微生物发酵工程实验

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,Click to edit Master title style,微生物发酵工程实验,2010-11,1,实验内容,实验一 机械搅拌发酵系统结构与控制系统,实验二 中试搅拌发酵罐的使用与维护,实验三 培养基的分批灭菌,实验四 磷细菌高密度发酵,实验五 喷雾干燥,2,时间安排,11,月,8,、,9,、,12,日下午，熟悉发酵罐系统。,11,月,15,日周一，单因子实验，优化磷细菌发酵培养基的碳源。,11,月,16,日周二下午，,单因子实验，优化磷细菌发酵培养基的碳源。（完成系列稀释、涂布，发酵液还原糖测定）,发酵罐开盖，清洗。,磷细菌种子制备,3,11,月,17,日周三上午，发酵系统启动，,pH,电极标定，溶氧电极标定，发酵培养基配制、装罐。,周三下午，培养基分批灭菌。灭菌培养基取样、无菌检查。,周三晚上，种子无杂菌检查。接种，上罐，发酵控制，接种后取样测定（细菌数量、,pH,、还原糖等）。,周三晚上，夜班，关注发酵控制参数，,4,周四上午，取样测定（细菌数量、,pH,、还原糖、杂菌率等）,周四下午，取样测定（细菌数量、,pH,、还原糖、杂菌率等）,周五上午，放罐，清洗发酵罐；计数摇瓶实验结果,周五下午，喷雾干燥。,5,优化磷细菌发酵培养基的碳源（单因子实验）,菌种：无机磷细菌,培养基,发酵培养基,A,：可溶性淀粉,0.6%,，硫酸铵,0.5%,，硫酸镁,0.06%,，磷酸氢二钾,0.1%,，酵母粉,0.05%,，,pH 7.0-7.5,发酵培养基,B,：葡萄糖,0.2%,，可溶性淀粉,0.4%,，硫酸铵,0.5%,，硫酸镁,0.06%,，磷酸氢二钾,0.1%,，酵母粉,0.05%,，,pH 7.0-7.5,发酵培养基,C,：葡萄糖,1%,，硫酸铵,0.5%,，硫酸镁,0.06%,，磷酸氢二钾,0.1%,，酵母粉,0.05%,，,pH 7.0-7.5,发酵培养基,D,：葡萄糖,1%,，玉米粉,0.6%,，硫酸镁,0.06%,，磷酸氢二钾,0.1%,，酵母粉,0.05%,，,pH 7.0-7.5,无机磷培养基：葡萄糖,1%,，,(NH,4,),2,SO,4,0.5%,，,NaCl 0.03%,，,KCl 0.03%,，,FeSO,4,7H,2,O 0.003%,，,MnSO,4,4H,2,O 0.003%,，,Ca,3,( PO,4,),2,1%,，琼脂,2%,，,pH 7.0-7.5,6,实验步骤,配制培养基，分装于,150,或,250,mL,三角瓶，包扎后，,115 ,灭菌,20 min,。发酵培养基,A/B/C/D,各,3,瓶。,接种，接种量,1%,。,培养，,28 ,、,150 rpm,培养,18-24 h.,测定细胞数量，取发酵液,1,mL,系列稀释，取,0.1,mL,菌液涂布无机磷培养基，,28 ,恒温培养,3 d,后计数。,7,灭菌培养基无菌度测定,（,1,）显微镜观察法,利用刚果红染色法可以在显微镜下快速区别死活菌。,原理：活菌具有排斥染液的能力，而死菌失去了排斥染液的能力，因此，无色透明的是活菌，死菌为蓝色或浅蓝色。,方法：将待测稀释液与一滴刚果红染色液很薄的均匀涂在载玻片上，风干后滴盐酸,1-2,滴，涂片变蓝，风干后在高倍镜或油镜下观察。,刚果红溶液：称取刚果红,0.1-0.2 g,，溶于,10 mL,水中。,盐酸酒精溶液：,95%,酒精,1-2 mL,，蒸馏水,10 mL,，再加入浓盐酸,0.25-0.3 mL,混合即成。,（,2,）平板培养法,可取出少量灭过菌的培养基置于,37 ,恒温培养箱中培养,24 h,，若无菌生长，即视为灭菌彻底。,8,磷细菌高密度发酵,菌种：无机磷细菌,培养基,种子培养基见讲义第,7,页,发酵培养基,A,无机磷培养基见讲义第,7,页,LB,培养基见讲义第,7,页,种子制备,配制种子培养基，分装,100mL/500mL,三角瓶，包扎，,115,灭菌,20min,，接种，,28,、,150rpm,培养,18-24h,问题：用于接种发酵罐，接种量,5%,，请问,7L,培养基需要多少菌种用量？,9,种子接入发酵罐,种子质量检查,（包括哪些项目？分别用什么方法？）,接种前还需要做什么？,火圈接种法,接种后需要做什么？,发酵参数调试稳定，如温度控制系统，空气流速，罐压，,pH,等。,培养基灭菌质量检查,10,发酵控制,pH,泡沫,菌体浓度和形态,还原糖,发酵终点,11,