放射免疫分析

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,放射免疫分析,Radioimmunoassay,一、原理：,Ag + Ab AgAb + Ag,+,*,Ag,* AgAb + * Ag,*,Ag和,Ab量恒定,竞争结合,+,+,+,+,6,8,X100=75%,X100=50%,X100=25%,X100=12.5%,8,4,8,2,8,1,结论,* AgAb复合物的量取决于Ag的量,Ag量越大， * AgAb量越少,Ag量越小， * AgAb量越大,测量* AgAb量或测量多余* Ag量可推算出Ag量,二、测量步骤,恒量的* Ag、Ab加入反应管中,加入待测样品、或标准品（已知浓度）,37或4 温育,加入分离剂分离结合及游离部分,测定以总放射性为分母，测定* AgAb 为分子，计算结合%，以结合率为纵坐标，浓度为坐标，制作标准曲线,待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度,0 2 4 8 16 32 64 128,80 70 60 50 40 30 20 10,结 合%,浓 度,三、放免分析基本条件,标准品,标记抗原,特异抗体,分离剂分离结合与游离部分,分离剂要求,快速而完全分离,操作简便、来源容易、价格便宜,不受血清、外界条件及其它试剂的干扰,适用于任何容积的反应液,非特异结合率小,常用液相分离技术,双抗体法,特点：,分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价高，但成本高,沉淀法 聚乙二醇（w=6000）,特点：,快速，价廉，来源方便，受环境影响大,常用液相分离技术（续）,吸附法 吸附游离部分，适用于分离小分子游离抗原。活性炭、纤维素粉末,特点,快速、简便、准确性差,盐析法 饱和硫酸胺、硫酸钠,固相分离技术，按材料不同，可分为试管法、颗粒法、小盘法、纸片法,四、放免分析的优点,灵敏度高,特异性强,精确度高,用血量少,体外测量,单位换算,1 g=1000mg,1mg=1000,g,1g=1000ng,1ng=1000pg,非放射性体外分析技术,非同位素标记的条件,灵敏度,结合特性,均一性,稳定性,环境因素的不敏感性,临床应用,安全性,应用性,非放射性体外分析技术,酶免疫分析,发光免疫分析,化学发光免疫分析,酶放大化学发光免疫分析,电化学放光免疫分析,荧光免疫分析,时间分辨荧光免疫分析或解离增强镧系荧光免疫分析,BCPDA强荧光螯合物的时间分辨荧光免疫分析,酶促放荧光免疫分析,微粒子酶荧光免疫分析,荧光偏振免疫分析,金属离子免疫分析,