影响实验结果的环境因素及2011年实验动物国标修改

,国家药物安全评价监测中心（,NCSED,）,2011,年,11,月培训汇报,-11,月,10-11, Charles River,亚洲短期培训,-11,月,24-25,新版国家标准详解培训班,(,二期,),2011.12.6,提纲,影响实验结果的环境因素,（动技部近期改进事项）,病原生物相关国标的修改,实验动物病源生物监测目录,影响实验结果的环境因素,环境,(,外部,),因素,温度,病原生物,湿度,(,粉尘 刺激性气味,),噪音,内在因素,光照,疾病 遗传,饲养管理 饲养密度,生理节律 代谢机能,实验操作 运输,饲料 饮水 垫料,影响实验结果的环境因素,温度,恒温动物能够适应一定的温度变化范,但是,保持最低的温度波动十分重要,(,日温差,4,),长时间超过耐受范围,可能诱发临床体征的改变,.,热的中性域,(TNZ):,恒温动物发挥最小的能量以维持核心体温的温度范围。,高于或者低于,TNZ,将导致动物行为或适应性调整以保证体内平衡：身体蜷缩、立毛、外周血管收缩,/,扩张、呼吸及食物消耗量等的改变等。,长时间暴露于高,/,低的温度，或者适应性调整不足以维持体内平衡时，会导致基础代谢率发生改变。,（普通环境,16-26,，屏障环境,20-26,）,物种,温度范围,小鼠,4 34,大鼠,633,豚鼠,4 34,兔子,4 33,恒河猴,635,犬,-1028,常用实验动物的耐受温度范围,影响实验结果的环境因素,温度,环境温度的改变可能会影响毒性实验的结果,在啮齿类体内，温度可导致,Amphetamine,的毒性,而麻黄素的毒性,特定温度的预暴露也可能影响动物的毒性反应,小鼠暴露于,4,的环境,7,天以后，对,-antagonist isoproterenol,的毒性反应比暴露于,24,环境中的对照小鼠强（,100,倍）,环境温度升高的急性效应,动物出现死亡，雄性大鼠繁殖性能下降（睾丸发育退化）,环境问题升高的慢性效应,生长速率降低,每窝产仔数量减少,新生动物死亡率升高,影响实验结果的环境因素,湿度,(40-70%),偏高,微生物易于繁殖，动物易发生传染病,饲料垫料易于霉变,与高温协同作用：抑制动物的蒸发散热，危害巨大,与低温协同作用：显著增加动物的非蒸发散热,偏低,使动物皮肤和黏膜发生干裂，减弱皮肤和黏膜对微生物的防御能力,使室内灰尘飞扬，易引起动物的呼吸道疾病,相对湿度低于,40%,时，大鼠容易发生环尾症，可能导致死亡率升高,低湿环境下，常发生大、小鼠乳母拒绝哺乳或食仔现象，仔鼠发育不良、体重增长停滞,不同因素对有效环境温度的影响及给动物健康与福利的对应危害,影响因素,极低温度,危害程度,极高温度,危害程度,相对湿度高,几乎没有影响,低,热得多,极高,空气流速高,冷得多,高,凉爽,低,粮食匮乏,冷得多,高,几乎没有影响,低,饮水匮乏,更冷,中,热得多,高,高密度,暖和,无影响或影响正面,热很多,极高,生病（发热）,更冷,中等,更热,中等,肥胖（皮下绝缘好）,暖和（保护）,低,更热,高,应激基因敏感型,更冷,高,更热,高,表面覆盖（羽毛和毛发）,暖和,保护,更热,高,过往经验,或适应,更冷,高,或保护,更热,高,或保护,注：数据来源：,Guidelines for the Humane Transportation of Research Animals,，,NRC 2006.,影响实验结果的环境因素,噪音,来源,关门（,84-105db,），,说话、喊叫（,83-100db,），,推车（,83db,）,压差条件下密封不严产生哨声,动物,兔子蹬地，非人灵长类晃动笼具的声音,非人灵长类动物和狗的叫声,楼下饲养的犬吠声音可能对楼上的影响（,80-82db,）,报警设备测试,广播系统,等等,（,60db,）,影响实验结果的环境因素,影响实验结果的环境因素,噪音,常见影响,听觉：听力丧失,非听觉：,心血管：血压升高（大鼠，猕猴）；大鼠心肌肥大、心率加速、外周血管收缩、呼吸频率加快等,神经（听源性癫痫）、激素,/,生化、生殖、睡眠、行为等等,突然的尖锐、大声的噪音会引发癫痫发作,记忆性的癫痫,间歇性和持续性的噪音,通常超过,85-100db,最有可能导致临床和生理的改变,影响实验结果的环境因素,光照,重要参数：,周期、强度、,波长,显著影响：繁殖、行为、生理机能，且有种群差异,光周期,较长的光周期可能会改善某些种群,/,品系的繁育情况,（,12/12,，,14/10,）,恒定的光照，能导致大鼠卵巢的改变，出现持续发情（无周期性）,光强度,光毒性视网膜病变：白化啮齿类大小鼠,高强度：延长发情周期，降低繁殖性能,（动物照度,：大、小鼠、豚鼠,15-20lux,，犬、猴、兔,100-200lux,）,（,工作照度：,200,，,原国标最大离地,1,米照度不超过,300lux,的意义，长期实验有必要定期调整和改变动物放置的位置）,影响实验结果的环境因素,病原生物,导致临床疾病：发病和死亡可能会影响研究项目,无临床症状感染，但产生的变化会扰乱研究结果,组织学改变：肝脏、肾脏变化,生化改变,免疫学差异,等等,粉尘,：病原微生物重要的传播媒介（空气洁净度和落下菌）,（空气洁净度：屏障,7,级，普通无要求）,（落下菌：屏障环境每平皿,3,个,/,半小时，普通环境无要求,）,影响实验结果的环境因素,饲料,营养成分,全价饲料采用了标准配方,营养成分相对稳定,常规营养成分方面小的改变不会明显影响实验结果,蛋白质,脂肪,水分,碳水化合物,灰份,优质饲料只需要检验少量项目的有毒,/,致癌物质即可,微生物污染,可能随季节、饲料类型和水分含量而变化。,可能会发生沙门氏菌引起的饲料污染，并且在最终产品中存活。,颗粒饲料生产过程中仅在短时间内可能达到,88,的温度，达不到灭菌效果。,饲料中霉菌的影响主要由产毒霉菌产生的毒素所引起的。,必须营养,如：,Vc,（豚鼠，猴）,（探讨各类饲料的检测指标）,影响实验结果的环境因素,垫料,材质,储存,分析：参考饲料,饮水,可能的污染物质：重金属、杀虫剂、挥发性有机物，由水传播的微生物病原体等,水质硬度,根据检测结果进行适当处理,影响实验结果的环境因素,饮水,普通处理选择,消毒处理：酸化处理，加氯消毒，反渗透，臭氧消毒，过滤（颗粒物，活性碳），去离子,高压灭菌,酸化抑菌：,改变饮水消耗量，,生长速率，及器官比重，,改变消化道菌群,/,数量。,加氯：,消毒能力较强，,有报道称可引起免疫系统改变，,可能产生有致癌性和细胞毒性，影响毒性评价结果。,影响实验结果的环境因素,小结,许多环境因素对实验结果的影响力比较小,设立同期对照十分重要,将抵消很多环境因素的影响,但是，当比较长期研究及不同的机构间的研究时仍然有问题。,规范饲养设施中的环境条件将有助于减少由长时间引起的变化,饲养条件：清洁，规律，恒定,饲料、垫料、饮水等：符合动物生长特性，无菌，无,/,低有害物质,生物安全程序：人流,/,物流,/,动物流,/,气流控制，外来人员的控制管理。,等等。,影响实验结果的环境因素,环境,(,外部,),因素,温度,病原生物,湿度,粉尘 刺激性气味,噪音,内在因素,光照,疾病 遗传,饲养管理 饲养密度,生理节律 代谢机能,实验操作 运输,饲料 饮水 垫料,影响实验结果的环境因素,光照：,新增动物照度（常规实验）,生殖实验建议维持原照度，可尝试改变周期（,12/12,14/10,）,屏障基本改造完成,普通动物区域也可实现,但均需要继续改进,.,饲料间,夏季温度基本能保证在,20,上下,冬季甚至超过,25,正在计划改造饲料间,目标将冬季温度控制到小于等于,21,饮水,:,新引入实验动物饮水软化装置,有害物质特别是硬度得到了有效降低,序号,检测项目,计量单位,未高压灭菌过滤水,未高压灭菌自来水,委托,自检,委托,自检,1,色度（,Color,）,Degree,5,0,5,2,2,浑浊度,NTU,0.71,0,0.72,1,3,pH,7.65,6.5,7.79,7.5,4,硝酸盐（,NO,3,-,）,mg/L,0.22,0.2,3.32,510,5,亚硝酸盐（,NO,2,-,）,mg/L,ND,ND,ND,ND,复核,0.003,0.006,6,总硬度（以碳酸钙计）（,Total Hardness,）,mg/L,7.41,010,208,100200,7,氯化物（,Cl,-,）,mg/L,0.68,02,20.8,20-50,8,锌（,Zn,）,mg/L,ND,00.2,ND,0.20.5,9,三氯甲烷（,Trichloromethane,）,mg/L,0.00084,0.00082,10,硫酸盐（,SO,4,2-,）,mg/L,0.78,36.6,11,氟化物（,F,-,）,mg/L,ND,0.36,12,耗氧量（以,O,2,计）,mg/L,ND,0.45,13,溶解性总固体（,TDS,）,mg/L,10,342,饮水软化装置处理前后水质对比,另有,20,项指标在处理前后均未检出,新版国家标准详解培训班学习心得,本次学习的标准项目,GB14925-2010,实验动物 环境及设施（替代,GB14925-2001,）,GB14922.1-201?,实验动物 寄生虫学等级监测,GB14922.2-2011,实验动物 微生物学等级及监测（替代,GB14922.2-2001,）及涉及的部分检测方法,GB14923-2010,实验动物 哺乳类实验动物的遗传质量控制（替代,GB14923-2001,）,新版国家标准详解培训班学习心得,本次标准的总体印象,完全强制,部分强制,+,部分推荐,引用标准删除了年份，而以“最新”替代,抗体效价合格率由原来必须达到,100%,才算免疫合格改为只需要达到,70%,即为合格,新版国家标准详解培训班学习心得,GB14922.2,废除了对“单核细胞增生性李斯特杆菌”的检验要求,GB/T 14926.21,普通级兔如果免疫接种,兔出血热,疫苗，则,HAI,抗体效价应大于,1,：,10,，同时免疫抗体合格率,70%,即判断该群里免疫合格,GB/T 14926.46,犬钩端螺旋体 免疫 抗体合格率,70%,即判断该犬群里免疫合格,GB/T 14926.56,犬狂犬病病毒 免疫抗体合格率,70%,即判断该犬群里免疫合格,GB/T 14926.57,犬细小病毒 免疫 抗体合格率,70%,即判断该犬群里免疫合格,GB/T 14926.58,传染性犬肝炎病毒 免疫 抗体合格率,70%,即判断该犬群里免疫合格,GB/T 14926.59,犬瘟热病毒 免疫 抗体合格率必须达到,100,%,才能判断该犬群里免疫合格,病原种类,病原项目,寄生虫,Parasites,体外寄生虫（节肢动物）,Ectoparasites,弓形虫,Toxoplasma gondii,病毒,Viruses,狂犬病病毒,Rabies Virus,（,RV,）,犬细小病毒,Canine Parvovirus,（,CPV,）,犬传染性肝炎病毒,Infectious Canine Hepatitis Virus (ICHV),犬瘟热病毒,Canine Distemper Virus (CDV),细菌,/,真菌,Bacteria/Fungi,沙门菌,Salmonella spp.,布鲁杆菌,Brucella spp.,皮肤病原真菌,Pathogenic dermal fungi,实验动物病源生物控制目录,犬,Canine,病原种类,病原项目,寄生虫,Parasites,体外寄生虫（节肢动物）,Ectoparasites,弓形虫,Toxoplasma gondii,病毒,Viruses,猕猴疱疹病毒,1,型（,B,病毒）,Cerconpithecine HerpesvirusType1,（,B-virus,）,细菌,/,真菌,Bacteria/Fungi,沙门菌,Salmonella spp.,志贺菌,Shigella spp.,结核分支杆菌,Mycobacterium tuberculosis,皮肤病原真菌,Pathogenic dermal fungi,实验动物病源生物控制目录（续,1,）,非人灵长类（恒河猴，食蟹猴）,Non-human Primates,（,Macaca Mulatta,Macaca Fascicularis,）,实验动物病源生物控制目录,续,2,病原种类,病原项目,寄生虫,Parasites,体外寄生虫（节肢动物）,Ectoparasites,弓形虫,Toxoplasma gondii,全部蠕虫,All Helminths,鞭毛虫,Flagellates,纤毛虫,Ciliates,病毒,Viruses,汉坦病毒,Hantavirus (HV),仙台病毒,Sendai Virus (SV),小鼠肺炎病毒,(PVM)Pneumonia Virus of Mice,呼肠孤病毒,III,型,(Rec-3)Reovirus type III,大鼠细小病毒,RV,株,Rat Parvovirus,（,KRV,）,大鼠细小病毒,H-1,株,Rat Parvovirus,（,H-1,）,大鼠冠状病毒,/,大鼠涎泪腺炎病毒,Rat Coronavirus,（,RCV,）,/ Sialodacryoadenitis Virus(SDAV),细菌,/,真菌,Bacteria/Fungi,沙门菌,Salmonella spp.,支气管鲍特杆菌,Bordetella bronchiseptica,支原体,Mycoplasma spp.,鼠棒状杆菌,Corynebacterium kutscheri,泰泽病原体,Tyzzer,s organism,肺炎克雷伯杆菌,Klebsiella pneumonica,嗜肺巴斯德杆菌,Pasteurella pneumotropica,金黄色葡萄球菌,Stphylococcus aureus,绿脓杆菌,Pseudomonas aeruginosa,大鼠,Rats,病原种类,病原项目,寄生虫,Parasites,体外寄生虫（节肢动物）,Ectoparasites,弓形虫,Toxoplasma gondii,全部蠕虫,All Helminths,鞭毛虫,Flagellates,纤毛虫,Ciliates,病毒,Viruses,鼠痘病毒,Ectromelia Virus(Ect.),小鼠肝炎病毒,Mouse Hepatitis Virus,（,MHV,）,仙台病毒,Sendai Virus (SV),小鼠肺炎病毒,(PVM)Pneumonia Virus of Mice,呼肠孤病毒,III,型,(Rec-3)Reovirus type III,小鼠细小病毒,Minute Virus of mice (MVM),细菌,/,真菌,Bacteria/Fungi,沙门菌,Salmonella spp.,支原体,Mycoplasma spp.,鼠棒状杆菌,Corynebacterium kutscheri,泰泽病原体,Tyzzer,s organism,肺炎克雷伯杆菌,Klebsiella pneumonica,嗜肺巴斯德杆菌,Pasteurella pneumotropica,金黄色葡萄球菌,Stphylococcus aureus,绿脓杆菌,Pseudomonas aeruginosa,实验动物病源生物控制目录,续,3,小鼠,Mice,谢谢！,GB14925,修改前后对比,序号,GB14925-2001,GB14925-2010,1,标准的范围,实验动物繁育，生产及实验环境条件和设施技术要求及检测方法，,实验动物及实验动物设施和环境条件技术要求及检测方法，,2,引用标准,GB3095 1996,环境空气质量标准,GB3096 1993,城市区域环境噪声标准,GB4792 1984,放射卫生防护基本标准,GB5749 1985,生活饮用水卫生标准,GB8978 1996,污水排放综合标准,GB50243-1997,通风与空调工程及验收规范,GB50259 1996,电气装置安装工程电气照明装置施工及验收规范,GBJ73-1984,洁净厂房设计规范,GBJ68-1984,建筑结构设计统一标准,JGJ-71-1990,洁净室施工及验收规范,GB5749,生活饮用水卫生标准,GB8978,污水综合排放标准,GB18871,电离辐射防护与辐射源安全基本标准,GB19489,实验室生物安全通用要求,GB50052,供配电系统设计规范,GB50346,生物安全实验室建筑技术规范,（最新标准）,GB14925,修改前后对比,GB14925,修改前后对比,GB14925,修改前后对比,动物实验间环境技术指标,温度：屏障环境和隔离环境均变成,20,26,，和动物生产间保持一致，原国标为,20,25,，豚鼠、地鼠普通环境温度变成,18,29,，和动物生产间保持一致，原国标为,19,26,日温差：变成“最大日温差”，数值全为,4,，原国标普通环境为,4,，其他环境为,3,换气次数：变成“最小换气次数”普通环境：,8-108,，屏障环境：,10-2015,，隔离环境：,20-5020,空气洁净度：变为屏障环境,7,级，隔离环境,5,级或,7,级,气流速度：变为“动物笼具处气流速度”（,0.2),原来为,0.1,0.2,压强梯度：变为“相通区域的最小静压差”（屏障环境,10,，隔离环境,50,），原来屏障环境,20,50,，隔离环境,100,150,落下菌数：变成“沉降菌最大平均浓度”（,CFU/0.5h, 90mm,平皿）普通环境原为,30,，现在没有要求,照度：动物照度无变化，工作照度变成“最低工作照度”，数值由,150,300,改为,200,GB14925,修改前后对比,工艺布局,1.,繁育、生产区,:,2.,动物实验区,:,包括缓冲间、实验饲育间、清洁物品贮藏室、清洁走廊、污物走廊,3.,辅助区,:,包括仓库、洗刷间、废弃物品存放处理间,(,设备,),、密闭式实验动物尸体冷藏存放间,(,设备,),、机械设备室、淋浴间、工作人员休息室,1.,生产区,:,2.,动物实验区,:,包括缓冲间、风淋室、检疫室、隔离室、操作室手术室、实验饲育间、清洁物品贮藏室、消毒后室、走廊,3.,辅助区,:,包括仓库、洗刷消毒室、废弃物品存放处理间,(,设备,),、解剖室、密闭式实验动物尸体冷藏存放间,(,设 备,),、机械设备室、淋浴间、工作人员休息室、更衣室,感染实验、染毒实验应在负压设施或负压设备内操作,GB14925,修改前后对比,