健脾祛痰化瘀方药调脂抗动脉粥样硬化的临床及其作用机制的研究课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,沥水调脂胶囊是从辨证论治的整体观和高脂血症及,As,的中医病因病机的观点出发，按照健脾祛痰化瘀治法成功开发出的具有明显调脂、清除自由基、保护血管内皮功能和抗,As,作用的新中药，已于,2001,年批准生产。本文综合了健脾祛痰化瘀方药在整体和细胞水平及临床观察方面抗,As,的作用，现归纳如下：,前 言,沥水调脂胶囊是从辨证论治的整体观和高脂血症,临 床 研 究,临 床 研 究,经临床,409,例（其中对照,102,例）采用随机双盲、平行对照的方法，分别在山东、江苏等地五家临床医院进行观察，发现该药降脂总有效率为,89.34%,、控显率为,67.51%,，明显优于对照组。其中,TC,总有效率双盲治疗组为,78.29%,，高密度脂蛋白升高的总有效率双盲治疗组为,77.67%,，均优于对照组。治疗组疗前疗后降低,TC,、,TG,、,LDL,水平，升高,HDL,和,apoAI,有明显差异，优于对照中药，但对,apoB,下降不明显。在改善血液流变学指标方面也有显著意义。,经临床409例（其中对照102例）采用随机双盲、,整体动物和细胞水平研究,保护血管内皮功能,对内皮细胞结构的影响,整体动物和细胞水平研究,显著降低高脂状态下的血管内皮通透性。,维护,NO,的正常水平。,并能降低血浆及红细胞过氧化脂质含量，保护血浆,6-Keto-PGF1/TXB2,的平衡。,显著降低高脂状态下的血管内皮通透性。,表,1,对血管内皮通透性的影响,通透深度 通透量,（占内中膜厚度,%,） （,ng/g,主动脉）,对照组,15.005.48* 6.033.62*,高脂组,56.6713.66 54.917.70,祛痰化瘀组,31.677.53* 40.744.68*,鱼油组,26.678.16* 37.167.38*,注： 与高脂组相比 *,p,0.01,-,表1 对血管内皮通透性的影响 -,表,2,对舒张因子（,NO,）的影响,血浆亚硝酸盐浓度（,umol/L),对 照 组,6.923.04*,高 脂 组,1.521.25,祛痰化瘀组,6.331.64*,鱼 油 组,5.182.45*,与高脂组相比 *,p,0.01,-,-,表,3,对,MDA,、,TXB2,、,6-keto-PGF12,的影响,血浆,MDA RBC,膜,MDA 6-keto-PGF1a TXB2 6-keto-PGF12/ TXB2,（,mmol/L,） （,nmol/mg,蛋白）（,pg/ml,） （,pg/ml,）,对照组,3.320.27* 0.890.06*,#,1332.45289.27* 725.1142.73 1.820.38*,高脂组,4.530.39 1.520.19 921.94278.71 676.9747.18 1.350.36,祛痰化瘀组,3.780.60* 0.920.21*,#,1213.26294.87* 688.8255.72 1.750.35*,鱼油组,3.840.38* 1.170.22* 925.14392.24 591.4940.30 1.600.79,与高脂组相比，*,p0.01 ;,与鱼油组相比，,#,p0.01,。,-,表3 对MDA、TXB2、6-keto-PGF12的影响,整体动物和细胞水平研究,保护血管内皮功能,对内皮细胞结构的影响,整体动物和细胞水平研究,改善红细胞膜流动性等。,超微结构观察证实该药能明显减少单核细胞在内皮,细胞的粘附和向内皮下游走。,其作用明显优于对照的西药安妥明及烟酸肌酯,以及洁脂等。,改善红细胞膜流动性等。,表,4,对高脂大鼠红细胞膜流动性的影响,微粘度（泊）,对 照 组,3.130.28*,高 脂 组,3.540.39,祛痰化瘀组,2.980.23*,鱼 油 组,2.820.49*,与高脂组相比 *,p,0.01,-,-,图,1,主动脉内皮细胞,0.05%,硝酸银染色 *指示,EC,核,A,：高脂组，示银线变粗,x20 B,：祛痰化瘀方药组,x20,C,：高脂组，示成块的银染颗粒,x40 D,：正常对照组,x20,图,2,主动脉苏木素染色 箭头（）所示粘附的单核细胞,x40,A,C,：高脂组,B,：祛痰化瘀方药组,D,：正常对照组,图,3,高脂组内皮单核细胞粘附的扫描电镜照片,A,：成簇状粘附的单核细胞,图,4,单核细胞粘附的扫描电镜照片,B,：开始向内皮细胞下游走的单核细胞,健脾祛痰化瘀方药调脂抗动脉粥样硬化的临床及其作用机制的研究课件,采用原位杂交和组织化学技术发现该药能有效减弱原癌基因,C-sis,、,C-myc mRNA,的表达，增强抑癌基因,P53 mRNA,的表达，从而达到 抑制细 胞增殖、阻止,As,形成和发展的作用。,对相关基因表达的调控,采用原位杂交和组织化学技术发现该药能有,具有阻止,As,早期主动脉壁泡沫细胞的,NOS,活性增强，阻止,As,进展期主动脉、冠脉血管壁的,NOS,活性及,NOS mRNA,表达的下降，下调,As,动脉 血管壁,ET mRNA,的高表达，减少脂质坏死中心形成等一系列作用，从而达到维持血管舒缩因子的平衡，缓解,As,进展的目的。,具有阻止As早期主动脉壁泡沫细胞的NOS活性,表,5,对兔主动脉血管壁一氧化氮合酶活性的影响,Distribution in aorta Control group HC group Gimfibrozil group Zhitai group,endothelium arch 3.111.05 2.581.31 2.890.93 2.501.18,thoracic 4.000.00,*,1.911.14 2.641.21 3.001.04,*,abdominal 3.111.05,*,1.731.27 1.330.52 1.700.69,intimal plaque arch 0 0.710.44 0.800.46 0.640.17,thoracic 0 0.400.24 1.470.51,*,1.380.63,*,abdominal 0 0.580.33 0.900.51 1.600.81,*,HC:hypercholesterol group;the same below,*,P0.05,，,*,P0.01,，,compared with B group,；,表5 对兔主动脉血管壁一氧化,表,6,对兔主动脉血管壁一氧化氮合酶,mRNA,表达的影响,Distribution in aorta Control group HC group Gimfibrozil group Zhitai group,内膜层 主动脉弓部,0 1.670.91 2.331.03 2.500.76,*,胸主动脉,0 2.080.95 3.001.55 3.140.90,*,腹主动脉,0 1.180.40 3.000.82,*,3.670.58,*,中膜层 主动脉弓部,2.331.24,*,1.120.32 1.000.00 2.251.09,*,胸主动脉,2.570.90,*,1.000.00 1.660.82,*,1.380.48,*,腹主动脉,1.201.09 1.000.00 1.130.33 1.330.47,compared with HC group,*,P0.05,，,*,P0.01,；,-,-,表,7,对兔主动脉血管壁内皮素,mRNA,表达的影响,Group Endothelium Intimal Medial,Cotrol 3.860.38 0 1.000.00,HC 1.290.49,*,3.330.82,*,2.560.53,*,Gimfibrozil 1.330.52,*,2.500.53,*,2.000.76,*,Zhitai 1.330.52,*,2.430.53,*,1.710.76,*,compared with control group,*,P0.05,，,*,P0.01,；,-,-,抗低密度脂蛋白的氧化,抑制细胞的粘附功能,抑制内皮细胞凋亡,抑制平滑肌细胞增殖,对细胞信号通路的影响,细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究,抗低密度脂蛋白的氧化细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进,表,8,各组低密度脂蛋白的硫代巴比妥酸反应物值,组 别,TBARS(umol/g),正 常 组,2.650.43,对 照 组,2.600.44,氧化修饰组,41.291.95,中药抗氧化组,14.840.48,*,注：与氧化修饰组比较，*,P0.01,图,5,各组低密度脂蛋白的电泳图,对照组 中药组 氧化,LDL,组 天然,LDL,组,图5 各组低密度脂蛋白的电泳图 对照组,抗低密度脂蛋白的氧化,抑制细胞的粘附功能,抑制内皮细胞凋亡,抑制平滑肌细胞增殖,对细胞信号通路的影响,细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究,抗低密度脂蛋白的氧化细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进,图,6,不同浓度含药血清对,mox-LDL (20ug/ml),对,VSMC,表达,MCP,1,的影响,注：与,mox-LDL,组对照，,P,0.05,，,P,0.01,。,图6 不同浓度含药血清对mox-LDL,图,7,不同浓度的沥水调脂胶囊血清对,mox-LDL,(40ug/ml),诱导的,EC,表达,P-,选择素的影响,注：与,mox-LDL,组对照，,P,0.05,，,P,0.01,图7 不同浓度的沥水调脂胶囊血清对mox-LDL,抗低密度脂蛋白的氧化,抑制细胞的粘附功能,抑制内皮细胞凋亡,抑制平滑肌细胞增殖,对细胞信号通路的影响,细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究,抗低密度脂蛋白的氧化细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进,表,9,对,EC,凋亡率及细胞周期的影响,（,x,s,）,Groups Apoptosis rate,（,%,）,G,0,-G,1,G,2,-M S,Control,1.090.64 59.050.07 11.103.39 29.853.32,OX-LDL 23.173.99 73.531.45 12.770.74 13.731.07,N-LDL 3.820.45* 64.138.60* 17.733.71 18.175.06,Serum of rat 20.001.35 71.770.55 13.570.32 14.70.61,VitE,9.040.38* 38.653.41* 19.733.57 42.956.02*,LSTZ,（,10%,）,16.130.64* 46.385.47* 16.303.84 37.352.45*,LSTZ,（,15%,）,16.170.97* 50.048.11* 12.402.95 37.605.19*,LSTZ,（,20%,）,18.430.91* 52.705.94* 12.674.06 34.875.97*,注：与,ox-LDL,组比较 *,P,0.05,， *,P,0.01,-,表9 对EC凋亡率及细胞周期的影响（xs）,表,10,对凋亡相关基因表达的影响（,xs,）,Groups bcl-2 bax P53 caspase-3,Control 5.370.16 2.490.19 3.280.07 3.710.29,N-LDL 5.050.24 2.660.09 3.510.33 3.880.35,OX-LDL 1.300.03 4.470.34 4.390.38 4.550.30,Serum of rat 2.310.85 4.590.22 4.280.13 4.470.09,LSTZ,（,10%,）,3.070.09* 4.570.28 4.160.10* 4.260.15*,LSTZ,（,15%,）,2.950.43* 4.450.33 4.090.07* 4.220.10*,LSTZ,（,20%,）,2.630.47* 4.450.32 4.240.13 4.410.15*,VitE 3.630.15* 3.890.32* 3.860.10* 4.130.13*,注：与,ox-LDL,组比较 *,P,0.05,， *,P,0.01,-,表10 对凋亡相关基因表达的影响（xs） -,抗低密度脂蛋白的氧化,抑制细胞的粘附功能,抑制内皮细胞凋亡,抑制平滑肌细胞增殖,对细胞信号通路的影响,细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究,抗低密度脂蛋白的氧化细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进,图,8,对,mox-LDL,（,5ug/ml,）诱导的,VSMC DNA,合成率的影响,compared with control ,*,P,0.05,，*,P,0.01,图8 对mox-LDL（5ug/ml）诱导的VSMC D,图,9,对,mox-LDL,（,10ug/ml,）诱导的,VSMC DNA,合成率的影响,compared with control ,*,P,0.05,*,*,图9 对mox-LDL（10ug/ml）诱导的VSMC,Contr,ol LSTZ,图,10,对,PCNA,表达的影响,compared with control ,*,P,0.05,Control LSTZ 图10 对PCN,抗低密度脂蛋白的氧化,抑制细胞的粘附功能,抑制内皮细胞凋亡,抑制平滑肌细胞增殖,对细胞信号通路的影响,细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究,抗低密度脂蛋白的氧化细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进,表,11,内皮、平滑肌细胞,Ca,2+,i,浓度,注：与,ox-LDL,组对照，,P,0.05,，,P,0.01,。,-,分 组 荧光强度,(EC),荧光强度,(VSMC),空白组,6.821.03,*,4.691.55*,n-LDL,组,7.841.90,*,7.472.36,ox-LDL,组,16.001.99 9.600.08,VitE,组,10.702.60,*,7.050.87*,5%,含药血清组,7.440.67,*,6.681.82*,10%,含药血清组,10.192.18,*,7.850.99*,20%,含药血清组,9.361.57,*,5.390.46*,表11 内皮、平滑肌细胞Ca2+i浓度注：与ox-L,表,12,对,ox-LDL,诱导的,VSMC,膜,PKC,表达的影响,注：与,ox-LDL,组比较，,*,P0.05,，,*,P0.01,。,分 组,PKC(pmol/g/min),空 白 组,0.02140.0033,*,ox-LDL,组,0.22780.0487,VitE,组,0.04880.0088,*,20%,含药血清组,0.11750.0368,*,表12 对ox-LDL诱导的VSMC膜PKC表达的影响,图,11,对,VSMC,内,c-fos mRNA,表达的影响,c-fos,GAPDH,compared with control ,*,P,0.05,图11 对VSMC内c-fos mRNA表达的影响 c-fo,c-jun,GAPDH,图,12,对,VSMC,内,c-jun mRNA,表达的影响,compared with control ,*,P,0.05,c-jun GAPDH图12 对VSMC内c-jun m,c-myc,GAPDH,图,13,对,VSMC,内,c-myc mRNA,表达的影响,compared with control ,*,P,0.05,c-myc GAPDH 图13 对VSMC内c-myc,图,14,对,JNK1,磷酸化的影响,compared with control ,*,P,0.05,图14 对JNK1磷酸化的影响compared,图,15,对,ERK1,、,2,磷酸化的影响,图15 对ERK1、2磷酸化的影响,谢 谢,！,谢 谢！,