吴怡慧项目四香菇多糖生产

单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,项目四 香菇多糖的生产,姓名：吴怡慧,班级：生物制药1411,指导老师：彭加平 韦平和,预习方案汇报PPT,目录,香菇多糖的基本知识,1,香菇多糖的生产工艺,2,香菇多糖的分析检测,3,注意事项 参考文献,4,01,香菇多糖的基本知识,Part One,1、香菇多糖的简介,2、香菇多糖的性质,3、香菇多糖的作用,香菇多糖的简介,香菇多糖(1entinan，LNT) 香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，是香菇的主要有效成分，是一种宿主免疫增强剂(host defense potentiator，HDP)，是一种非特异性免疫刺激剂。具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能（T细胞促进作用)；,香菇多糖中的活性成分是具有分支的 (13)D葡聚糖，主链由(13)连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由(16)连接的葡萄糖基，呈梳状结构；,香菇多糖与其他抗肿瘤药物相比，香菇多糖几乎无任何副作用，是目前已知最强的免疫增强剂之一。到目前为止，香菇多糖仍是从香菇子实体中提取，香菇子实体生长周期长，受环境条件的影响与限制、产量低，从而导致香菇多糖的生产成本高，价格昂贵。,香菇多糖的性质,香菇多糖是一种以-D(13)葡聚糖残基为主链，侧链为(16)葡聚糖残基的葡聚糖；,香菇多糖为灰白色粉末，大多为酸性多糖，溶于水、稀碱，尤其易溶于热水，不溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂，其水溶液呈透明黏稠状；,香菇的主要成分是多糖类和不饱和脂肪酸，经热水提取的香菇多糖可调节人休内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力；,香菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病 毒能力。,香菇多糖的作用,香菇多糖具有免疫调节和抗肿瘤的作用：香菇多糖对调节人体免疫功能的 T细胞有促进作用，刺激抗体的形成和活化巨噬细胞，降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力，故对癌细胞有强烈的抑制作用；在人体中，香菇多糖能增加DNA的合成和外周单核细胞免疫蛋白的产生。,香菇多糖的护肝解毒作用：香菇多糖可显著降低 l4，硫代乙酰胺和强的松龙引起,的升高，并可拮抗l4肝损伤肝糖元含量降低，具有保肝解毒作用；,香菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病毒能力。香菇提取物具有抗血小板凝集作用。,02,香菇多糖的生产工艺,Part Two,1、生产原理,2、生产准备,3、生产工艺流程,4、补充萃取的操作,香菇多糖的生产原理,本实验主要采用传统的热水浸提法。中性多糖常用水作溶剂来提取，可以用水浸煮；,香菇中色素较高，活性炭有脱色素、脱去异味等作用；,香菇子实体有含量较多的脂类的物质，可以用石油醚、乙醚等低级性溶剂除去脂溶性杂质；,蛋白质不溶于氯仿等有机溶剂，可对香菇多糖进行除去杂蛋白。而香菇多糖在氯仿中溶解度大于在热水中的溶解度，所以可以用氯仿对香菇多糖进行萃取；,乙醇沉淀法提取多糖时，乙醇的浓度及提取方式对多糖的得率影响较大。最有效的方法是向多糖溶液中加入乙醇，使乙醇的最终浓度依次达到40%、60%、70%、80%，离心每次沉淀，乙醇沉淀得到的不一定是纯的多糖，还需用凝胶柱色谱进行分离纯化。,香菇多糖的生产准备,材料与试剂,原料:香菇,试剂：活性炭,氯仿,无水乙醇,丙酮,乙醚,仪器与器材,组织捣碎机 容量瓶 试管,恒温水浴锅 烧杯 紫外检测仪,循环水式真空泵 记录仪 流量泵,冷冻离心机,凝胶柱,紫外分光光度计,脱脂棉,香菇多糖的生产工艺流程,热水浸提法：称取香菇10g,于组织捣碎机内粉碎，倒入烧杯中，加20倍量的水，将烧杯放入恒温水浴锅中（90）加热30min,然后用布氏漏斗和真空泵进行抽滤，取滤液；,脱色除味：在滤液中加入活性炭（1mg/ml），搅拌吸附1h，抽滤，取滤液；,除杂蛋白：在滤液中加入氯仿溶液，充分混合后，过滤，取滤液。重复萃取、除杂3次；,乙醇沉淀：在萃取液中加入无水乙醇，使其乙醇浓度达80%，沉淀12h,于冷冻离心机（ 4000/min）离心30min，取沉淀；,脱脂：沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤3次，即得香菇多糖提取物。,萃取的操作,向待分离溶液（料液）中加入与之不相互溶解（至多是部分互溶）的萃取剂，形成共存的两个液相。利用原溶剂与萃取剂对各组分的溶解度（包括经化学反应后的溶解）的差别，使它们不等同地分配在两液相中，然后通过两液相的分离，实现组分间的分离。如碘的水溶液用四氯化碳萃取，几乎所有的碘都移到四氯化碳中，碘得以与大量的水分开。,多糖纯化： 取上述香菇多糖提取物溶于蒸馏水中，离心除去不溶物，按照项目三SephadexG50凝胶装好柱，用蒸馏水平衡48h（控制好流速：4滴/min），然后将上清液上柱分离，用蒸馏水洗脱，洗脱速度5ml/min（可用恒流泵控制洗脱速度）冷冻干燥得白色香菇多糖，并称重。,碱提取法大致步骤：,香菇粉碎 碱液提取 清液 浓缩 醇析 沉淀 K;L;6- 液除蛋白 脱色脱脂 分区沉淀 溶解过柱 透析 纯多糖,碱提取 称取50g鲜香菇洗净、切碎后用10倍体积0.5mol/LNaOH溶液于70恒温水浴中搅拌提取5h，重复提取3次，3 次滤液合并，浓缩。,03,香菇多糖的鉴定,Part Three,1、分析检测原理,2、分析检测准备,3、分析检测步骤,香菇多糖的分析检测原理,定性检测苯酚-硫酸法，用苯酚硫酸法显棕色，可以对多糖进行定性检测；,定量分析分光光度法，因为香菇肉质太厚，萃取时氯仿很难渗透至其深处，则萃取物的产率低。热水提取法多糖在260nm和280nm波长处有较明显的吸收峰。,香菇多糖的分析检测准备,试剂：,定量分析： 定性检测：,甘露糖 苯酚-硫酸试剂：,蒸馏水 酚3g,浓硫酸 浓硫酸5ml,对照品溶液 95ml无水乙醇,8%苯酚溶液,设备与仪器：,定量分析： 定性检测：,移液管 加热器,容量瓶 温度计,水浴锅,分析天平,带塞试管,香菇多糖的分析检测步骤,定量分析分光光度法,标准曲线的制备,精密称取(可用分析天平）60干燥至恒重的甘露糖标准品0.1g，置于100ml的容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度处。用移液管量取对照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0ml.分别置50ml容量瓶中，加蒸馏水定容在各精密吸取1ml，置于带塞试管中，准确移取8%苯酚溶液1ml，快速加入浓硫酸5ml置于水浴锅中加热15min,取出冷却至室温，橘黄色由浓度从小到大而逐渐加深，将溶液于490nm波长的分光光度计处测定吸收度，绘制标准曲线。,样品多糖的测定,精密称取香菇多糖10.0mg,加水溶解，定量转移入100ml容量瓶中，加水定容，均摇。准确吸取2.00ml,按上述试验方法显色，测定吸光值，计算香菇多糖含量。,定性检测苯酚-硫酸法,将苯酚-硫酸试剂喷洒在冷冻干燥好的白色香菇多糖上110，加热香菇多糖几分钟糖显棕色即为多糖。,04,注意事项 参考文献,Part Four,注意事项,A,LOREM,B,LOREM,C,LOREM,D,LOREM,1 氯仿有毒使用时要注意安全,2 注意凝胶柱装柱时不要有气泡存在于凝胶柱中,3 浓硫酸有强腐蚀性使用时注意不要溅出造成伤害,参考文献,生化药物生产课本P14-P15,Q & A,提问答疑,Thank you for your attention.,感谢您的关注！,