免疫凝集反应及临床应用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,免疫凝集反应及临床应用,刘 静,2014.11.26,细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等,颗粒性,抗原，或,可溶性,抗原（或抗体）与,载体颗粒,结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，,在,一定条件,下,，形成肉眼可见的凝集现象。,凝集反应定义,反应阶段：,抗原抗体的特异性结合阶段,出现肉眼可见的凝集现象,凝集反应,反应特点：,IgM,的作用比,IgG,大数百倍,IgG,与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体,可见反应形成,电解质：,稀释液,或,缓冲,液（,8.5g/L NaCl,）,pH,：,pH6,pH9,（,pH3,为细菌抗原的等电点）,温度：,15,40,，,37,最,适（,4,特例,）,反应时间：,不同反应时间,不同,外力：,震荡或搅拌,环境,因素,分类：直接与间接凝集反应,颗粒性抗原,直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象,。,包括：,玻,片凝集,试验,试管凝集试验,直接凝集反应,direct agglutination,玻片,凝集试验：,定性,已知抗体检测抗原,简便,、,快速,菌种,的诊断或分,型,ABO,血型的,鉴定,试管凝集试验：,半定量,已知抗原检测抗体,易引起,抗原的非特异性,凝集,肥达试验,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,弃掉,0.5,试管凝集试验原理,结果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,+,很小的凝集颗粒,混浊,-,无凝集现象,与对照相同,+,小、部分凝集块,中等混浊,+,大多凝集管底,轻度混浊,+,大的凝集块,清亮,凝集程度,沉淀,上清,试管凝集试验结果判断,管底沉淀,凝集程度,最高稀释比例,待测血清的滴度,试管凝集试验,结果判断,将,可溶性抗原或抗体,吸附于,颗粒性载体,表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象,间接凝集反应,indirect agglutination,RBC,、白陶土、活性炭、某些细菌、聚苯乙烯胶乳颗粒,良好载体有如下几点基本要求：在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；大小均匀；比重与介质相似，短时间内不能沉淀；无化学或血清学活性；吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。,目前应用最广的是人的,O,型红细胞和绵羊红细胞。而后者应用更广，因为其来源方便。另外绵羊红细胞的表面有大量的（约,1 000,个以上）糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好。,载体种类,正向间接凝集试验,反向间接凝集试验,间接凝集抑制试验,协同凝集试验,间接凝集反应,用抗原致敏载体-检测抗体,正向间接凝集反应,反向间接凝集反应,用抗体致敏载体-检测抗原,间接凝集抑制反应,用抗原致敏载体-检测抗原,有凝集颗粒为,阴性,反向间接凝集试验，载体为金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌的细胞壁成分,A,蛋白，和,IgG,的,Fc,段结合，使,Fab,段暴露在菌体表面，,Fab,段仍然保持正常的抗体活性。,利用这种特性可以将特异性,IgG,结合在菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性抗原。,协同凝集反应,原理图,IgG,SPA,SPA- IgG,待测抗原,SPA- IgG-,待测抗原凝集颗粒,混合,加入,间接血凝试验,胶乳凝集试验,明胶凝集试验,按载体分类间接凝集试验,以红细胞为载体的间接凝集试验。,将已知抗原,(,或抗体）致敏红细胞，与相应抗体（或抗原）特异结合，出现红细胞凝集现象。,间接血凝试验,红细胞,抗原,致敏,致敏红细胞,红细胞凝集,间接血凝试验,待测抗体,间接血凝试验原理,-,：红细胞沉积于孔底,+,：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集,+,：红细胞形成凝集，面积较小，边缘较松散,+,：红细胞形成片层凝集，面积略多于,+,+,：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状,血凝试验强度,与一般间接血凝试验不同之处为反应中的,红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞,主要试剂材料为,抗红细胞单克隆抗体,，能与红细胞结合，但不引起凝集反应,这种抗体与另一特异性抗体连接成的,双功能抗体,可用于检测标本中的抗原,如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中的抗体,反应中的,标本为受检者的全,血,HIV,抗体、,HBV,抗原检测,自身红细胞凝集试验,胶乳凝集试验,以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应,胶乳为人工合成的载体，性能比红细胞稳定，均一性好,但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细胞,因此作为间接凝集反应，胶乳凝集的敏感度不及血凝试验,明胶凝集试验,以明胶为载体颗粒的间接凝集反应,用粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原或重组抗原,当致敏明胶颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集,常用于抗,HIV-1,抗体和抗精子抗体的检测,梅毒,螺旋体明胶颗粒凝集试验,(TPPA),抗球蛋白参与的血凝试验,抗球蛋白参与的血凝试验,又称,Coombs,试验，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，使红细胞凝集,用于检测抗红细胞不完全抗体,不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但一般不出现可见反应，多为,7S,的,IgG,诊断免疫性溶血性贫血的主要方法,抗球蛋白参与的血凝试验,分为两种方法：,直接,Coombs,试验,间接,Coombs,试验,直接,Coombs,试验,检测红细胞上的不完全抗体,新生儿溶血症,自身免疫性溶血症,特发性自身免疫性贫血,医源性溶血,临床应用,间接,Coombs,试验,检测血清中游离的不完全抗体,检测母体,Rh(D),抗体,检测红细胞不相容的输血所产生的血型抗体,临床应用,