴盗汗、乏力，踝、膝关节游走性红、肿、热痛及双下肢结节性红斑。曾就诊于数家医院均诊断为风湿性关节炎并发慢性支气管炎。,查体：T 37.5，P 86/分，BP 14.7/9.3kPa。发育正常，贫血貌。心界不大，心率86，心律规则，各瓣膜区无杂音，左肺可闻及干啰音。双膝、踝关节红肿，以左踝为著，双下肢可触及数个蚕豆大小结节性红斑。,实验室检查：WBC 6.4109/L，N 0.65，L 0.33/L，Hb 95g/L，ESR 85mm/h。抗“O”450U，RF阴性，ECG正常，彩色多谱勒超声心动图检查未见异常。胸片两肺文理增多，左踝关节X线摄片骨质未见异常痰涂片查抗酸杆菌3次阴性。,纤维支气管镜检查左上叶支气管粘膜充血水肿，有粗糙不平小颗粒，刷检涂片见大量抗酸杆菌，活检病理诊断为支气管内膜结核。,诊断：支气管内膜结核，结核变态反应性关节炎。,原因分析：体检不仔细或未拍摄X线胸片；只注意排除肺部结核而忽略了潜在的某些肺外结核或深部淋巴结结核；将颈淋巴结结核误诊为口、咽部一般细菌感染所致的非特异性淋巴结炎；未做结核菌素试验。,谢谢大家,