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,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1.2,基因工程的基本操作程序,基因工程的基本操作流程,目的基因主要是指,编码蛋白质的结构基因,目的基因的获取,目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗逆性基因,（抗病毒、抗细菌,),、,人胰岛素基因等。,1,）从基因文库中获取目的基因,2,）利用,PCR,技术扩增目的基因,3,）人工合成,目的基因的获取方法,反转录法,化学合成法,1,）从基因文库中获取目的基因,基因文库的概念：,将含有某种生物不同基因的很多的,DNA,片段，导入到受体菌群中储存，每个受体菌含有这种生物不同的基因。,基因文库的分类,基因组文库,部分,DNA,文库,（1）构建基因组文库：,将某种生物体内的,DNA,全部提取出来，选用适当的限制酶，将,DNA,切成一定大小的,DNA,片段，然后将这些片段分别与载体连接起来，导入受体菌中储存，这个群体包含了这种生物的所有基因。,通过对受体菌的培养而储存基因,（2）,构建,cDNA,文库,用某种生物发育的,某个时期的,mRNA,反转录产生的多种互补,DNA,片段,（,也叫,cDNA）,，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体叫做这种生物,cDNA,文库。,cDNA,合成过程,基因组文库和部分基因文库,原核细胞的基因结构,RNA,聚合酶的作用是催化,DNA,转录为,RNA。,真核细胞的基因结构,编码区是间隔的、不连续的。,其中，能够编码蛋白质的序列叫做,外显子,，一般不能够编码蛋白质的序列叫做,内含子,。,信使,RNA,的加工：,编码区下游,编码区上游,成熟的信使,RNA,转录,加工,初级转录物,剪切内含子,转录部分,拼接外显子,转录部分,真核生物基因表达的调控,如何从基因文库中得到我们所需的目的基因？,根据基因的有关信息：如基因核苷酸序列或表达的产物或基因的功能等等。（课本,p9,）,2,）利用,PCR,技术扩增目的基因,原理,:,DNA,双链复制,前提,:,要有一段已知目的基因的脱氧核苷酸序列，以便合成引物。,5,/,3,/,G,G,T,C,3,/,5,/,G,A,C,C,5,/,3,/,引物,G,G,1.,加热至,90-95,度：,DNA,解链,氢键断裂；,2.,冷却至,55-60,度：引物结合到互补,DNA,链；,3.,加热至,70-75,度：,Taq,酶从引物起始进行互补链的合成,5,/,3,/,A,G,引物,利用,PCR,技术扩增目的基因,3,）人工合成,如果基因比较小，核苷酸序列又已知，也可以通过,DNA,合成仪用化学方法直接人工合成。,反转录法,化学合成法,基因表达载体的组成：,a,、目的基因,b,、启动子,c,、终止子,d,、标记基因,(,二,),基因表达载体的构建,核心,(,三,),将目的基因导入受体细胞,转化,目的基因进入,_,内，并且在 受体细胞内维持,_,和,_,的过程,受体细胞,稳定,表达,方法,导入植物细胞,导入动物细胞,导入微生物细胞,农杆菌转化法,基因枪法,花粉管通道法,显微注射法,感受态细胞吸收,DNA,分子,(,三,),将目的基因导入受体细胞,1.,农杆菌特点：,易感染双子叶植物和裸子植物,植物体损伤分泌酚类化合物，吸引农杆菌。,Ti,质粒的,T-DNA,可转移至受体细胞的染色体,DNA,上,.,将目的基因导入受体细胞（动物细胞,）,显微注射法,2.,微生物作受体细胞原因：,将目的基因导入微生物细胞,3.,转化方法：,大肠杆菌,繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少,处理细胞,细胞表达载体与感受态细胞混合,_,细胞吸收,DNA,分子。,Ca,2+,感受态,感受态,1.,常用菌：,(,四,),目的基因的检测与鉴定,个体,鉴定：,抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等,DNA,分子杂交,分子杂交,抗原,-,抗体杂交,检测：,是否插入目的基因,是否转录,是否翻译,如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。,若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。,例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。,
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