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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,人教版高中生物,选择性必修三全册教学课件,1,第1节 传统发酵技术的应用,第,1,章 发酵工程,1.,果酒制作原理:,一,.,果酒和果醋的制作原理,酵母菌的呼吸作用,呼吸反应式:,有氧条件:,无氧条件,:,C,6,H,12,O,6,+6O,2,+6H,2,O 6CO,2,+12H,2,O+,能量,酶,C,6,H,12,O,6,2C,2,H,5,OH+2CO,2,+,能量,酶,制作,条件:,温度,:,气体条件,:,时间,:,。,18,30,无氧,10,12d,2.,果醋的制作原理:,(,1,),糖源充足条件时,,将,;,(,2,),糖源不足条件,,先将,。,醋酸菌的有氧呼吸,制作,条件:,温度,:,pH,值,:,气体,:,时间,:,。,30,35,酸性,充足的氧气,7,8d,C,6,H,12,O,6,2O,2,2CH,3,COOH,2CO,2,2H,2,O+,能量,酶,C,2,H,5,OH+O,2,CH,3,COOH+H,2,O+,能量,酶,二,.,果酒和果醋的制作过程:,小组讨论:,以葡萄为实验材料进行果酒和果醋的制作。,讨论内容:,1.,实验材料的任何处理?,2.,为防止发酵液污染应如何操作;,3.,发酵条件应该如何控制?,挑选葡萄 冲洗 榨汁 酒精发酵 醋酸发酵,果酒,果醋,清洗用具及消毒,(一)操作过程注意事项:,1.,材料的处理:,,,原因:,。,先将葡萄冲洗,再去枝梗,避免除去枝梗时引起葡萄破损,增加被杂菌污染的机会,(,1,)榨汁机、发酵瓶要清洗干净,并用,70的酒精,消毒,并晾干。,(,2,)冲洗葡萄时应先冲洗再除去枝梗,(,3,)排气时只需拧松瓶盖,不要完全揭开瓶盖,防止杂菌污染。,2.,防止发酵液被污染:,3.,控制好发酵条件:,将葡萄汁装入发酵瓶,要留大约13的空间,,原因,。,先让酵母菌进行有氧呼吸,快速繁殖,耗尽,O,2,后,再进行酒精发酵;,防止发酵过程中产生的,CO,2,造成发酵液溢出,。,冲洗,葡萄 榨汁装瓶 酒精发酵 醋酸发酵,果酒,果醋,清洗用具及消毒,当葡萄酒制作完成后,,打开瓶盖,,,盖上一层纱布,,进行葡萄醋的发酵。,发酵温度为,30-35,,时间为,7-8d,。,醋酸发酵,空气中的醋酸菌会进入果酒发酵液中大量繁殖,1.,充气口,:,;,2.,排气口:,;,3.,出料,口,:,。,用于醋酸发酵时充气,排出发酵初期产生的二氧化碳和残留空气,防止空气中微生物的污染,用于取样检测,排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接的目的是:,5.,结果分析与评价,(1)在制作果酒和果醋的过程中,发酵液分别有哪些变化?,其中最明显的变化发生在发酵后多少天?引起变化的原因是什么?,在葡萄酒的制作过程中,发酵液会,产生气泡,,这是因为酵母菌发酵产生CO,2,;,开始发酵后,CO,2,产生越来越多,会使发酵液出现“沸腾”现象,在发酵的,10天后,这种现象最明显,。,发酵过程,产热,,会使发酵液温度上升,应注意控温;,随着发酵时间的延长,由果皮进入发酵液的花青素会越来越多,因而,发酵液的颜色会逐渐加深,变成深红色。,果醋发酵完成时,在发酵液的液面上会,出现一层菌膜,,这是醋酸菌膜。,5.,结果分析与评价,(2)在制作果酒的过程中,除了酵母菌,是否还有其他微生物生长?,它们会对果酒发酵产生影响吗?如果有,如何避免这种影响?,还有,乳酸菌,、,醋酸菌,等微生物。,可以通过,减少O,2,含量,、,调节发酵温度,、,pH,来控制醋酸菌含量。,可以通过调节发酵的温度、pH等来控制乳酸菌含量;,在有氧的情况下,醋酸菌能把糖分解成醋酸或者把乙醇转化为乙醛进而,转化为醋酸,。,乳酸菌能将糖分解为甘油、酒石酸等,从而,使果酒变质,。,5.,结果分析与评价,(3)在制作果醋的过程中,酵母菌是否还会继续发酵?,醋酸菌从何而来?采用什么措施可以加快果醋的制作?,随着醋酸发酵的进行,发酵液的,pH、发酵温度等均不利,于酵母菌的生长繁殖,因此酵母菌活性很低,,不会继续发酵,。,在工业上,后期醋的发酵需要,人工接种醋酸菌,。或者买一瓶醋,将其打开暴露于空气中,一段时间后在醋的表面会有一层薄膜(即醋酸菌膜),用这层薄膜进行接种亦可。,在我们的实验条件下,当,打开瓶盖后,空气中的醋酸菌会进入发酵液中大量繁殖,,其他的菌因不适应环境条件而不能繁殖。,5.,结果分析与评价,(,4,)如何检测果酒、果醋的发酵情况(检测是否产生酒精、醋酸)?,a.闻,b.品尝,c.用酸性条件下的,重铬酸钾溶液,检测(,橙色灰绿色,),a.闻;,b.品尝;,c.使用,pH试纸检测,和比较发酵前后的pH值;,d.观察醋酸,菌膜,是否形成;,到社会中去,查阅关于果酒和果醋工业化生产的工艺流程,比较自己制作果酒和果醋的方法与这些流程有哪些异同。在此基础上,请思考:当把少量制作转化为大规模生产时,需要解决哪些实际问题?你能从中体会到技术与工程的区别的和联系吗?,在大规模生产发酵产品时,需要进行更为全面周详的考虑,如考虑原料的来源与选样、菌种的选育与培养、发酵设备的选择、发酵条件的自动化控制、发酵产品的质量控制、成本价格等。,工程、技术与科学的不同,科学以“发现”为核心,技术以“发明”为核心,工程以“建造”和“产品”为核心。技术要通过工程设计等环节,将一系列相关技术体系化地组合起来,才能转化应用在工程中,大规模生产人们需要的产品。,1.,苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的,回答下列为题:,(1)酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程和是苹果醋生产的第一阶段,在酵母菌细胞的_中进行,其产物乙醇与_试剂反应呈现灰绿色,这一反应可用于乙醇的检验;过程在酵母菌细胞的_中进行,与无氧条件相比,在有氧条件下,酵母菌的增值速度_。,细胞质基质,(酸性)重铬酸钾,线粒体,快,当堂检测,(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程,根据醋酸杆菌的呼吸作用类型,该过程需要在_条件下才能完成。,(3)在生产过程中,第一阶段和第二阶段的发酵温度不同,第一阶段的温度_(填“低于”或“高于”)第二阶段。,(4)醋酸杆菌属于_核生物,其细胞结构 中,(填“含有”或“不含有”)线粒体。,有氧,低于,原核,不含有,2.,葡萄酒是葡萄汁经酵母菌发酵而成的,酿制葡萄酒的两个简易装置如图所示。,回答下列问题:,(,1,)试管中的,X,溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定,与乙装置相比,用甲装置制葡萄酒的优点是,、,(答出两点即可)。,(,2,)葡萄汁装入甲装置时,要留有约,1/3,的空间,这种做法的目的是,、,(答出两点即可)。,不需要开盖放气,避免了因开盖引起的杂菌污染,为酵母菌大量繁殖提供适量的氧气,防止发酵旺盛时汁液溢出,乙,甲,X,溶液,物,质,含,量,丙,t,物,质,含,量,丙,t,(,3,)某同学若用乙装置进行发酵,设置两个不同处理组(,A,和,B,),,A,装置中保留一定量的氧气,,B,装置中没有氧气。在其他条件相同且适宜的情况下,测得一段时间内,A,和,B,中酒精含量的变化趋势及,A,中氧气含量的变化趋势如曲线图丙所示。图中曲线,、,、,依次表示,、,、,含量的变化趋势。,(,4,)从细胞呼吸类型看,酵母菌属于,生物;从同化作用的类型看,酵母菌属于,(填“自养”或“异养”) 生物。,A,中的氧气,B,中的酒精,A,中的酒精,兼性厌氧,异养,乙,甲,X,溶液,第,2,节 微生物的培养技术及应用(第1课时),第,1,章 发酵工程,从社会中来,酸奶的制作及安全性,向,经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌,再经过发酵就可以制成酸奶。自制酸奶虽然方便,但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事例屡见不鲜,主要原因是在制作过程中有杂菌混入,。,那么,?怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢,?,一、微生物的基本培养技术,相关信息,微生物,是难以用肉眼观察的微小生物的统称,包括细菌、真菌、病毒及一些原生生物等。发酵工程提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌,。,研究和应用微生物的,前提,是,防止杂菌污染,,,获得纯净的微生物培养物,,也是发酵工程的重要,基础,。,在,实验室培养微生物,一方面要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件;另一方面确保其他微生物无法混入,并将需要的微生物分离出来。,一,、微生物的基本培养技术,(一)培养基的配制,1,概念人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长,繁殖的营养基质。,2,用途:用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。,3,种类:,不,含凝固剂(如琼脂)、呈液体状态的培养基为液体培养基,呈固体状态的培养基为固体培养基。,(一)培养基的配制,4,成分 结合右图分析,碳源:提供碳元素的物质;,氮源:提供氮元素的物质;,水;,无机盐:磷酸盐、,NaCl,;,生长因子:维生素,不同微生物培养基的配方各不相同,在提供上述几种主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对,pH,、特殊营养物质以及,O,2,的需求。当然合适的培养温度也是必不可少的。,特殊营养物质:,又,称作生长因子,是一类微生物正常生长代谢所必需的,而且微生物不能用碳源、氮源自行合成的有机物。广义的生长因子除了,维生素,外,还包括,碱基,、,生物素,和,烟酸,等,有时还包括,氨基酸营养缺陷,突变株所需要的氨基酸,。,组分,含量,提供的主要营养,牛肉膏,5g,碳源、磷酸盐和维生素等,蛋白胨,10g,氮源和维生素等,NaCl,5g,无机盐,H,2,O,定容至,1000mL,水,1000mL,牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成,在,实验室培养微生物,一方面要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件;另一方面确保其他微生物无法混入,并将需要的微生物分离出来。,(二)无菌技术,获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。,/,无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么作用?,/,1,无菌技术的措施,消毒 指使用,较为温和,的,_,、,_,或,_,等方法杀死物体,_,或,_,一部分微生物。,灭菌 指使用,强烈,的,_,方法杀死物体,_,的微生物,包括,_,和,_,。,物理,化学,生物,表面,内部,?,能有效避免操作者被微生物感染。,内外所有,理化,芽孢,孢,子,(二)无菌技术,2,无菌技术的操作内容,对操作的,_,、操作者的,_,和,_,进行,清洁和消毒,;将用于微生物培养的,_,_,、,_,和,_,等进行,灭菌,。,3,无菌技术,的操作方法,常用的消毒方法有,_,消毒、,_,消毒等;灭菌方法有,_,灭菌、,_,灭菌和,_,灭菌等。,空间,衣着,手,器皿,接种用具,培养基,煮沸,巴氏,湿热,干热,灼烧,种类,常用方法,应用范围,消毒,煮沸,100,煮沸,56min,家庭餐具等生活用品,可杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢,巴氏,6265,消毒,30min,或,8090,处理,30s1min,一些不耐高温的液体,如牛奶、啤酒,可以杀死绝大多数微生物,并且基本不破坏其营养成分,化学药物,体积分数为,70%75%,的酒精擦拭、碘酒涂抹、氯气喷洒等,用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等,紫外线,30W,紫外线照射,30min,接种室、接种箱、超净工作台等,灭菌,湿热,100kPa,、,121,维持,1530min,培养基及多种容器,干热,干热灭菌箱,160170,加热,23h,玻璃器皿、金属用具等耐高温、需干燥的物品,灼烧,酒精灯火焰灼烧,接种环、接种针或其他金属用具等,试管口或瓶口,(,三,)微生物的纯培养,1,几个基本概念,培养物 接种于培养基内,在合适条件下形成的含,特定种类微生物的群体,。,纯培养物 由,单一个体,繁殖所获得的微生物群体。,纯培养 获得纯培养物的过程。包括,配制培养基,、,灭菌,、,接种,、,分离,和,培养,等步骤。,探究,实践,酵母菌的纯培养,分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体,这就是,菌落,。采用,_,和,_,能将单个微生物分散在固体培养基上,之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。,平板划线法,稀释涂布平板法,探究,实践,酵母菌的纯培养,目的要求,1,学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板,2,学会进行无菌操作,3,尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落,材料用具(略),方法步骤,1,制备培养基,配制培养基 去皮马铃薯,200g,,切成小块,加水,1000mL,,加热煮沸至马铃薯软烂,用纱布过滤。向滤液中加入,20g,葡萄糖(也可用蔗糖代替)、,1520g,琼脂,用蒸馏水定容至,1000mL,。,?,酵母菌的纯培养,方法步骤,1,制备培养基,灭菌 将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加棉塞,包上,牛皮纸,,并用皮筋勒紧,再放入高压蒸汽灭菌锅中,在压力为,100kPa,、温度为,121,的条件下,灭菌,1530min,。将,58,套培养皿包成一包,用几层牛皮纸包紧,放入高压蒸汽灭菌锅内,本实验所用器具也一并放入灭菌。,思考,1,牛皮纸有何作用?,在灭菌时能避免因水蒸汽凝结而浸湿棉塞;在取出盛有培养基的锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌的作用。,探究,实践,探究,实践,?,酵母菌的纯培养,方法步骤,1,制备培养基,倒平板 待培养基冷却至,50,左右时,在酒精灯,火焰附近,倒平板。,思考,2,为什么培养基灭菌后要冷却到,50,左右时开始倒平板?,琼脂是一种多糖,在,98,以上熔化,在,44,以下凝固,倒平板时高于,50,会烫手,低于,50,时,若不及时操作,琼脂会凝固。,思考,3,倒平板的过程中,若不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?,不能,因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。,思考,4,平板冷凝后,为什么要将平板倒置?,防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染,又可以使培养基中的水分较快地蒸发。,?,酵母菌的纯培养,方法步骤,2,接种和分离酵母菌,通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养,可以分离得到单菌落。,思考,5,接种前灼烧接种环的目的是什么?以后为什么每次划线前都要灼烧接种环?,接种前灼烧接种环的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。以后每次划线前都要灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。,思考,6,为什么每次划线操作总是从上一次划线的末端开始?,划线后末端含有的微生物数目较少,每次从上一次划线的末端开始划线能够使微生物的数目随划线次数的增加而减少,最终分散成单个细胞。,探究,实践,?,?,酵母菌的纯培养,方法步骤,2,接种和分离酵母菌,思考,7,为什么最后一次划线与第一次划线不能相连?,最后一次划线通常已经将微生物稀释成单个的细胞,如果与第一次划线相连则增加了微生物的数目,得不到纯化的效果。,3,培养酵母菌,完成平板划线后,待菌液被培养基吸收,将接种后的平板和一个未接种的平板倒置,放入,28,左右的恒温培养箱中培养,2448h,。,思考,8,为什么要将一个未接种的平板倒置?,未接种的平板作为对照组,若其上有菌落生长,则说明培养基被污染或灭菌不彻底。,探究,实践,警示,:在实验室中,切记不可吃东西、喝水,离开实验室时一定要洗手,以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理,以免污染环境。,练一练,1,下列关于微生物培养基的说法,正确的是( ),A,同一种物质不可能既作碳源又作氮源,B,除水以外的无机物仅提供无机盐,C,凡是碳源都能提供能量,D,无机氮源也能提供能量,【,解析,】,对异养型微生物来说,含,C,、,H,、,O,、,N,的化合物既是碳源,又是氮源,如蛋白胨既是碳源又是氮源和能源,,A,错误;除水以外的无机物种类繁多,如,CO,2,和,N,2,是无机物,分别可以作为某些微生物的碳源和氮源,,B,错误;,CO,2,是自养型微生物的碳源,但不能提供能量,,C,错误;硝化细菌所利用的氮源是氨,同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能量,,D,正确。,D,练一练,2,防止外来杂菌的入侵,获得纯净的培养物,是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是( ),A,实验室里可以用紫外线或化学药剂进行消毒,B,接种环、接种针等金属用具,直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌,C,在实验室中,切不可吃东西、喝水,离开实验室时一定要洗手,防止被微生物感染,D,使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理,以免污染环境,【,解析,】,灼烧灭菌应该在酒精灯火焰的外焰部位灼烧,,B,项错误。,B,练一练,3,下图为实验室中酵母菌纯培养过程的部分操作步骤,下列叙述错误的是( ),A,步骤使用的是已经调节过,pH,并灭菌的培养基,B,步骤操作时需要在酒精灯火焰旁时行,C,到,的过程中,接种环共灼烧了,5,次,D,步骤操作时,不能将第,1,区和第,5,区的划线相连,C,第,2,节 微生物的培养技术及应用(第,2,课时),第,1,章 发酵工程,自然界中微生物数量繁多,种类庞杂,要想从中分离出需要的特定微生物并不容易,尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时,仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。,资料,1973,年,科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌,进而从这种菌中提取出耐高温的,DNA,聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增,DNA,片段的聚合酶链式反应,(,PCR,),。,思考:筛选水生栖热菌的条件是什么?为什么这个条件能让水生栖热菌“脱颖而出”?,7080,的高温条件。水生栖热菌能,适应,高温环境,而绝大多数微生物在此条件下不能生存,因此水生栖热菌被筛选出来。,二,、微生物的选择培养和计数,1,选择,培养基 在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。,思考,讨论,?,选择培养基配方的设计,尿素,CO(NH,2,),2,含氮量高,化学性质相对稳定,是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后,会被土壤中的某些细菌分解成,NH,3,,,NH,3,再转化为,NO,3,-,、,NH,4,+,等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成脲酶,脲酶催化尿素分解产生,NH,3,,,NH,3,可作为细菌生长的氮源。,讨论,1,如果让你配制一种培养基,将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来,培养基的配方该如何设计?,培养基的配方中应含有微生物生长所需的营养要素,碳源、氮源、水、无机盐等。由于绝大多数微生物都能利用葡萄糖,分解尿素的细菌也能利用葡萄糖,可以用葡萄糖作为碳源,但是,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,在培养基中加入尿素提供氮源,使培养基具有了选择作用。该培养基以尿素作为唯一氮源,只允许以尿素作为氮源的微生物生长。,讨论,2,该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点?,该培养基与普通培养基相比较,共同点是都以有机碳(如葡萄糖)作为碳源,都有水和无机盐;不同点是该培养基以尿素作为唯一氮源,使只有能以尿素作为氮源的微生物生长。,拓展应用,1,反刍动物,如牛和羊,具有特殊的器官,瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验,从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。,提示:反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物,其中也包括分解尿素的微生物。瘤胃中的微生物多为,厌氧,微生物,接触空气后会死亡,因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外,还应参照厌氧微生物的培养方法进行实验设计。,拓展应用,2,地球上的植物每年产生的纤维素超过,70,亿吨,其中,40%60%,能被土壤中某些微生物分解利用,这是因它们能够产生纤维素酶。已知刚果红是一种染料,它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红与纤维素形成红色复合物;而当纤维素,被纤维素分解菌分解后,复合物无法形成,培养基中会出现以这,些菌为中心的透明圈。请回答下列问题。,(,1,)现在要从土壤中分离纤维素分解菌,请你给出详细的实验方案。,在富含纤维素的环境中进行土壤取样,用梯度稀释法制备一系列稀释液,制备刚果红选择培养基(纤维素为唯一碳源、含有刚果红),用稀释涂布平板法接种稀释后的菌液,适宜条件下培养,挑选产生透明圈的菌落。,(,2,)你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌?为什么?,打算到富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌。因为根据生物与环境的相互依存关系,在富含纤维素的环境中,纤维素分解菌的含量相对提高,因此从这种土样中获得目的微生物的概率要高于普通环境。,(,3,)有同学说,可以把滤纸埋在土壤中,经过一段时间后,再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。,这一做法可行,通过人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境,使纤维素分解菌聚集。滤纸富含纤维素,将滤纸埋在土壤中,纤维素分解菌就会在滤纸上聚集分解纤维素,可以从腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。,鉴别培养基,思维拓展,选择培养基和鉴别培养基,选择培养基和鉴别培养基是按培养基用途区分的,两者在很多方面具有不同的特点,两者比较如下表:,项目,选择培养基,鉴别培养基,特殊,成分,添加(或缺少)某种化学成分,加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长),机理,抵制其他微生物的生长,促进目标微生物的生长,微生物的某种代谢物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应,使目标菌落出现特定的特征,平板的菌落,只出现目标菌落(其他微生物被抑制),出现多种菌落,但目标菌落出现特定的特征,用途,培养、分离出目标微生物,鉴别出目标微生物,举例,不加氮源,可分离固氮微生物;不加碳源,可分离自养微生物;加青霉素,可分离酵母菌等真菌。,用伊红亚甲蓝琼脂培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有,则菌落呈深紫色,并有金属光泽);在以纤维素为唯一碳源的培养基上加入刚果红可鉴别纤维素分解菌(有透明圈的菌落即为纤维素分解菌菌落),如果想知道,1g,土壤中有多少能分解尿素的细菌,仅有选择培养基是不够的,还需要对土样进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法。,二、微生物的选择培养和计数,2,微生物的选择培养(分离),稀释涂布平板法,由于土壤中细菌的数量庞大,要想得到能分解尿素的细菌的纯培养物,必须要对土样进行充分稀释,然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上,也就是要采用稀释涂布平板法。,稀释涂布平板法的操作步骤:土壤取样,梯度稀释,取菌液滴加到培养基表面,涂布器消毒、灭菌,涂布平板。,待,涂布的菌液被培养基吸收后,将,平板倒置,,放,3037,的恒温培养箱中培养,12d,。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。,二、微生物的选择培养和计数,3,微生物的数量测定,稀释涂布平板法,稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外,也常用来统计样品中,活菌,的数目。,稀释涂布平板法计数原理,当样品中稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。,稀释涂布平板法计数原则,为了保证结果准确,一般选择菌落数为,30300,的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目。在同一稀释度下,应至少对,3,个平板进行重复计数,然后求出平均值。,若其中,1,个平板的计数结果与另外,2,个相差较大,说明在操作过程中出现了错误,在求平均值时该数据应舍去,。,?,二、微生物的选择培养和计数,3,微生物的数量测定,稀释涂布平板法,思考:稀释涂布平板法统计的菌落数与实际有何偏差?为什么?,稀释,涂布平板法统计的菌落,数往往,比活菌的实际数目少,,这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此,统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。,微生物的数量测定的其他方法,显微镜直接计数法,显微镜直接计数,是一种常用的、,快速直观,的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的,细菌计数板,或,血细胞计数板,,在显微镜下观察、计数,然后再计算一定体积的样品中微生物的数量,统计的结果一般是,活菌数,和,死菌数,的总和。此方法计数时包括了死细胞,因此计数的结果,比实际值大,,通过辅助处理,在计数前用,台盼蓝,对菌液进行染色,通过,统计无色细胞,的个数得到活菌数。,探究,实践,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,一、分离原理,绝大多数微生物都能利用葡萄糖,但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以,尿素,作为,唯一氮源,的,选择培养基,,可以从土壤中分离出分解尿素的细菌,该选择培养基的配方见下表。,组分,含量,KH,2,PO,4,1.4g,Na,2,HPO,4,2.1g,MgSO47H2O,0.2g,葡萄糖,10.0g,尿素,1.0g,琼脂,15.0g,H,2,O,定容至,1000mL,二、实验设计,1,土壤取样 细菌适宜在酸碱度接近,中性,的,潮湿,土壤中生长,绝大多数分布在,距地表,38cm,的土壤层。,2,制备培养基 用,牛肉膏蛋白胨培养基,作为,对照组,,用以,尿素为唯一氮源的培养基,作为,实验组,,用来判断选择培养基是否具有选择作用。,探究,实践,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,二、实验设计,3,样品的,稀释,在酒精灯火焰旁称取,10g,土壤,放入盛有,90mL,无菌水的锥形瓶中,振荡使土壤与水充分混合,将细菌分散,制成,10,1,倍土壤稀释液。用,1,支,1mL,无菌吸管从中吸取,1mL,土壤悬液注入盛有,9mL,无菌水的试管中,吹吸,3,次,充分混匀,制成,10,2,倍的土壤稀释液,,依此类推制成,10,3,、,10,4,、,10,5,、,10,6,、,10,7,倍的土壤稀释液(如下图)。,4,涂布平板,测定土壤中细菌的数量,一般选用,110,4,、,110,5,、,110,6,倍稀释的稀释液进行平板培养。第一次做该实验时,可以将稀释范围放宽一点。如将,110,3,110,7,倍,稀释的稀释,液分别涂布到平板上培养。,探究,实践,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,思考:结合下图分析,为了确认培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落,该如何设计对照实验?,二,、实验设计,5,培养与观察 将平板倒置于,3037,的培养箱中培养,12,天,每隔,24h,统计一次菌落数目。,图,中的,1,、,2,、,3,平板是选择培养基,,4,平板为牛肉膏蛋白胨培养基,以判断选择培养基是否具有筛选作用;另外,还要有两个对照,即不涂布稀释的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基,以验证培养基中是否含有杂菌,。,探究,实践,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,二,、,实验设计,6,菌落计数 当菌落数目稳定时,选取菌落数在,30300,的平板进行计数,同一稀释度下至少计数,3,个平板,求出平均值,并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目(如下表)。,7,结果分析与评价,稀释度,10,4,10,5,10,6,10,7,1,2,3,平均值,1,2,3,平均值,1,2,3,平均值,1,2,3,平均值,每个平板的菌落数,内容,现象,结论,有无杂菌污染的判断,空白对照的培养基中无菌落生长,未被杂菌污染,选择培养基中菌落数偏高,被杂菌污染,菌落形态多样,菌落数偏高,培养基中混入其他氮源,选择培养基的筛选作用,牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目多于选择培养基上的数目,选择培养基具有筛选作用,样品的稀释操作,得到,2,个或,2,个以上菌落数在,30300,的平板,操作成功,练一练,1,培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是( ),化学消毒法,灼烧灭菌法,干热灭菌法,紫外线消毒法,高压蒸汽灭菌法,巴氏消毒法,A B,C D,2,下列培养基配方中,能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是( ),A B C D,A,原料,蛋白胨,乳糖,蔗糖,K,2,HPO,4,伊红,亚甲蓝,琼脂,NaCl,蒸馏水,10g,5g,5g,2g,0.4g,0.065g,10g,-,1000mL,10g,5g,5g,2g,-,-,20g,-,1000mL,10g,5g,5g,2g,-,-,-,20g,1000mL,10g,5g,5g,2g,-,-,-,-,1000mL,B,练一练,3,幽门螺杆菌(,Hp,)感染是急、慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。请回答下列有关问题:,(,1,)图中,4,支试管分别代表,4,种微生物在半固体培养基(琼脂含量为,3.5g/L,)中的生长状态,其中,号试管代表,Hp,的生长状态,由图判断,,Hp,在,_,条件下不能生长。,(,2,)下表所示是某种培养基的配方。,将,Hp,接种到,pH,适宜的该培养基中,置于,37,下培养一段时间后,该培养基中,Hp,的数目比刚接种时,_,,主要原因是,_,。,成分,葡萄糖,KH,2,PO,4,MgSO,4,NaCl,CaSO,4,CaCO,3,琼脂,蒸馏水,含量,10g,0.2g,0.2g,0.2g,0.2g,5g,3.5g,定容至,1L,氧气浓度过高或过低,少,缺少氮源,练一练,3,幽门螺杆菌(,Hp,)感染是急、慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。请回答下列有关问题:,(,3,)研究人在患者体内采集样本并制成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下:,配制培养基,灭菌、倒平板,X,培养,观察,在配制培养基时,要加入尿素和酚红指示剂,这是因为,Hp,能合成,_,,它能以尿素作为氮源;若有,Hp,,则菌落周围会出现,_,色环带。,步骤,X,表示,_,。在无菌条件下操作时,先将菌液稀释,然后将菌液,_,到培养基表面上。稀释菌液的目的是获得,_,菌落。,在培养时,需将培养皿倒置并放在,_,中。若不倒置培养,将导致,_,。,临床上用,14,C,标记的,_,分解为,NH,3,和,14,CO,2,。,接种,尿酶,红,单,涂布,恒温培养箱,尿素,无法形成单菌落或污染,第,3,节 发酵工程及其应用,第,1,章 发酵工程,从社会中来,青霉素,青霉素是世界上第一个应用于临床的抗生素。,随着人们对发酵原理的认识,微生物纯培养技术的建立,以及密闭式发酵罐的成功设计,人们能够在严格控制的环境条件下大规模生产发酵产品,发酵工程逐步形成。,一、发酵工程的基本环节,发酵工程一般包括菌种的选育,扩大培养,培养基的配制、灭菌,接种,发酵,产品的分离、提纯等方面。,早期科学家只能从青霉菌中提取少量青霉素,它的价格贵如金。随着高产菌种的选育、发酵技术的发展等,青霉素步入了产业化生产的道路。,一、发酵工程的基本环节,发酵罐内发酵,分离、提纯产物,获得产品,选育菌种,扩大培养,接种,灭菌,配制培养基,性状优良的菌种可以从,自然界中筛选,出来,也可以通过,诱变育种,或,基因工程育种,获得。,工业发酵罐体积大,接入的菌种多,所以在发酵之前还需要对菌种进行扩大培养。,发酵工程中所用的菌种大多是单一菌种。一旦有杂菌污染,可能导致产量大大下降。,在菌种确定之后,要选择原料制备培养基。在生产实践中,培养基的配方要经过反复试验才能确定。,这是发酵工程的中心环节。在发酵过程中,要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等,以了解发酵进程。还要及时添加必需的营养组分,要严格控制温度、,pH,和溶解氧等发酵条件。,现代发酵工程使用的大型发酵罐均有计算机控制系统,能对发酵过程中的温度、,pH,、溶解氧、罐压、通气量、搅拌、泡沫和营养等进行监测和控制;还可以进行反馈控制,使发酵全过程处于,最佳,状态。,如果发酵产品是微生物细胞本身,可在发酵结束后,采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥,即可得到产品。如果产品是代谢物,可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品。,发酵工程的基本环节和发酵罐示意图,一、发酵工程的基本环节,发酵工程基本环节分析,结合教材图,1,9,,分析和讨论以下问题。,1,微生物菌种资源丰富,选择发酵工程用的菌种时需要考虑哪些因素?,需要考虑的因素包括:在低成本的培养基上能迅速生长繁殖;生产所需代谢物的产量高;发酵条件容易控制;菌种不易变异、退化等。,2,怎样对发酵条件进行调控以满足微生物的生长需要?,要对温度、,pH,、溶解氧等发酵条件进行严格控制,使其最适合微生物的生长繁殖,同时及时添加必要的营养组分。,思考,讨论,?,一、发酵工程的基本环节,发酵工程基本环节分析,结合教材图,1,9,,分析和讨论以下问题。,3,在产物分离和提纯方面,发酵工程与传统发酵技术相比有哪些改进之处。,传统发酵技术获得的产物一般不是单一的组分,而是成分复杂的混合物,很多时候不会再对产物进行分离和提纯处理,或者仅采用简单的沉淀、过滤等方法来分离和提纯产物。在发酵工程中使用的分离和提纯产物的方法较多。在产物的,初分离,阶段,常采用,沉淀,、,萃取,、,膜分离,、,吸附,和,离子交换,等方法;在进一步,纯化,阶段,会采用,液相层析法,、,结晶法,等方法。发酵工程产物无论是代谢物还是菌体本身,都需要进行质量检查,合格后才能成为正式产品。,思考,讨论,?,一、发酵工程的基本环节,发酵工程基本环节分析,结合教材图,1,9,,分析和讨论以下问题。,4,在进行发酵生产时,排出的气体和废弃培养液等能直接排放到外界环境中吗?为什么?,不能。因为在进行发酵生产时,微生物及其代谢物中都可能含有危害环境的物质。为了减少或避免污染物的产生和排放,实现清洁生产时,应该对排出的气体和废弃培养液进行二次清洁或灭菌处理。,二、发酵工程的应用,发酵工程以其生产条件温和、原料来源丰富且价格低廉、产物专一、废弃物对环境的污染小和容易处理等,特点,,在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域得到了广泛的应用,形成了规模庞大的发酵工业。,思考,讨论,?,二、发酵工程的应用,1,在食品工业上的应用,生产传统的发酵产品,酱油的发酵:,啤酒的工业化生产流程,啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的,其中发酵过程分,为主发酵,和,后发酵,两个阶段。酵母菌的,繁殖,、,大部分糖的分解,和,代谢物的生成,都在,主发酵,阶段完成。主发酵结束后,发酵液还不适合饮用,要在,低温,、,密闭,的环境下储存一段时间进行,后发酵,,这样才能形成澄清、成熟的啤酒。发酵的温度和发酵的时间随啤酒品种和品味要求的不同而有所差异。,大豆蛋白质 小分子的肽和氨基酸 酱油,霉菌,蛋白酶,淋洗,调制,二、发酵工程的应用,啤酒的工业化生产流程及操作目的分析,生产流程,图示,操作目的,发芽,产生淀粉酶分解淀粉,焙烤,加热杀死胚,终止麦芽生长,减少有机物消耗,保留营养物质,但不使淀粉酶失活,碾磨,将干燥的麦芽碾磨成麦芽粉,便于糖化,糖化,淀粉酶将淀粉分解,形成糖浆,蒸煮,产生风味组分;使酶失活;灭菌,发酵,酵母菌将糖转化为酒精,和,CO,2,消毒,杀死啤酒中的大多数微生物,延长保存期,终止,过滤、调节、分装、出售,二、发酵工程的应用,啤酒的工业化生产流程及操作目的分析,讨论,1,与传统的手工发酵相比,在啤酒的发酵生产过程中,哪些工程手段使啤酒的产量和质量明显提高?,菌种的选育、对原材料的处理、发酵过程的控制、产品的消毒等,都有助于提高啤酒的产量和品质。,讨论,2,“精酿”啤酒一般不添加食品添加剂、不进行过滤和消毒处理等。有人认为饮用“精酿”啤酒比饮用“工业”啤酒更健康,你怎么看待这个问题?“精酿”啤酒是小规模酿造产品,发酵时间长、产量低和价格高,却依然有着市场需求,我们如何辩证地看待大规模生产与小规模制作?,应该辩证地看待这一产品。一方面,这类产品具有多样化的特点,能够满足一些人对独特口感的需求,或者满足一些人的时尚追求。另一方面,这类产品是手工作坊式生产的,存在啤酒品质不稳定、价格昂贵的问题。,二、发酵工程的应用,1,在食品工业上的应用,生产各种各样的食品添加剂,食品添加剂的作用,增加食品的营养,改善食品的口味、色泽和品质,有时还可以延长食品的保存期。,通过发酵工程生产的常见食品添加剂,添加剂类型,举例,酸度调节剂,L-,苹果酸、柠檬酸、乳酸,增味剂,5,-,肌苷酸二钠、谷氨酸钠,着色剂,-,胡萝卜素、红曲黄色素,增稠剂,黄原胶、,-,环状糊精、结冷胶,防腐剂,乳酸链球菌素、溶菌酶,二、发酵工程的应用,1,在食品工业上的应用,生产各种各样的食品添加剂,生产食品添加剂的实例,实例,1,:柠檬酸的发酵,实例,2,:味精的生产,黑,曲霉,淀粉酶,柠檬酸合成酶,淀粉 葡萄糖 柠檬酸,发酵,氧气,处理,谷氨酸棒状杆菌 谷氨酸 味精,二、发酵工程的应用,1,在食品工业上的应用,生产酶制剂,目前,已有,50,多种酶制剂成功用于食品的直接生产、改进生产工艺、简化生产过程、改善产品的品质和口味、延长食品储存期和提高产品产量等方面。这些酶制剂除少数由动植物生产外,绝大多数也是通过发酵工程生产的。,/,请你回忆一下自己做过的生物学实验,想一想曾经使用过哪些酶制剂。,/,探究温度对酶活性的影响实验中的淀粉酶;探究,pH,对酶活性的影响实验中的过氧化氢酶等。,?,二、发酵工程的应用,2,在,医药,工业上的应用,青霉素的发现和产业化生产推动了发酵工程在医药领域的应用和发展。之后,发酵工程逐步扩展到了其他抗生素、多种氨基酸、激素和免疫调节剂等的生产领域。,利用基因工程,将植物或动物的基因转移到微生物中,获得具有某种药物生产能力的微生物,再通过发酵技术大,量生产所需要的产品。,直接对菌种进行改造,再通过发酵技术,大量生产所需要的产品。,利用基因工程,将病原体的某个或某几,个抗原基因转入适当的微生物细胞,再通过发,酵技术大量获得疫苗。,二、发酵工程的应用,3,在农牧业上的应用,从自然界选育出优良菌株,再通过发酵工程大规模发酵生产制成的活菌或其代谢物产品等正在用于现代农牧业的很多方面。,生产微生物肥料,利用微生物在代谢过程中产生的有机酸、生物活性物质等来增进土壤肥力,改良土壤结构,促进植物生长。,利用微生物代谢物抑制土壤中病原微生物的生长,从而减少病害的发生。,生产微生物农药,利用微生物或其代谢物来防治病虫害。,二、发酵工程的应用,3,在农牧业上的应用,生产微生物饲料,研究表明,微生物含有丰富的蛋白质,而且细菌生长繁殖速度很快。以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料,通过发酵获得大量的,微生物菌体,,即,单细胞蛋白,。,用酵母菌等生产的单细胞蛋白可以作为,食品添加剂,;用单细胞蛋白制成的,微生物饲料,,能使家畜、家禽增重快,产奶或产蛋量显著提高。,在,青贮饲料,中添加乳酸菌,可以提高饲料的品质,使饲料保鲜,动物食用后还能提高免疫力。,4,在其他方面的应用,对解决,资源短缺,与,环境污染,问题具有重要意义。,第,1,节 植物细胞工程,第,2,章 细胞工程,从社会中来,兰花,“其茅葺,其叶青青,犹绿衣郎,挺节独立,可敬可慕。迨夫开也,凝情瀼,(,rng,),露,万态千妍,薰风自来,四坐芬郁,岂非真兰室乎!岂非有国香乎!”从古至今,我国人民都把兰花看作高洁、典雅的象征,很多人喜欢养兰花。但是,兰花种子通常发育不全,在自然条件下萌发率极低;传统分株繁殖的方法又存在繁殖周期长、繁殖率低等问题。如何让名贵的兰花大量、快速地繁殖从而走了寻常百姓家呢?,植物细胞工程展身手!,一、植物细胞工程的基本技术,理论基础:,细胞全能性 细胞经分裂和分化后,仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。这种潜能只有在特定的时间和空间条件下,细胞中的基因会选择性地表达。,1,植物组织培养技术,植物组织培养 将,离体,的植物,器官,、,组织,或,细胞,等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其形成,完整植株,的技术。,植物组织培养流程,接种外植体,诱导愈伤组织,诱导生芽,诱导生根,移栽成活,脱分化,再,分化,再,分化,生长发育,外植体,愈伤组织,芽、根,完整植株,脱分化,再分化,生长发育,练一练,1,植物组织培养过程可以归纳为, ,,下列相关叙述错误的是( ),A,通常选取根尖、茎尖等诱导形成愈伤组织,B,再分化过程中,细胞增殖的方式为有丝分裂,C,培养过程中,应在培养基中加入水、无机盐、蔗糖、氨基酸、植物激素等物质,D,将,经脱分化培养成,时,得到胚状体,脱分化,再,分化,D,一、植物细胞工程的基本技术,2,植物体细胞杂交技术,植物体细胞杂交 将不同来源的植物体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新植物体的技术,原理 细胞膜流动性(原生质体的融合)、植物细胞的全能性(杂种细胞培养成杂种植物)。,植物体细胞杂交过程(阅读课文第,36,37,页),思考,1,:植物细胞外面有一层细胞壁,这层细胞壁阻碍着细胞间的杂交。如何突破这层障碍?,利用纤维素酶和果胶酶去除这层细胞壁,获得原生质体。,思考,2,:要借助什么手段让原生质体融合?,物理法:电融合法、离心法;化学法:聚乙二醇(,PEG,)融合法、高,Ca,2+,-,高,pH,融合法。,一、植物细胞工程的基本技术,2,植物体细胞杂交技术,植物体细胞杂交过程,思考,3,:植物体细胞融合成功的标志是什么?,再生出新的细胞壁。,思考,4,:融合后的细胞要经过筛选吗?,如上图,融合后的细胞有,3,种:,AA,、,AB,、,BB,,所以要筛选。,A,细胞,B,细胞,A,原生质体,B,原生质体,正在融合的原生质体,再生出细胞壁,愈伤组织,杂种植株,移栽后的植株,纤维素酶,果胶酶,物理法,化学法,脱分化,再分化,一、植物细胞工程的基本技术,2,植物体细胞杂交技术,植物体细胞杂交育种的优点和局限性,优点:打破生殖隔离,克服远缘杂交不亲和的障碍。,拓展应用,“番茄马铃薯”杂种植株没有如科学家所想象的那样,地上结番茄,地下长马铃薯,这是为什么?,生物体内基因的表达不是孤立的,它们之间是相互调控、相互影响的。,局限性:目前在许多理论和技术问题未解决,还不能让杂种植株按照人们的需求表现出双亲的杂合性状。,练一练,2,用植物细胞工程技术将天竺葵与香茅草进行杂交可产生驱蚊香草,使有驱蚊作用的香茅醛随着植物的蒸腾作用散发到空气中,达到驱蚊的效果。下列有关培养过程的叙述,错误的是( ),A,原生质体的融合常用,PEG,作为诱导剂,B,形成的愈伤组织的代谢类型是自养需氧型,C,由杂种细胞,杂种植株,要经过有丝分裂和细胞的分化,D,该项技术可克服远缘杂交不亲和的障碍,B,二,、植物细胞工程的应用,1,植物繁殖的新途径,快速繁殖,用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术,称为植物的快速繁殖技术,也叫做微型繁殖技术。它不仅可以高效、快速地实现种苗的大量繁殖,还可以,保持优良品种,的遗传特性。,作物脱毒,植物顶端,分生区,附近(如茎尖)的病毒极少,甚至无病毒。因此,切取一定大小的茎尖进行组织培养,再生的植株就有可能不带病毒,从而获得脱毒苗。,二,、植物细胞工程的应用,2,作物新品种的培育,单倍体育种,单倍体育种先通过花药(或花粉)培养获得单倍体植株,然后经过诱导染色体加倍,当年就能培育出遗传性状相对稳定的纯合二倍体植株,这极大地,缩短了育种的年限,,节约了大量的人力和物力。,大多数单倍体植株的细胞中只含有一套染色体,染色体加倍后得到的植株的隐性性状容易显现,因此它也是进行体细胞诱变育种和研究遗传突变的理想材料。,突变体的利用,在植物的组织培养过程中,由于培养细胞一直处于不断增殖的状态,因此它们容易受到培养条件和诱变因素的影响而产生突变。,二,、植物细胞工程的应用,3,细胞产物的工厂化生产,植物细胞产生的,次生代谢物,是一类小分子有机化合物,在植物抗病、抗虫等方面发挥作用,也是很多药物、香料和色素等的重要来源。,相关信息,初生代谢,是生物生长和生存所,必需,的代谢活动,在整个生命过程中它一直进行着。初生代谢物有糖类、脂质、蛋白质和核酸等。,次生代谢,不是,生物生长所,必需,的,一般在特定的组织或器官中,并在一定的环境和时间条件下才进行。,可以利用,植物细胞培养,来获得植物细胞的,次生代谢物,,这个过程就是细胞产物的工厂化生产。植物细胞培养是指在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术。,练一练,
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