糖类、蛋白质、脂肪的鉴定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验,生物组织中糖类脂肪和蛋白,质鉴定,1,思考题：,1、糖类、脂肪、蛋白质鉴定的,实验原理,2、常见的还原糖有哪些？取材的要求,3、斐林试剂的组成，使用时的注意事项,4、双缩脲试剂的组成，使用时注意事项,5、斐林试剂和双缩脲试剂的比较,6、脂肪鉴定中酒精的用法和作用,7、脂肪鉴定中能否直接观察颜色？借助什么来观察？,8、如何鉴定淀粉，颜色反应如何,2,1.实验原理,：,化学试剂+有机化合物特定的颜色,(,1,) 还原糖 + 斐林试剂,水浴加热,砖红色 沉淀,(2) 脂肪+苏丹,橘黄色,脂肪,+,苏丹,红色,(3) 蛋白质,+,双缩脲试剂,紫色,3,2、常见的还原糖有哪些？取材的要求,还原糖,：可被氧化充当还原剂的糖。,(,常见的有：葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖,),注意：蔗糖不是还原糖,3、斐林试剂的组成，使用时注意事项,斐林试剂：甲液：,0.1g/mL,的NaOH溶液,乙液：,0.05g/mL,的CuSO,4,溶液,使用注意事项：等量,混合，,现配现用,（,NaOH,+,CuSO,4,）,4,1.,点拨：,还原糖 + 斐林试剂,砖红色沉淀,可溶性,还原糖,及,斐林试剂,发生作用，可生,成,砖红色,的Cu,2,O沉淀,。,（,放在,盛有,50-65,温水的大烧杯）,水浴,加热,颜色变化：浅蓝色 棕色 砖红色,5,1,步骤：,样液制备,:,（取材5g，加入石英砂和,5ml水）,(1),取样液2ml于试管中,(2),加入新配制的斐林试剂1ml（甲液和乙液,等量混合,均匀后再加入）,盛有,50-65,温水的大烧杯）,(3),水浴加热,2min左右,(（4）,观察颜色变化（,浅蓝色棕色砖红色）,6,注意事项：,（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果,梨,白萝卜。,思考：西瓜、甘蔗、甜菜可以吗？为什么？,（2）试剂：斐林试剂(,等量混合、,现配现用,),甲液：,0.1g/mL,的NaOH溶液,乙液：,0.05g/ml,的CuSO,4,溶液,7,4、双缩脲试剂组成，使用时注意事项,8,双缩脲试剂组成：,A液：0.1g/mL的NaOH溶液,B液：0.01g/mL的CuSO,4,溶液,使用注意事项：,先加,A,液1mL,于样液中，,再加,B,液,4滴,于样液中,（1）蛋白质,+,双缩脲试剂 紫色,9,2,步骤：,（1）,试管中加样液2mL,（2）,加双缩脲试剂A液,1mL,（,造成碱性环,境,）,，,摇匀,（3）,加双缩脲试剂B液,4滴,，,摇匀,（4）,观察颜色变化（,紫色,）,注：样液浓度不宜过高，以免实验后黏住试管壁，洗不干净。,B液不能过量，多余的B液会,及,A液反应成蓝色，而掩盖生成的紫色,。,10,斐林试剂,双缩脲试剂,甲液,乙液,A液,B液,成分,鉴定物质,添加顺序方法,反应条件,反应现象,5,.,比较,斐林试剂,和,双缩脲试剂,0.1g/mLNaOH,同甲液,0.0,1,g/m,L,CuSO,4,0.05g/mLCuSO,4,还原性糖,蛋白质,等量混合后再加入,先加A液,1mL，摇匀，,再加B液4滴,50-65,水浴加热,砖红色,沉淀,紫色,络合物,不需,加热，摇匀,11,6、脂肪鉴定中酒精的用法和作用,7、脂肪鉴定中能否直接观察颜色？借助什么来观察？,12,3.,脂肪+苏丹橘黄色,脂肪,+,苏丹红色,13,（2）步骤,材料的选取：含脂肪量高的组织，如花生的子叶。,取材： 取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮,切片,制,片,：（切片越薄越好）将,最薄,的花生切片放在载玻片中央,染色：滴23滴苏丹染液,，染色,3min,，用吸水纸,吸去染液,，再,滴,体积分数50%,的,酒精洗去浮色,，再用吸水纸吸去,多余的酒精（,苏丹易溶于酒精中，避免影响实验结果,）,，,滴12滴清水于材料切片上盖上盖玻片,镜检,观察,：光学,显微镜,对光低倍镜寻找着色圆形小颗粒高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒,14,8、如何鉴定淀粉，颜色反应如何,15,用试管取2mL待测组织样液，向试管内滴加12滴碘液，观察颜色变化。,4、淀粉,+,碘,蓝色,加,12,滴碘液,16,1.,鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂,A,斐林试剂,B,双缩脲试剂,C,苏丹,染液,D,苏丹,染液,2.,能及斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是,A,淀粉,B,果糖,C,蔗糖,D,纤维素,3.,下列哪个实验用到显微镜（ ）,A,可溶性还原糖的鉴定,B,蛋白质的鉴定,C,脂肪的鉴定,D,淀粉的鉴定,A,C,B,17,4.,用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜色的变化过程为（ ）,A,无色一砖红色（沉淀）,B,浅蓝色一砖红色（沉淀）,C,浅蓝色一蓝色一砖红色（沉淀）,D,浅蓝色一棕色一砖红色（沉淀）,5.,下列物质中，能被苏丹,IV,染液染成红色的是（ ）,A,马铃薯块茎,B,浸软的蓖麻种子,C,蛋清液,D,苹果,D,B,18,6.,还原糖的实验中，加入斐林试剂时必须要,A,先加入斐林试剂甲液，后加入乙液,B,先加入斐林试剂乙液，后加入甲液,C,将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再加,D,以上,A,、,B,、,C,三种操作方法都正确,7.,鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂正确做法是,A,先加,A,液，混合后再加,B,液摇匀观察,B,先加,B,液，混合后再加,A,液摇匀观察,C,A,、,B,液混合后加入，摇匀后观察,D,A,、,B,液同时加入样液，摇匀后观察,C,A,19,即：还原糖中的醛基（CHO）被,Cu(OH),2,氧化,，,Cu(OH),2,被还原成,砖红色,的Cu,2,O沉淀,还原糖的鉴定原理：,还原糖+斐林试剂砖红色沉淀,20,斐林试剂,双缩脲试剂,甲液,乙液,A液,B液,成分,鉴定物质,添加顺序方法,反应条件,反应现象,5,.,比较,斐林试剂,和,双缩脲试剂,0.1g/mL的NaOH溶液,0.1g/mL的NaOH溶液,0.01g/mLCuSO4溶液,0.05g/mL的CuSO4溶液,还原性糖,蛋白质,甲液和乙液等量混合均匀后再加入,先加双缩脲试剂A液1mL，摇匀，再加双缩脲试剂B液4滴,50-65水浴加热,砖红色沉淀,紫色络合物,不需加热，摇匀即可,21,蛋白质的鉴定原理：,蛋白质,及,双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。,蛋白质分子中含有很多,肽键,，在,碱性溶液（即A液可造成碱性环境）,中能与双缩脲试剂中的Cu,2+,作用，产生紫色络合物。,22,