培养基的配制和灭菌

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2006/02,*,微生物学实验,实验四 培养基的配制及灭菌,执 教,1,学习培养基配制的原理和基本步骤,学习高压蒸汽灭菌的原理和方法,实验目的,2,实验原理,3,一、常用器皿的洗涤与包扎：,试管（塞）：,10,支,三角瓶,250mL,（棉塞）：,1,个,1ml,吸管,6,支, 10ml,吸管,1,支,培养皿,10,个（一包）,制作涂布器,2,个：用酒精灯,将以上用品包扎后，灭菌。,三,.,实验步骤,培养基的配制,4,二,牛肉膏蛋白胨培养基的制备（斜面,1,支,/,人、,培养皿,1,个,/,人、三角瓶固体,200mL/3,组）,配方：,营养肉汤,1.8g,琼脂,2g,固体培养基,2%(1.5-2.5%),蒸馏水,100mL,三,.,实验步骤,培养基的配制,5,1.,斜面的制备,准确地称取营养肉汤,1.8*2 g,放入烧杯中。在上述烧杯中先加入,200 ml,水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂,4g,加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，每支试管约,4ml,。（,注意：每人,1,支试管，,3,个组一起做,）。加塞，包扎后，灭菌。,注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。,三,.,实验步骤,培养基的配制,6,2.,固体培养基的制备,准确地称取营养肉汤,1.8*2 g,放入三角瓶中。加入,200 ml,水，然后，将称好的琼脂,4g,加入，用玻棒搅拌均匀。加塞，包扎后，灭菌。每,3,组,1,瓶。,注意：在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按,1.5%2.0%,的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。,三,.,实验步骤,培养基的配制,7,说明：,加塞： 培养基分装完毕后，在试管口和三角瓶口上塞上棉花塞（或泡沫塑料塞），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。,包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。,标记：用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。,三,.,实验步骤,培养基的配制,8,4,灭菌,将上述培养基以,0.103Mpa,121,20min,高压蒸气灭菌,.,5.,搁置斜面,将灭菌的试管培养基冷至,50,左右,(,以防斜面上冷凝水太多,),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度 的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。,6.,到固体平板,将灭菌培养基降温,50,，到固体平板。,三,.,实验步骤,培养基的配制,9,高压蒸汽灭菌操作步骤：,121, 20min,（,15-30min,）,1.,首先将内层锅取出，再向外层锅内加适量的水，使水面与三角架相平为宜。,注意：切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅干而引起爆炸事故,2.,放回内层锅，并装入灭菌物品。,注意：不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞,三,.,实验步骤,高压蒸汽灭菌,10,3.,加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。,4.,加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至所需时间。本实验用,0.1MP,，,121.5,，,20,分钟灭菌。,注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力。故锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。,三,.,实验步骤,高压蒸汽灭菌,11,5.,灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“,0”,时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。,注意：压力必须降至“,0”,时才能打开排气阀，开盖取物。否则，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。,三,.,实验步骤,高压蒸汽灭菌,12,Thank You !,13,Thank You !,14,