培养基的配制

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,、,了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。,2,、,学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。,3,、,掌握高压蒸汽灭菌的方法步骤。,实验目的,培养基的配制,培养基,(culture medium),是,指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。,自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应,含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适,。,为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的,pH,。,实验原理,牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和,NaCl,。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而,NaCL,提供无机盐。,琼脂在常用浓度下,96,时溶化，在,40,时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。,常用培养基：,牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；,高氏一号培养基用于培养放线菌；,马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。,常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为,1.5%-2%,；半固体培养基琼脂加量为,0.5%-0.8%,。,实验分组安排,4-5,人一组,配制牛肉膏蛋白胨,固体,培养基,400,mL,马铃薯糖琼脂培养基,200,mL,淀粉琼脂培养基（高氏培养基）,200,mL,平皿,30,个,99,mL,无菌水 装三角瓶,6,瓶,9,mL,无菌水 试管装,12,支,1,mL,吸管,15,支,牛肉膏蛋白胨,固体,培养基 斜面,5,支,牛肉膏蛋白胨培养基配方：,牛肉膏,3g,蛋白胨,10g,NaCl,5g,琼脂,15-20g,水,1000ml,pH 7.4-7.6,淀粉琼脂培养基（高氏培养基）,：,可溶性淀粉,20 g,硝酸钾,1 g,磷酸氢二钾,0.5 g,NaCl,0.5 g,硫酸镁,0.5g,硫酸亚铁,0.01,克,琼脂,15-20g,水,1000ml,pH 7.2-7.4,马铃薯蔗糖琼脂培养基：,把马铃薯洗净去皮，取,200,克切成小块，加水,1000,毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入,15,克琼脂，煮沸溶解后加蔗糖,20,克补足水分,pH,值调到,7.2,7.4,1,、,称量及溶化,2,、调,pH,3,、加琼脂、溶化、定容、（过滤）,4,、分装、加塞、包扎,5,、灭菌,6,、摆斜面,操作步骤,称量与溶化：,注意：,1,）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。,操作步骤,(continued),称量与溶化：,注意：,2,）蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品瓶盖也不要盖错。,操作步骤,(continued),调,pH,值：,在未调,pH,值前，先用精密,pH,试纸测量培养基的原始,pH,，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入,1 mol/L,NaOH,边加边搅拌，并随时用,pH,试纸测其,pH,，直至,pH,达要求。反之，用,1mol/L,HCl,进行调节。,操作步骤,(continued),加琼脂、溶化、定容、（过滤）, 琼脂一般应在调好了,pH,后加入，琼脂的加入不会影响培养基的,pH,。,琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则琼脂过多,。, 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应补充水分至所需量。,操作步骤,(continued),分装：,1,）装量：,液体,试管高度的,1/4,左右,固体,试管高度的,1/5,，灭菌后摆斜面,半固体,一般为试管高度的,1/3,，灭菌后垂直放置,操作步骤,(continued),棉塞,制作方法：,加塞：,棉塞 或 硅胶塞,作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。,包扎：,加,塞,后，试管通常每,7,支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。,以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。,用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。,操作步骤,(continued),灭菌时包牛皮纸,灭菌：, 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌, 通常灭菌条件为,1.05kg/cm,2, 121,灭菌,20,分钟；含糖量高的培养基，则为,0.56kg/cm,2,115,灭菌,30,分钟。,操作步骤,(continued),摆,斜面：, 成,扎,摆放，不需将每支试管单独摆放, 最好待培养基冷至,60,时摆斜面，以免形成大量冷凝水,无菌,检查：,将灭菌的培养基放在,37,温箱中培养,24-48,小时，以检查灭菌是否彻底。,二,消毒与灭菌,加热法,干热,法,湿热法,火焰烧灼,热空气灭菌,压力蒸汽灭菌,间歇灭菌,煮沸灭菌,巴斯德消毒,实验原理,1,、,了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理,。,2,、,学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。,实验目的,滤膜过滤器的滤膜是一种多孔纤维素，孔径一般为,0.45um,，,过滤时，液体和小分子物质通过，细菌被截流在滤膜上。,过滤除菌,许多材料，如血清、糖溶液等，用一般加热消毒灭菌方法，均会被热破坏，应采用过滤除菌。,应用最广的过滤器有蔡氏,(Seitz),过滤器和膜过滤器。,紫外线灭菌,紫外线波长在,200-300 nm,具有杀菌作用，其中以,265-266 nm,杀菌力最强。,无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭菌。,实验原理,(continued),干热,灭菌,电,烤箱,实验内容及实验步骤,1,、干热灭菌,2,、压力蒸汽灭菌,干热,灭菌,1,、装入待灭菌物品,2,、升温 接通电源，加热升温至,160-170,。,3,、恒温 保持,160-170 2,小时。,4,、降温 切断电源，自然降温。,5,、开箱取物 待烤箱温度降到,70,以下以后，方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于,70,，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。,实验内容及实验步骤,(continued),实验内容及实验步骤,(continued),压力蒸汽灭菌,压力蒸汽灭菌,1,、检查水位，放入物品。,2,、加盖、拧紧,对称用力,3,、加热升温,4,、排冷空气 等压力升至,0.5kg/cm2,时，打开排气阀，排净冷空气。,5,、升温、保压,等锅内压力升至所需数值（通常为,1.03kg/cm2,），,保持压力,20-30,分钟。,6,、降压、取物,实验内容及实验步骤,(continued),