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,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,1,第六章 酶工程制药,药学院,生物制药教研室,学习要求,掌握,：酶的来源和生产、酶纯化的主要方法、固定化酶和固定化细胞的制备方法、酶反应器的基本类型,熟悉,：酶分离纯化的一般过程、固定化酶的性质和指标、酶反应器的性能评价及操作,了解,：酶工程的研究现状、酶工程在制药中的应用、治疗性的酶类药物,本章主要内容,概述,1,酶工程技术,2,酶工程研究新技术,3,酶工程在制药工业中的应用,4,第一节 概 述,一、酶与酶工程,1.,酶（,Enzyme,）,具有,催化活性,和,高度专一性,的生物催化剂,。,催化特点：,高效性,专一性,可调控,不稳定,1.,酶（,Enzyme,）,根据化学本质分为：,蛋白酶（,P,酶）,核酸酶（,R,酶）,蛋白酶,单纯酶,结合酶,（全酶）,=,酶蛋白,+,辅因子,辅酶,辅基,酶工程：,酶学,、,微生物学,与,工程学,相互渗透结合、发展而形成的一门新的技术学科。,化学酶工程（初级酶工程）：,通过化学修饰、酶的固定化、化学合成等改善酶的性质，提高催化效率,生物酶工程（高级酶工程）：,通过,DNA,重组技术生产目标酶，定向修饰与改造获得突变酶、合成全新的酶等,2.,酶工程,（,enzyme engineering,）,二、酶工程研究的产生与发展,1894,年，,日本科学家首次从,米曲霉,中提炼出,淀粉酶,，,并将淀粉酶用作治疗消化不良的药物,，,从而开创了人类有目的的生产和应用酶制剂的先例。,1908,年，,德国科学家从动物胰脏中提取出,胰酶,（,胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶的混合物,），,并将胰酶用于皮革的鞣制。,1911,年，,美国科学家从木瓜中提取出,木瓜蛋白酶,，,并将木瓜蛋白酶用于除去啤酒中的蛋白质浑浊物,。,酶工程的名称出现在,20,世纪,20,年代，主要指自然酶制剂在工业上的规模应用。,二、酶工程研究的产生与发展,1953,年，,Grubhoger,和,Schleith,提出了,酶固定化技术,。,1969,年，日本科学家在工业上利用,固定化氨基酰化酶,拆分了,DL-,氨基酸。,1971,年，,第一届国际酶工程会议,提出酶工程的主要内容：酶的生产、分离纯化、酶的固定化、酶及固定化的反应器、酶和固定化酶的应用。,二、酶工程研究的产生与发展,20,世纪,90,年代，借助基因工程技术，可经过酶基因重组，利用微生物表达生产酶制剂。,基因工程,+,发酵技术,+,发酵设备,二、酶工程研究的产生与发展,三、现代酶工程的研究内容,1.,酶的分离纯化、大批量生产及新酶和酶的应用开发；,2.,酶和细胞的固定化及酶反应器的研究,3.,酶的分子改造和化学修饰；,4.,有机相中酶反应的研究；,5.,酶抑制剂、激活剂的开发与应用研究；,6.,模拟酶、合成酶的研究；,7.,抗体酶、核酸酶的研究；,8.,酶的定向进化技术。,（一）疾病诊断,（二）疾病治疗,（三）药物生产,（四）分析检测,四、酶在医药领域的应用,1.,通过,酶活力变化,进行疾病诊断,酶,疾病与酶活力变化,淀粉酶,胰脏疾病，肾脏疾病时升高；肝病时下降,胆碱酯酶,肝病、肝硬化、有机磷中毒、风湿等，活力下降,酸性磷酸酶,前列腺癌、肝炎、红血球病变时，活力升高,碱性磷酸酶,佝偻病、软骨化病、骨瘤、甲状旁腺机能亢进时，活力升高；软骨发育不全等，活力下降,谷丙转氨酶,/,谷草转氨酶,肝病、心肌梗塞等，活力升高,-,谷氨酰转肽酶（,-GT,）,原发性和继发性肝癌，活力增高至,200,单位以上，阻塞性黄疸、肝硬化、胆道癌等，血清中酶活力升高,胃蛋白酶,胃癌，活力升高；十二指肠溃疡，活力下降,磷酸葡糖变位酶,肝炎、癌症，活力升高,端粒酶,癌细胞中含有端粒酶，正常体细胞内没有端粒酶活性,肌酸磷酸激酶（,CK,）,心肌梗塞，活力显著升高；肌炎、肌肉创伤，活力升高,2.,用酶测定,物质的量的变化,进行疾病诊断,酶,测定的物质,用途,葡萄糖氧化酶,葡萄糖,测定血糖、尿糖，诊断糖尿病,尿素酶,尿素,测定血液、尿液中尿素的量，,诊断肝脏、肾脏病变,谷氨酰胺酶,谷氨酰胺,测定脑脊液中谷氨酰胺的量，,诊断肝昏迷、肝硬化,胆固醇氧化酶,胆固醇,测定胆固醇含量，诊断高血脂等,DNA,聚合酶,基因,通过基因扩增，基因测序，诊断基因变异、检测癌基因,3.,酶在,疾病治疗,方面的应用,酶,来 源,用 途,淀粉酶,胰脏、麦芽、微生物,治疗消化不良，食欲不振,溶菌酶,蛋清、细菌,治疗各种细菌性和病毒性疾病,尿激酶,人尿,治疗心肌梗塞,链激酶,链球菌,治疗血栓性静脉炎，咳痰，血肿，下出血，骨折,青霉素酶,蜡状芽孢杆菌,治疗青霉素引起的变态反应,L-,天冬酰胺酶,大肠杆菌,治疗白血病,超氧化物歧化酶,微生物，植物，动物,预防辐射损伤，治疗红斑狼疮，皮肌炎，结肠炎,胶原酶,细菌,分解胶原，消炎，化脓，脱痂，治疗溃疡,溶纤酶,蚯蚓,溶血栓,核糖核酸酶,胰脏,抗感染，祛痰，治肝癌,4.,酶在,药物制造,方面的应用,酶,来源,用途,青霉素酰化酶,微生物,制造半合成青霉素和头孢菌素,11-,羟化酶,霉菌,制造氢化可的松,L-,酪氨酸转氨酶,细菌,制造多巴（,L-,二羟苯丙氨酸）,-,甘露糖苷酶,链霉菌,制造高效链霉素,酰基氨基酸水解酶,微生物,生产,L-,氨基酸,5-,磷酸二酯酶,桔青霉等微生物,生产各种核苷酸,多核苷酸磷酸化酶,微生物,生产聚肌胞，聚肌苷酸,无色杆菌蛋白酶,细菌,由猪胰岛素（,Ala-30,）转变为人胰岛素（,Thr-30,）,核糖核酸酶,微生物,生产核苷酸,蛋白酶,动物、植物、微生物,生产,L-,氨基酸,-,葡萄糖苷酶,黑曲霉等微生物,生产人参皂甙,-Rh,2,5.,酶在,分析检测,方面的应用,（1,）,酶试剂盒,过氧化氢酶检测试剂盒,(Catalase Assay Kit),通过显色反应来检测细胞、组织或其它样品中过氧化氢酶活性,（2,）,酶联免疫,(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ,ELISA),免疫检测：让,抗体,与,酶复合物,结合，然后通过,显色,来检测。,间接法,ELISA,检测,夹心法,ELISA,检测,竞争法,ELISA,检测,5.,酶在,分析检测,方面的应用,（3,）,酶标基因探针,将酶与,DNA,直接进行交联,杂交后只要与酶的底物显色便能观察结果。,检测乙肝病人血清中的,HBV DNA,检测转基因材料及其后代,5.,酶在,分析检测,方面的应用,（4,）,酶传感器,5.,酶在,分析检测,方面的应用,第二节 酶工程技术,1.,液体酶制剂：,稀酶液,/,浓缩酶液，纺织工业,2.,固体粗酶制剂：,粗酶液处理获得，皮革处理,/,纤维素水解等,3.,纯酶制剂,：,结晶、分离纯化后获得，分析试剂,/,药用酶,酶制剂的类型,学生授课,结合课本和酶工程所学内容，请各位同学按照以下分组情况准备,20min,左右的授课内容及,ppt,（下周一每组选,1,位同学在课堂上进行讲授），计入平时成绩。,酶制剂的来源及制备（,1-10,号）,酶的分离纯化（,11-20,号）,酶与细胞的固定化（,21-30,号）,酶反应器（,31-41,号）,第三,节,酶工程研究,新技术,本节内容,核酶,/,脱氧核酶,抗体酶,有机相的酶反应,酶分子的定点改造,酶分子的定向进化,酶分子的化学修饰,一、核酶（,ribozyme,）,(,一,),核酶的发现,(,一,),核酶的发现,上世纪,80,年代初期，美国科罗拉多大学博尔德分校的,Thomas Cech,和美国耶鲁大学的,Sidnery Altan,各自独立地发现,RNA,具有生物催化功能,，从而改变了生物催比剂的传统概念。,和共同获得了,1989,年度,诺贝尔化学奖,。,的研究工作,的研究工作,启示：,为什么能发现,RNA,的催化作用并获得诺贝尔奖？,如果你是一个,不为常识所束缚,的人，那么，你有可能获诺贝尔奖,为什么能发现,RNA,的催化作用并获得诺贝尔奖？,如果你能,根据别人刚刚发表的成果马上修正自己的研究工作,，那么，你有可能获诺贝尔奖。,认真做实验,认真看文献,1.,核酶：,具有生物催化功能的,RNA,。,生物催化剂,（,Biocatalyst,）,蛋白质类：天然酶,enzyme,极端酶,extremozyme,抗体酶,abzyme,生物工程酶,其它： 模拟酶,model enzyme,核酸类,:,核酶,ribozyme,脱氧核酶,deoxyribozyme,（二）核酶的概念和分类,核酶与蛋白质酶的比较,蛋白质酶的,一级结构,比核酶复杂,蛋白质酶具有一定,空间构象,，酶的活性中心具有刚性，核酶不具备,蛋白质酶的,活性中心,由氨基酸组成，核酶的活性中心是金属离子,核酶可以既是催化剂又是,底物,，蛋白酶只是催化剂；,核酶可以,传递遗传信息,，蛋白酶不可以,I,型内含子,剪接型核酶,mRNA,前体自我拼接,II,型内含子,内切核酸酶,+,连接酶,锤头核酶,剪切型核酶 发夹核酶,丁型肝炎病毒（,HDV),核酶,RNA,切割,蛋白质,-RNA,复合酶,2.,核酶的分类,（三）核酶在医药领域的应用,核酶治疗疾病的原理,核酶的给药途径,外源性给药,：直接将抗核酸酶降解的核酸注射到组织或细胞内。,内源性给药,：利用基因疗法，借助逆转录病毒载体和腺伴随病毒运送核酶,核酶的给药途径,核酶在医学上的应用,展望,二、脱氧核酶（,deoxyribozyme,）,利用体外分子进化技术合成的一种具有催化功能的,单链,DNA,片段,，具有高效的催化活性和结构识别能力,对于脱氧核酶的研究有望成为基因功能研究、核酸突变分析、治疗肿瘤、对抗病毒及肿瘤等疾病的新型基因治疗药物的新型核酸工具酶。,核酶,/,脱氧核酶面临的问题,三、抗体酶（,abzyme,）,（一）抗体酶的概念与特点,1.,抗体酶,/,催化抗体（,catalytic antibody,）,利用酶反应中,底物过渡态类似物,作为半抗原刺激免疫系统所产生的一类能够专一识别和催化酶反应中的,底物反应过渡态,的一类,单克隆抗体,，本质上是一类,具有催化活性的免疫球蛋白,。,2.,抗体酶的特点,相同点：都是,蛋白质,，都有,特异性,。,不同点：,1,）抗体无,催化活力,，酶有催化活力。,2,）酶是能与反应,过渡态,选择结合的催化物质，抗体是和,基态,紧密结合的物质。,3,）酶的活性和合成受到,代谢调节,，抗体只有在抗原存在时才产生。,抗体与酶的异同：,酶的催化在于能结合底物产生过渡态，降低能障（反应的活化能）。,以,过渡态类似物,作为半抗原，诱导与其互补构象的抗体，使其具有催化活性，可观察到抗体催化相应底物发生化学反应。,直接免疫动物,/,杂交瘤技术,/,基因工程技术,3.,抗体酶的制备方法,（,1,） 诱导法,动物免疫技术,+,杂交瘤技术,利用,底物过渡态类似物,制备抗体酶示意图,原理：掌握现有单克隆抗体的,抗体结合部位的氨基酸顺序,的基础上，对编码抗体酶结合部位的,基因碱基序列,进行,定点突变,，在结合部位换上有,催化作用,的氨基酸残基，进而改变抗体酶的催化效率。,噬菌体抗体库技术,/,噬菌体展示技术,（,2,） 基因工程法,（,1,） 前药的设计和活化,抗肿瘤药物：喜树碱、阿霉素、依托泊苷,4.,抗体酶的应用,（,2,） 疾病治疗,治疗可卡因上瘾,有机磷中毒,甲状腺疾病,肿瘤治疗,抗体介导前药治疗,(ADEPT),：,向体内注射能够与肿瘤组织特异性结合的抗体酶，当其结合到靶部位后，再注入前药，当药物扩散至肿瘤细胞表面或附近时，抗体酶可快速将其水解并释放出抗肿瘤药物，从而提高局部药物浓度，实现靶向治疗。,催化抗体,38C2,戒毒,阻断可卡因、鸦片和受体的结合,可卡因水解的过渡态类似物,磷酸单酯,单克隆抗体酶,15A10,：在可卡因到达作用位点前将其降解，从而降低其毒性,（,1,） 应用,有机合成中的应用,基础理论研究,在医疗上的应用,5.,抗体酶的发展前景,（,2,） 待解决问题,催化效率,抗体酶筛选,抗体酶专一性,底物抑制,催化基团的最适装配,四、有机相的酶反应,（一）有机相酶反应的特点,有利于疏水性底物的反应,可提高酶的热稳定性，提高反应温度加速反应,可改变反应平衡移动方向,可改变底物专一性,可防止由水引起的副反应,酶易于实现固定化,酶和产物易于回收,可避免微生物污染,（二）有机相酶反应具备条件,保证必需水含量。,选择合适的酶及酶形式。,选择合适的溶剂及反应体系。,选择最佳,pH,值。,四、有机相的酶反应,（三）有机相酶反应的溶剂体系,单相共溶剂体系（水,-,水溶性溶剂均相体系）,两相体系（水,-,水不溶性溶剂两相体系）,反相胶束体系,低水有机溶剂体系（单相有机溶剂体系）,四、有机相的酶反应,（四）有机相酶工程的应用,手性药物的拆分,手性高分子聚合物的制备,多肽的合成,甾体转化,五、突变酶（,mutational enzyme,）,在已知酶的结构与功能的基础上，有目的地改变酶的活性位点或基团，从而产生具有新性状的,突变酶,。,理性分子设计,思路：利用,定点突变技术,有目的地在已知,DNA,序列中取代、插入或删除特定的核苷酸,方法,1.,寡核苷酸介导的定点突变：,用含有突变碱基的寡核苷酸片段做引物，在体外以原基因序列为模板进行复制，诱变合成少量完整的突变基因，再体内扩增,2.,盒式突变：,利用一段人工合成的含基因突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中的相应序列。,应用,1.,提高酶活性及稳定性,阐明酶分子中某一基团的功能,2.,研究酶的功能基团,酶同源序列的比较,选择突变靶标 化学修饰,酶的二、三级结构,六、酶分子的定向进化,以已知的亲本野生酶为起点，经过随机的基因突变或重组，构建一个包括多种突变酶基因的,蛋白酶文库,，在此基础上进一步通过定向的选择性筛选，从中获得具有某些定向功能或性状的酶分子,非理性分子设计,原理：人为模拟自然进化机制，利用分子生物学手段结合灵敏的筛选技术，获得具有某些预期特征的进化酶。,方法,1.,随机突变,易错,PCR,：通过改变,PCR,的反应条件使碱基一定程度上,随机错配,，导致目的基因随机突变，构建突变库，筛选突变体。,2.,同源改组,有性,PCR,：亲本基因群中的优化突变,3.,非同源改组,渐进切割杂合酶技术：用核酸外切酶对两个亲本基因分别进行消化，再将两组片段化基因互相连接,方法,4.,结构域改组,利用内含子之间的重组使独立的外显子组装成编码新蛋白质的基因,5.,其他技术,酶法体外随机,-,定位诱变技术,酵母细胞重组增强组合文库技术,筛选策略,底物显色反应,改变培养条件,利用蛋白固有性质,高通量筛选,固相筛选,放射性染料筛选,荧光筛选,ELISA,七、酶分子的化学修饰,限制药用酶临床应用的因素：,对生产条件的要求高,具有一定免疫原性,受体内蛋白酶水解影响,理化和生物稳定性差,酶分子修饰的种类,1.,金属离子置换修饰,2.,酶分子的化学修饰,3.,酶分子的物理修饰,1.,酶的表面化学修饰,（,1,）,大分子结合修饰,（,2,）,侧链基团修饰,2.,酶分子内部修饰,（,1,）肽链有限水解修饰,（,2,）核苷酸链剪切修饰,（,3,）氨基酸置换修饰,（,4,）核苷酸置换修饰,酶分子的化学修饰,大分子修饰酶的应用,PEG-,超氧化物歧化酶（,superoxide dismutase, SOD,）,PEG-,溶血类蛋白质（链激酶,Streptokinase, SK;,尿激酶,urokinase, UK,等）,PEG-,天门冬酰胺酶（,Asparaginase,ASNase,）,消除了抗原性,延长了酶在体内的半衰期,用,Dextran,修饰,-,淀粉酶，,-,淀粉酶，胰蛋白酶、过氧化氢酶：,提高了酶的热稳定性。,第四节 酶工程技术在制药工业中的应用,酶工程制药优点,工艺简单、效率高、生产成本低。,环境污染小、产品收率高、纯度好。,一、在生物转化中的应用,二、在药用酶生产中的应用,6-,氨基青霉烷酸,（6-APA）,：,青霉素,G,水解除去侧链后的产物，也称无侧链青霉素。,生产半合成青霉素的最基本原料。,（,一）在抗生素工业中的应用例：固定化细胞法生产,6-,氨基青霉烷酸,青霉素酰化酶：,用同一种固定化青霉素酰化酶,，,只要改变,pH,等条件，,既可催化生成,6,-,APA,，也可催化,6,-,APA,与其他的羧酸衍生物进反应,合成具有不同侧链基团的青霉素,固定化细胞法生产,6-,氨基青霉烷酸,固定化细胞法生产,6-,氨基青霉烷酸,技术路线,固定化细胞法生产,6-,氨基青霉烷酸,斜面 细胞 固定化细胞,青霉素,G,转化液 滤液,6-APA,粗品,培养,固定,转化,过滤,抽提,填充床反应器,pH 7.5-7.8 40,明胶包埋法,氨基酸：,用于医药、食品以及农业。,合适比例的混合液可直接注入体内,补充营养,，氨基酸作为,增味剂,，可增加香味促进食欲，还可作为,饲料,，还可用于,制造人造纤维、塑料等。,（,二）在氨基酸工业中的应用例：固定化酶法生产,L-,氨基酸,氨基酸类的分类,1,蛋白质氨基酸,：编码氨基酸,非蛋白氨基酸：,D,型氨基酸、,-,氨基酸、,-,氨基酸等,2,衍生氨基酸：,谷氨酰胺、硫酸甘氨酸、磷葡精氨酸等,3,4,必需氨基酸：,赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸等,8,种,非必需氨基酸及半必需氨基酸,5,（,二）固定化酶法生产,L-,氨基酸,氨基酰化酶,：世界上第一种工业化生产的固定化酶，可以用于生产各种,L-,氨基酸药物。,1969,年，日本田边制药公司将从,米曲霉,中提取分离得到的氨基酰化酶，用,DEAE-,葡聚糖凝胶,为载体通过,离子键结合法,制成固定化酶，将,L-,乙酰氨基酸水解生成,L-,氨基酸。用来拆分,DL-,乙酰氨基酸，连续生产,L-,氨基酸，生产成本仅为用游离酶生产成本的,60,左右。,固定化酶法生产,L-,氨基酸,固定化酶法生产,L-,氨基酸,R-CH-COOH,R-CH-COOH,DL- NH-CO-R + H,2,O L- NH,2,R-CH-COOH,D- NH-CO-R,氨基酰化酶,两种产物的溶解度不同，很容易分离。,未水解的N-酰化,-D-,氨基酸经过外消旋作用后又成为D,L,型，可再次进行拆分。,泵,储,罐,反应产物,离心机,消旋反应器,晶体,L-Ala,L-Ala A-D-Ala,A-L-Ala,A-D-Ala,酶法生产,L-Ala,结 构,分子量,等电点,性 质,溶解性,L-Asp,L-Ala,酸性氨基酸,中性氨基酸,溶于水和盐酸，不溶于乙醇和乙醚,在水中有一定溶解性，不溶于丙酮及乙醚,例：,L,-,天冬氨酸和,L,-,丙氨酸的生产,（,1,）,L,-,天冬氨酸和,L,-,丙氨酸的性质,+CO,2,天冬氨酸酶,L-Asp,脱羧酶,（2）酶转化反应,（延胡索酸）,+NH,3,（,L-,丙氨酸）,（,L-,天冬氨酸）,（,3,）工艺路线,固定化,L-Asp,脱羧酶,转化液,B,延胡索酸,+ NH,3,固定化天冬氨酸酶,转化液,A,L-Asp,粗品,L-Asp,精品,L-Ala,粗品,L-Ala,精品,泵,储,罐,反应产物,离心机,母液回收,固定化酶柱子,晶体,L-Asp,L-Asp,延胡索酸氨盐,工艺路线示意图,DEAE-,葡聚糖,氨基酰化酶,菌种的培养：,大肠杆菌（）的培养,含天冬氨酸酶,假单胞菌（,Pseudomonas dacunhae),变异株的培养,含,L-,天冬氨酸,-,脱羧酶,细胞固定：,大肠杆菌（）的细胞：明胶包埋，加戊二醛交联,假单胞菌体固定：角叉菜胶包埋，加戊二醛交联,（,4,）工艺控制要点, 生物反应堆的制备（分,和,）, 转化反应（温度、,pH,值、催化剂）,两个反应堆的温度：,37 ,两个反应堆的,pH,值：反应堆,：；反应堆,：, 产品纯化与精制,（,4,）工艺控制要点,（,三）在核苷酸工业中的应用例：,固定化酶法生产,5-,复合单核苷酸,5,-复合单核苷酸：,用于治疗白血球下降、血小板减少以及肝功能失调等疾病。,核糖核酸经,磷酸二脂酶,作用，可分解为腺苷、胞苷、尿苷、鸟苷等磷酸化合物，该磷酸二脂酶存在于桔青霉细胞、谷氨酸发酵菌细胞、麦芽根等生物材料中，本法以,麦芽根,为材料制备磷酸酶。,工艺路线,磷酸二脂酶的制备,固定化磷酸二脂酶的制备,转化反应,5-复合单核苷酸的分离纯化,精制及灌封,麦芽根,ABXE-,纤维素,PBR,离子交换树脂,浓缩、除菌,二、在药用酶生产中的应用,（一）酶与心脑血管疾病治疗,溶栓酶：尿激酶、链激酶、蚓激酶,作用机理：促进人体血液内纤维蛋白酶的形成,t-PA,和前尿激酶：治疗急性脑卒中,口服纤溶酶类：纳豆激酶、天醅激酶,二、在药用酶生产中的应用,（二）酶与癌症治疗,癌症的发生与后天环境因素和生物因素有关,治疗：大肠癌、肝癌、白血病等,例：天冬酰胺酶治疗白血病,天冬酰胺具有促进白血病中癌细胞增长作用，天冬氨酰酶可破坏天冬酰胺的作用，但细胞内无法合成。,二、在药用酶生产中的应用,（三）其他,帕金森症,戈谢病,溶菌酶与抗生素联用,复习思考题,1.,突变酶、抗体酶的定义及制备方法。,2.,酶分子的定点改造的定义及制备方法。,3.,酶分子定向进化的定义及制备方法。,4.,回顾酶工程相关内容，了解酶工程在药物生产中的应用。,
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