抗氧化金属硫蛋白的足细胞特异性过度表达可以减轻糖尿病肾病

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Podocyte-Specific Overexpression of the Antioxidant Metallothionein Reduces Diabetic Nephropathy,足细胞内特异性过度表达的,抗氧化金属硫蛋白,可以减轻糖尿病肾病,05七A 朱晓丹,1,糖尿病肾病DN,糖尿病肾病,肾衰,（DN）,损,伤,足细胞,（肾小球过滤屏障）,2,足细胞,1.上皮细胞,2.足突-裂孔-渗透性裂孔横膜,3.裂孔膜蛋白：,Nephrin,Podocalyxin,3,足细胞损伤途径,高血糖,糖基化终末产物,血管紧张素,氧化应激,仅对足细胞进行抗氧化保护，可否减少足细胞损伤，进而减轻糖尿病肾病,。,足细胞损伤,4,金属硫蛋白MT,1.抗,强,氧化剂 ：,防止羟自由基、过氧化亚硝酸盐、超氧 化物、过氧化氢氧化的作用独一无二。,2.仅在足细胞内特异性过度表达,效力是谷胱甘肽的50倍,5,足细胞特异性,抗强氧化性,MT,足细胞,保 护,ONLY,减少足细胞损伤,减轻糖尿病肾病,高效,6,Nmt模型,FVB胚胎系,Nmt基因,（受小鼠nephrin启动的人类MTII基因）,启动足细胞中MT,高效,表达,Nmt3 Nmt7,7,足细胞中MT的高效表达,A：PCR,MT在两个系株中均可表达，但在Nmt7系株中更高,B：蛋白电泳,MT在Nmt3和Nmt7组中分别增高18和6倍。,C：免疫组化,MT表达仅在转基因小鼠足细胞中,8,为什么要选用两个系株？,9,OVE26Nmt双转基因的模型,糖尿病肾病模型 Nmt模型,OVE26鼠 Nmt3/7鼠,杂交,OVE26Nmt双转基因,10,MT对DN影响的评估参数,糖尿病基本参数,蛋白尿,足细胞,肾小球形态,11,Parameter,OVE26,OVE26Nmt,FVB,Nmt,血糖,(mg%),600.00 0.00,599.00 1.00,175.00 11.40,169.30 19.40,糖化血红蛋白,(%A,1c,),9.84 0.30,10.00 0.30,4.65 0.10,4.60 0.10,体重,(g),23.60 1.00,23.30 1.10,23.90 0.50,25.60 1.80,肾重,(mg),484.00 18.00,515.00 14.00,361.00 15.00,359.00 15.00,糖尿病基本参数,12,MT高效表达可减少蛋白尿产生,A B：Nmt3系株2月龄和4月龄的结果,CD：Nmt7系株2月龄和4月龄的结果,13,MT高效表达,蛋白尿减轻程度,Nmt7,Nmt3,Nmt7,Nmt3,14,基因位点的插入是随机的，极有可能N7的插入位点破坏了小鼠参与肾小球正常功能的基因，从而减低其保护作用。,MT在足够剂量时对足细胞不利。,只有待N7插入的位点确定，我们才可能区分是插入突变还是MT过度表达的影响,15,16,足细胞的足突形态。,A：FVB,B：OVE26,C：Nmt7,D：OVE26Nmt7,E：OVE26鼠足突密度比FVB鼠低33%，,而OVE26Nmt7鼠组却高于OVE26鼠。,17,裂孔膜蛋白的表达,A：肾小球中nephrin, podocalyxin ,GAPDH(磷酸甘油醛脱氢酶)蛋白：FVB、OVE、OVE26Nmt7,BC：B nephrin蛋白表达 C podocalyxin表达，以GAPDH表达进行标准化。O和ON总低于F组，但podocalyxin ON要高于O组。,18,足细胞数目,A-C：肾小球WT1基因染色的经典图像A：F B:O C:ON3,D：O组与F组相比减少了大约44%。在ON3组中，足细胞数目比O组增加39%，且明显恢复到对照组的75%左右。,19,足细胞数目,A-D：TUNEL对O(A)、ON7(B)、F(C)、N7(D)肾小球染色,E：O组比F组增加了20倍以上， MT高效表达，细胞死亡诱导明显下降。,20,肾小球形态,A：肾小球体积 B：系膜基质容量,足细胞中MT高效表达可减少糖尿病肾小球形态的影响。,21,实验局限,仅20%的肾小球细胞是足细胞,最新计数足细胞的方法未被采用,22,总结：,第一次证明仅以抗氧化来保护足细胞，可以从结构和功能方面避免DN的损害。,也证实了氧化应激对肾小球损害的重要性，足细胞特异性过度表达抗氧化金属硫蛋白，的确可以减轻糖尿病肾病。,23,文章出处：,J Am Soc Nephrol.2008 November;19(11): 2077-2085.doi:,10.1681/ASN.2007080967,.PMCID:PMC2573005,Copyright, 2008 by the American Society of Nephrology,24,谢谢！,25,