气相色谱法测定血清中丙戊酸钠浓度

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,气相色谱法测定血清中丙戊酸钠浓度,主讲人：,毛琼琼,2012年3月30日,彭海洲 宋飞,丙戊酸钠,简介,分析背景,分析步骤,思考题,谢谢,观看,参考文献,丙戊酸钠,常用剂型,原发性大发作和,失神小发作的首选药,广谱抗癫痫药,片剂：200mg,规格,糖浆剂：300ml,规格,注射剂,:,每瓶内含,400mg,近白色,的无菌丙戊酸钠冻干粉,随附,1,支,4ml,注射用水,丙戊酸钠,Sodium Valproate,别名,抗痫灵,丙戊酸钠,简介,分析背景,分析步骤,思考题,谢谢,观看,参考文献,分析背景,监测方法很多,目前以免疫测定法,高效液相色谱法(HPLC),等,缺点,找一种分析方法,可以满足临床检测血丙戊酸钠浓度的要求,临床上使用的大多数,抗癫痫药物,均需要进行治疗药物,监测( TDM),抗癫痫药物丙戊酸,钠,操作程序复杂,分析流程长,费用昂贵,不利于临床推广,应用。,药物分析人员,气相色谱法GC,测定血清中丙戊酸钠浓度,丙戊酸钠,简介,分析背景,分析步骤,思考题,谢谢,观看,参考文献,1,、材料与方法,2,、结果,仪器与试剂,样品处理,色谱条件,GC,对血清中丙戊酸钠浓度分析,步骤,3,线性关系与检测限,精密度,回收率,讨论,GC-15A 气相色谱仪,氢火焰检测器,C2R4A,色谱工作站(shimadzu 产品) 、,LXJ2 离,心沉淀机(上海医疗器械三厂),仪器,样品,仪器与试剂,丙戊酸钠提取液,丙戊酸钠标准溶液,试剂,高纯氮气和高纯氢气。,硫酸、三氯甲烷(长沙试剂公司) ,丙戊酸钠(VPA) 、苯酚,(Phenol ,Sigma 公司产品) 。,GC-15A 气相色谱仪,氢火焰检测器,离心沉淀机,样品处理,色谱条件,取3 ml 全血于5 ml 速凝管内,离心,取上层血清0. 5 ml 于5 ml 的玻璃离心管内,加50l 5 mol/ L,的H2SO4和0. 5 ml 提取液,加盖,振荡提取1 min ,3 000 r/,min 离心5 min。取1l 氯仿液于气相色谱仪上进样(图1,图4) 。从图1 可知,6 min 保留时间(RT) 便可以完成血清丙,戊酸钠浓度的检测,炉温,170 ,氢火焰检测器,温度,220 ,进样器温度,220 ,氢气流速,40 ml/ min ,氮气,流速,35 ml/ min ,空气流速,500 ml/ min,线性关系,与检测限,取10g/ ml 的丙戊酸钠标准液,用空白血清进行稀释后,按标本处理程序进行操作，检测限量为1g/ ml以标准物浓度( X) 对标准物峰面积与内标物峰面积比值( Y ) 进行回归分析,得回归方程Y = 0. 0121 X + 0. 003 和相关系数r = 0. 997,精密度,用1 mg / ml 的丙戊酸钠标准液, 将空白血清制成浓度为:200 ,100 ,50 ,25 ,12. 5 ,6. 25 ,3. 125 ,1. 563 和0. 781g/ ml 的标准系列。各取0. 5 ml于5 ml 的玻璃离心管内, 以下按标本处理程序操作选3 个高、中、低不同浓度范围内的样品,每天测8 次,连续测定3 d,回收率,选3 个不同浓度的样品,每毫升加入10 100g 的丙戊酸钠, 按标本处理程序进行操作,气相色谱法测定血清中丙戊酸钠的的平均回收率为98. 56 %99. 83 %,讨论,本研究中,丙戊酸钠和内标苯酚的峰距较大,不利于控制气相色谱仪工作时各参数的微小变动所产生的误差,。,建立气相色谱法定量测定血清中抗癫痫药丙戊酸钠浓度的关键,在于寻找合适的,内标准物质,。,为注意将收集到的,临床标本,置于4 冰箱中保存,实验证明,此条件下,一周内对样品的,测定结果没有影响,在加入丙戊酸钠提取液,离心时常常由于样品中蛋,白质含量过高,仍不能分离,此时可用,微量加样器沿壁搅动,再离心,以达到分离的效果。,使用微量进样器时,应该,保持干燥,否则会使测定的峰变宽,延迟出峰时间,参考文献, 1 ,朱伊,.,高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠含量分析,J .,福,建医药杂志,2001 ,23 (4) :1272128., 2 ,陈坚,方维军,吴芳,等,.,高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度,J .,上海医院药学, 2000 ,11 (3) :33235., 3 ,程玲,罗雯红,李慧,等,.,高效液相色谱法测定癫痫病人血清中,丙戊酸的浓度,J .,汕头大学医学院学报,2000 ,13 (3) :73274.,4 ,张敬军,俞丽云,瞿治平,.,高效液相色谱法测定癫痫病人血清中,丙戊酸的浓度,J .,中华神经科杂志,1999 ,32 (1) :57258., 5 ,郁健,王广基,杜春波,.,高效液相色谱法测定癫痫病人血清中丙,戊酸的浓度,J .,中国药科大学学报, 1998 , 29 (1) :45246.,6 ,郑惠良,祁元明,杨莹,.,高效液相色谱法测定癫痫病人血清中丙,戊酸的浓度,J .,河南医科大学学报,1997 ,32 (4) :78279., 7 ,Kreher U , Darius J , Wien F. Establishing individual metabolite,patterns for patients on valproate therapy J . Drug Metab Phar2,macokinet , 2001 ,26 (122) :992107.,8 ,Gopaul SV , Farrell K, Abbott FS. Gas chromatography/ negative,丙戊酸钠,简介,分析背景,分析步骤,思考题,谢谢,观看,参考文献,思考题,怎样寻找合适的,内标准物质,？,当你从事分析时候,？,内标物质化学性质必须稳定,。,化学结构最好与测定物相似,。,同时被检测的原始样品中不能有它存在,。,提取率也应相近,在色谱图上能与所有的,色谱峰分开但测定物和内标准物出的,峰,应靠得越近越好,。,