【医学大全】诊断酶学全套ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,泸医附院检验科 吴泽才,诊断,酶,学,enzyme,泸医附院检验科 吴泽才诊断酶学enzyme,1,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,2,酶的临床应用简史,1908年，测定尿液中AMY用于急性胰腺炎的诊断；,30年代临床测定ALP用于骨骼疾病的诊断；,1954年，证实血清AST对心肌梗死和肝脏疾患有诊断价值；,60年代初，发现CK在诊断AMI方面更具特异性；,70年代初，发现CK-MB同工酶诊断AMI比CK特异性更高，一度被认为是“金标准”。,80年代以来，发现组织中同工酶进入体液后，有可能发生变化。如CK-MM可进一步分为CK-MM,1,、MM,2,、和MM,3,，CK-MB可分为MB,1,和MB,2,。在诊断AMI上优于总酶和同工酶。,酶的临床应用简史1908年，测定尿液中AMY用于急性胰腺炎的,3,本章主要内容,酶学基础知识,血清酶,酶的定量技术,同工酶及其亚型测定,临床常用血清酶、同工酶及其亚型,诊断酶学,探讨如何进行体液中酶、同工酶及其亚型的测定以及它们在临床诊断、疗效判断、疾病预后中的价值的问题。,本章主要内容酶学基础知识诊断酶学 探讨如何进行体,4,有关概念,酶促反应,；由酶所催化的反应,酶活性,(activity)：酶催化化学反应的能力,底物,(substrate)：酶催化所作用的物质,产物,(product)：酶促反应的生成物,酶的特异性(,specificity)：酶对作用物的选择性,激活剂,(activator)：加速酶促反应的物质,抑制剂,(inhibitor)：减慢甚至终止酶促反应的物质,有关概念酶促反应；由酶所催化的反应,5,酶学基础知识,酶的分子结构与功能,酶促反应的特点与机理,酶促反应动力学,酶的命名与分类,本节主要内容,酶学基础知识酶的分子结构与功能本节主要内容,6,一、酶的分子结构与功能,酶的本质：蛋白质、蛋白质+核酸、核酸。,只有一条多肽链,一、酶的分子结构与功能酶的本质：蛋白质、蛋白质+核酸、核酸。,7,（一）、酶的分子组成,完全由约10010000个氨基酸肽键相连而成,（一）、酶的分子组成完全由约10010000个氨基酸肽键相,8,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,9,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,10,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,11,NAD,+,、NADP,+,黄素腺嘌呤单核苷酸（FMN）、黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）、Ca,2+,、Mg,2+,、Zn,2+,、Fe,2+,NAD+、NADP+黄素腺嘌呤单核苷酸（FMN）、黄素腺嘌呤,12,（二）、酶的活性中心,（二）、酶的活性中心,13,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,14,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,15,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,16,二、酶促反应的特点与机理,二、酶促反应的特点与机理,17,（一）酶促反应的特点,极高的催化效率,（一）酶促反应的特点极高的催化效率,18,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,19,高度的特异性,高度的特异性,20,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,21,酶促反应的可调节性,酶促反应的可调节性,22,（二）、酶促反应的机理,1、酶-底物复合物的形成与诱导契合假说,（二）、酶促反应的机理1、酶-底物复合物的形成与诱导契合假说,23,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,24,2、酶促反应的机理,2、酶促反应的机理,25,三、酶促反应动力学,三、酶促反应动力学,26,（一）、酶促反应,E + S,ES,E + P,K,1,K,-1,K,2,酶,底物,酶-底物复合物,酶,产物,（一）、酶促反应E + SESE + PK1K-1K,27,S P K,2,ES VmaxS,V,=,=,=,=,dt dt Km + S Km + S,具体推导过程见生物化学教材,Vmax：最大反应速率,S：底物浓度,Km： 米氏常数,V：不同S时的反应速度,S P,28,（二）、Km与Vmax,Km,（Vmax V）S,Km =,V,当V=0.5Vmax时， Km= S,Km值等于酶促反应的初速率为最大反应速率Vmax一半时的底物浓度。一般在10,-6,10,-2,mol/L之间，只与酶的性质有关，与酶的浓度无关。,（二）、Km与VmaxKm,29,Km的意义,1.1/Km（Km值越小，亲和力越大）,2. Km值最小者为最适底物,3.V/Vmax=S/（Km+S），若Km和S已知，可计算二者比值；若二者比值已知，也可计算S为Km的多少倍,4.计算工具酶的用量（后面将作介绍）,5.鉴别酶或同工酶,6.推测反应方向及效率（向Km值小的方向反应）,7.寻找限速步骤（Km值最大者）,Km的意义1.1/Km（Km值越小，亲和力越大）,30,Vmax的意义,Vmax,定义：一定酶量下的最大反应速率，即酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度呈正比。在酶的浓度不变时，对于特定底物而言，Vmax也是一个常数。,意义：Vmax=KcatE,0,如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算酶的转换数Kcat，即单位时间内每个酶分子将底物转换成产物的最大值。Kcat越大，表示酶的催化效率越高。目前已知最高酶变率的酶是碳酸酐酶（36,10,6,min,-1,）。,Vmax的意义Vmax,31,Km与Vmax的测定,1 Km + S Km 1 1, = = + ,V VmaxS Vmax S Vmax,以1/V为纵坐标，1/S为横坐标作图可得一直线。纵轴截距为1/ Vmax，斜率为Km/Vmax，横轴截距为-1/ Km。,Km与Vmax的测定,32,（三）、酶促反应的影响因素及反应条件的选择,1、底物的种类和浓度,底物种类,：多底物者酶学研究选生理性底物（一般都是Km最小者），临床测定选诊断价值高者（如ACP前列腺癌麝香草酚磷酸盐）；专一者据测定技术和实用两方面考虑选速度较快的正向或负向反应,底物浓度,（三）、酶促反应的影响因素及反应条件的选择1、底物的种类和浓,33,此为临床化学利用酶作为工具测定各种代谢物如Glu、UA、TG等的方法学基础。,此为临床化学利用酶作为工具测定各种代谢物如Gl,34,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,35,V=V,max,=K,2,E,，反应速率与酶浓度成正比。酶学测定时应给予充分的底物浓度。,V=Vmax=K2E，反应速率与酶浓度成正比。酶学测定时,36,S/Km,V/V,max,100.0,99.0,20.0,95.2,10.0,91.0,1.0,50.0,0.1,9.0,0.01,0.99,从上表可看出，底物浓度最好为Km的20倍乃至100倍，考虑到溶解度、价格等问题，一般采用10倍，具体到每一个酶应根据被测酶的底物类型和反应特异性进行选择。,S/KmV/Vmax100.099.020.095.21,37,2、酶浓度,当S,E时，V与E成正比；,若E很高，则S被过早过多消耗，影响测定，需将E作适当稀释。,2、酶浓度当SE时，V与E成正比；,38,3、缓冲液的种类、离子强度和pH,体液样品与底物混合后不一定维持原来的pH，会影响测定结果，应严格掌握样品与底物的用量比例，一般样品在总体积中的比例应不超过10%。,3、缓冲液的种类、离子强度和pH体液样品与底物混合后不一定维,39,4、温度,25、30、37。,我国推荐温度为37,。,4、温度25、30、37。,40,5、激活剂与抑制剂,临床酶学测定中常用金属离子作为激活剂,5、激活剂与抑制剂临床酶学测定中常用金属离子作为激活剂,41,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,42,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,43,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,44,三、酶的命名、分类与编号,习惯命名法,：据酶所催化的底物、反应的性质以及酶的来源等进行命名。如乳酸脱氢酶、丙氨酸氨基转移酶、胰蛋白酶。简单但不系统。,系统命名法,：,国际酶学委员会1961年提出，标明酶的底物与反应性质，底物名称之间以“：”分隔开，如L乳酸：NAD,+,氧化还原酶。正确合理但繁琐。,酶的分类,：据酶所催化反应类型将酶分为氧化还原酶、转移酶、裂解酶、异构酶、合成酶。,三、酶的命名、分类与编号习惯命名法：据酶所催化的底物、反应的,45,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,46,血清酶,指存在于血清中而非血清特定产生的酶,本节主要内容,血清酶的来源,去路,变化的病理机制,生理差异,血清酶指存在于血清中而非血清特定产生的酶本节主要内容血清酶的,47,一、血清酶的来源,血浆特异酶,血浆蛋白的固有成分，在血浆中发挥特定的催化作用。eg：凝血酶原、蛋白酶类的凝血因子、纤溶酶原、ChE、铜蓝蛋白、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）、脂蛋白酯酶等。大多数在肝脏合成，常作为肝功能试验的一部分。下降较有临床意义。,非血浆特异酶,在血浆中浓度低，且在血浆中很少发挥作用。,外分泌酶,：消化腺、外分泌腺。 eg ：胰淀粉酶、胰脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、前列腺酸性磷酸酶等，血中含量与相应分泌腺的功能及疾病有关。,细胞酶,eg：ALT、AST、LD、CK等。大多数无器官专一性，少部分有器官专一性。升高较有临床意义，临床上使用最为频繁，常用于疾病的诊断。,据来源及在血浆中发挥催化功能的情况分为,一、血清酶的来源血浆特异酶 血浆蛋白的固有成分，在血浆,48,二、去路,酶的清除方式与其他血浆蛋白质类似，但具体清除途径尚不十分明了。,血清酶的半寿期：酶活性失活至原来一半时所需的时间称为酶的半寿期（T1/2）,血清酶的失活和排泄：血管内失活，被蛋白酶降解。,二、去路酶的清除方式与其他血浆蛋白质类似，但具体清除途径尚不,49,酶,半寿期,相对分子量（kD）,ALT,3757h,110,AST,1222h,AST,S,约14h,120,AST,m,约6h,100,CK,约15h,CK,1,（CK-BB）,约3h,88,CK,2,（CK-MB）,约10h,87,CK,3,（CK-MM）,约20h,85,血清酶的半寿期与分子量,酶半寿期相对分子量（kD）ALT3757h110AST12,50,酶,半寿期,相对分子量（kD）,LD,LD,1,53173h,13.5,LD,5,812h,13.5,ALP,37d,120,肠ALP,1h,骨ALP,约40h,胎盘ALP,约170h,GLD,约16h,350,AMY,36h,LPS,36h,48,-GT,34d,酶半寿期相对分子量（kD）LD LD153173h1,51,三、变化的病理机制,可能引起血清酶活性变化（升高或降低）的,病理情况,：细胞膜通透性增加或细胞坏死、细胞内酶合成增加、酶排泄障碍、恶性肿瘤异位分泌、酶合成障碍、中毒及遗传缺陷等。,酶合成异常、酶释放增加、酶排出异常,三、变化的病理机制可能引起血清酶活性变化（升高或降低）的病理,52,酶合成异常,肝损害时合成酶的能力受损，凡是在肝脏合成的酶其血中浓度都有可能下降，如,ChE、LCAT（卵磷脂胆固醇酰基转移酶）、凝血酶原等。,细胞对血清酶的合成增加或酶的诱导作用是血清酶活性升高的重要原因。,骨骼疾病（ ALP,）,、前列腺癌（ ACP,）、,巴比妥、乙醇、哌替啶类药物（,-GT,）,酶合成异常 肝损害时合成酶的能力受损，凡是在肝脏合成的酶其,53,酶释放增加,病因,：炎症、缺血/缺氧、能源供应缺乏、坏死和创伤使细胞释放大分子量酶蛋白。,影响释放的因素,：细胞内外酶浓度差异、酶的相对分子量、酶的组织分布、酶在细胞内的定位和存在形式。,酶释放增加病因：炎症、缺血/缺氧、能源供应缺乏、坏死和创伤使,54,细胞内外酶浓度的差异,组织相同酶不同，内外差异不同；酶相同组织不同，差异也不同。细胞内外酶浓度相差越悬殊，血中升高的幅度可能就越大，如LD，肝内差异是3000倍，红细胞中是200倍。有人计算过，只要有1/1000肝细胞坏死，所释放的酶可使血中部分酶浓度增加一倍。轻度溶血，也可使血清中LD大幅度上升。,细胞内外酶浓度的差异 组织相同酶不同，内外差异不同；酶,55,酶的相对分子量,释出速度与分子量成反比，分子量越小，血中升高的时间可能越早。如AMI时，CK（分子量85000）最先升高，而LD（分子量125000）明显推迟。,酶的相对分子量 释出速度与分子量成反比，分子量越小，血,56,酶的组织分布,组织中含量越丰富，血流越丰富，胞内酶进入血流的可能性越大。由于无组织特异性，大多数血清酶不能特异地反映某个特定组织的病变。,酶的组织分布 组织中含量越丰富，血流越丰富，胞内酶进入,57,酶在细胞内的定位和存在形式,线粒体酶与胞质酶比较，不易从细胞中释出，病变较轻时往往血清中浓度较胞质酶低，病变较重时可能升高幅度较大。如ALT大量存在于胞质中，而AST则在线粒体中较多。急性肝炎时，由于病变较轻，血中ALT超过AST；而在肝硬化时，主要病变为肝细胞坏死，往往AST大于ALT。有些酶与结构蛋白结合，或以多酶复合物的形式存在，较难从胞内释出。,酶在细胞内的定位和存在形式 线粒体酶与胞质酶比较，不易,58,酶排出异常,AMY,：升高可能是由于肾脏功能减退所引起，因AMY约有24%由肾脏排泄。,ALP,：胆道梗阻时升高，是因梗阻区ALP合成加强，ALP排泄受阻而逆流入血所引起。,酶排出异常AMY：升高可能是由于肾脏功能减退所引起，因AMY,59,四、生理差异,性别、年龄、进食、运动、妊娠、其他情况,影响参考值的制定及结果分析。,四、生理差异性别、年龄、进食、运动、妊娠、其他情况,60,性别,CK、ALP、,-,GT有性别差异，男性高于女性。CK肌肉组织含量高，雌激素抑制,-,GT合成，男性酗酒。,性别 CK、ALP、-GT有性别差异，男性高于女性。,61,年龄,ALP在新生儿、婴幼儿、儿童、少年、青少年阶段均较成人水平高。CK、LD也有类似情况。,年龄 ALP在新生儿、婴幼儿、儿童、少年、青少年阶段均,62,进食,高脂、高糖饮食可使ALP升高，酗酒可使,-,GT升高。,进食 高脂、高糖饮食可使ALP升高，酗酒可使-GT升,63,运动,激烈运动 CK、LD、AST、ALD、ALT均可升高。,运动 激烈运动 CK、LD、AST、ALD、ALT均可升,64,妊娠,胎盘分泌，耐热ALP、LD、LAP（亮氨酸氨基转肽酶）、ALT均有不同程度的升高。,其他,某些酶或同工酶有种族差异。如G6PD。美国黑人、犹太人、白人、黄种人有差异。,妊娠 胎盘分泌，耐热ALP、LD、LAP（亮氨酸氨基转肽,65,酶的定量技术,监测方法,酶活性浓度的测定,连续监测法测定酶活性浓度,工具酶,测定条件的优化,活性浓度的单位,系数K值的计算与应用,测定的标准化,免疫化学测定法,本节主要内容,酶的定量技术监测方法本节主要内容,66,一般化学测定的原理 A=KC，而酶的测定,S,P,E,酶：Pg到ng水平，测质量困难，利用酶有加速化学反应（催化）的特性，通过测定被加速化学反应的反应速率，根据酶促反应中,底物的减少量,或,产物的生成量,来计算酶活性浓度的高低。所谓的浓度是指“酶催化活性浓度”或“酶活性浓度”。,酶的测定原理 V=,P/,t=K, E或,V= -S/t=K E,一般化学测定的原理 A=KC，而酶的测定SPE酶：Pg到n,67,一、监测方法,常用的,监测,方法有量气法、分光光度法、荧光 法、放射性核素法、电极法等。,监测底物的减少量或产物的生成量,一、监测方法常用的监测方法有量气法、分光光度法、荧光,68,量气法,若反应系统中有气体变化，通过测量一封闭系统中气体变化后的气体体积或压力，从而计算出气体的变化量（底物的减少量或产物的生成量）。,只能测定产生或消耗气体的酶。,操作繁琐，灵敏度低且技术要求高，很少采用。,量气法若反应系统中有气体变化，通过测量一封闭系统中气体变化后,69,比色法和分光光度法,比色法,20世纪50年代以前常用比色法。酶与底物作用一段时间后停止反应，加入化学试剂与产物或底物反应呈色，用比色计比色，作标准曲线或标准管，计算数值。,比色法和分光光度法比色法 20世纪50年代以前常用比色,70,分光光度法,50年代起取代比色法。优点有三：一是测定范围扩大，可达红外和紫外；二是不需停止反应；三是不作标准管或标准曲线。Eg：反应系统可产生质子或电子（如脱氢酶催化的反应），可将NAD（P）,+,/NAD（P）H相互转化，利用二者吸收光谱差异可于340nm处监测底物的减少量或产物的生成量，从而推算出酶活性浓度。结合酶偶联技术，几乎可应用于各种血清酶的测定。缺点：需要精确带恒温装置的分光光度计。,分光光度法 50年代起取代比色法。优点有三：一是测定范,71,荧光法和放射性核素法,荧光法,较分光光度法灵敏度高23个数量级，可用于一些低浓度酶的测定。底物或产物可产生荧光，或将荧光物质结合到底物上，根据荧光强弱的变化换算出酶的活性。,核素法,有污染且操作繁琐，少用。,荧光法和放射性核素法荧光法 较分光光度法灵敏度高23,72,其他方法,电极法、旋光法、极谱法、高效液相色谱法或生物发光法等。,其他方法电极法、旋光法、极谱法、高效液相色谱法或生物发光法等,73,二、酶活性浓度的测定,（一）、酶促反应进程,二、酶活性浓度的测定（一）、酶促反应进程,74,时间,t,零级,一级,反应级数,S,P,V=dP/dt,酶促反应时间进程曲线（,S为底物,，,P为产物,）,时间t零级一级反应级数SPV=dP/dt酶促反应时间,75,延迟时间,监测时间,时间,底物耗尽,延滞期,线性反应期,零级反应期,斜率=速度=,A/T,吸光度,单试剂测定体系酶促反应进程曲线,延迟时间监测时间时间底物耗尽延滞期线性反应期 斜率=速度=,76,延滞期,酶促反应开始阶段，因各种因素的影响，反应速率比较慢，这段时间称为延滞期，可以是几秒到几分钟，双底物反应或需要辅酶参与者时间较长，通常为13min。,延滞期酶促反应开始阶段，因各种因素的影响，反应速率比较慢，这,77,零级反应期,经过延滞期后，在过量底物存在下，反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段，即酶促反应以恒定的速率进行，不受底物浓度的影响，这段时期称为线性反应期或零级反应期。,零级反应期经过延滞期后，在过量底物存在下，反应速率加快并达到,78,一级反应期或非线性反应期,随着时间的延长，由于种种因素，如底物因酶反应消耗而浓度下降，产物浓度上升出现逆反应，反应产物可能有抑制酶反应作用或酶的热失活等，使酶促反应减慢，即反应速率下降，偏离线性，这段时间称为一级反应期。反应速率与底物S成正比，产物P与时间t不成线性关系。若是两种或两种以上底物参与反应，则反应可为多级，统称非线性反应期。,一级反应期或非线性反应期随着时间的延长，由于种种因素，如底物,79,（二）、酶活性浓度测定方法,要求,：酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初速度（V）达到最大反应速度Vmax，即在过量底物存在下的零级反应期的速度，此时反应速度与酶浓度E之间有线性关系。V=K,E,（二）、酶活性浓度测定方法要求：酶活性浓度测定就是要使酶促反,80,酶与底物作用一段时间，然后加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止酶促反应，测定这段时间内底物的减少量或产物的生成量，计算酶促反应的平均速度。,优点：简单，不需保温设备，显色剂的选择可不考虑对酶活性的影响。,缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都是零级反应。（重结果不重过程）,1、定时法,时间,定时法中可能引起的误差,t,1,t,2,1,2,3,产物生成,酶与底物作用一段时间，然后加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止酶,81,2、连续监测法,连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间变化的多点数据，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。,优点：不需停止反应，不加呈色剂，准确监测整个反应过程（可将多点数据连接成线，很容易找到成线性的区段，可以观察到是否偏离零级反应，因而可选择线性反应期来计算酶活性）。,2、连续监测法连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物的浓度,82,三、连续监测法测定酶活性浓度,（一）、连续监测法的种类,直接法,：在不终止酶促反应条件下，直接通过测定反应体系中底物或产物理化特性的变化如吸光度、荧光、旋光性、pH、电导率、粘度等，从而计算出酶活性浓度。如：,底物+E（脱氢酶）+NAD（P）,+,产物+E+NAD（P）H,NAD（P）H在260nm和340nm处有吸收峰，而NAD（P）,+,只在260nm处有吸收峰。测定反应体系在340nm处吸光度的变化即可。,三、连续监测法测定酶活性浓度（一）、连续监测法的种类,83,间接法,：底物+E 产物+E,试剂,生成可被仪器检测的物质,Ei,可被检测物质,酶偶联法,血清ChE的丁酰硫代胆碱测定法,间接法：底物+E 产物+E试剂生成可,84,（二）、酶偶联反应,A,B,C,Ex,Ei,A,B,C,D,Ex,Ei,Ea,被测定酶,始发反应,指示反应,指示酶：常为脱氢酶,辅助反应,辅助酶,多为NAD（P）H,（二）、酶偶联反应ABCExEiABCDExEiEa被测定酶,85,内源性反应,预孵育期,延滞期,线性反应期,偏离线性,吸光度（340nm）,加入试剂1,加入试剂2,时间（min）,酶偶联法测定ALT的吸光度变化,内源性反应预孵育期延滞期线性反应期偏离线性吸光度（340nm,86,预孵育期,内源性反应，去除干扰，如使试剂中的NADH变为NAD,+,等。,预孵育期内源性反应，去除干扰，如使试剂中的NADH变为NAD,87,始发反应是零级反应，辅助反应与指示反应必须是一级反应，辅助反应与指示反应的反应速率应超过或等于测定酶的反应速率。,指示酶的选择：Km值小，酶促反应最适pH应与工具酶的反应最适pH相接近，便宜。,指示酶量：Vx/（km）x = Vi/（Km）i,测定酶的测定上限,测定酶的米氏常数,指示酶的用量,指示酶的米氏常数,Vx=,P,+（km）i,Vi,P,Vi= Vx1+（km）i/P,中间产物浓度,始发反应是零级反应，辅助反应与指示反应必须是一级反应，辅助反,88,（三）、干扰因素,其他酶和物质的干扰（来自于标本）,酶的污染（来自于酶制剂）,非酶反应,（底物分解，非酶反应产生类似产物吸收光谱的衍生物）,分析容器的污染（重金属、表面活性剂、杂质等会影响酶的活性）,沉淀形成,解决方法,作试剂空白、采用双试剂,（三）、干扰因素其他酶和物质的干扰（来自于标本）,89,四、工具酶,定义,：通常把酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶称为工具酶。,（一）、,常用工具酶及其质量要求,常为氧化还原酶类（产物易监测），反应体系中的限速因子为待测化合物和待测酶，工具酶和其辅助底物应过量。工具酶纯度不必要求过高，但杂质（杂酶、抑制剂）的含量有一定限制，以减少或避免一些干扰测定的不必要的副反应。,四、工具酶定义：通常把酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或,90,（二）、,工具酶参与的指示反应,被测物,工具酶（氧化酶）,H,2,O,2,过氧化氢酶或POD,有色物质,葡萄糖氧化酶、尿酸氧化酶、胆固醇氧化酶、甘油氧化酶、丙酮酸氧化酶等,显色剂（氧化发色剂）,邻联甲苯胺（OT）、四甲基联苯胺（TMB）、联苯胺（DAB）、4-AAP等,偶联H,2,O,2,的工具酶及其指示反应,Glu、UA、胆固醇、甘油、丙酮酸,Glu,+O,2,+H,2,O,GOD,葡萄糖酸内酯+H,2,O,2,+4氨基安替比林+酚,POD,红色醌类化合物,Trinder反应,（二）、工具酶参与的指示反应被测物工具酶（氧化酶）H2O2过,91,工具酶（脱氢酶）,被测物（或被测物被催化的产物、或被测酶催化底物的产物）,NAD（P）,+,/NAD（P）H,NAD（P）H/NAD（P）,+,葡萄糖、尿素、,-羟丁酸、TG、甲醇、血氨、ALT、AST、LD、GLD、CK、ALD、G6PD和ICD,NAD（P）,+,或NAD（P）H偶联的脱氢酶及其指示反应,Glu,+ATP,HK,G6P,+ADP,+NADP,+,G6PD,6-磷酸葡萄糖酸内酯+NADPH,L-丙氨酸+,-酮戊二酸,ALT,L-谷氨酸+,L-丙酮酸,H,+,+NADH+,LD,L-乳酸+NAD,+,被测酶,工具酶（脱氢酶）被测物（或被测物被催化的产物、或被测酶催化底,92,五、血清酶活性浓度测定条件的优化,理想状况是达到“,最适条件,”，即在所选温度下使酶促反应的催化活性达到最大。影响因素：底物、辅因子、激活剂、缓冲液和变构剂种类和浓度；指示酶和辅助酶的种类和浓度；反应混合液的pH和离子强度；其他可变因素，如已知抑制剂的去除。“最适条件”虽能提高准确度，但往往很难重复，若测定的准确性和重复性二者均需兼顾，可考虑对最适条件进行适当修改。主要包括以下内容：,五、血清酶活性浓度测定条件的优化理想状况是达到“最适条件”，,93,1、方法选择 多用连续监测法，少用或不用定时法；少步骤。,2、仪器和设备 性能必须符合要求，检测装置必须清洁干净。,3、试剂 符合要求，尽量用液体双试剂。,4、自动生物化学分析仪参数的设置 据仪器及试剂给出的方法和参数进行设置（认真自学。）,5、标本的采集、运输与保存的技术误差因素（,见链接,）,1、方法选择 多用连续监测法，少用或不用定时法；少步骤,94,六、酶活性浓度的单位,（一）、酶活性单位,惯用单位,谁先报告测定方法，即以他的名字命名。如转氨酶的Karmen单位、King单位，ALP的King单位等。混乱，无可比性。,国际单位,（,见链接,）,Katal单位,（,见链接,）,六、酶活性浓度的单位（一）、酶活性单位,95,（二）、,酶活性浓度单位,表示方法 U/L 1U/L=16.67,nKata/L,酶活性浓度单位的计算 标准管法、标准曲线法、摩尔消光系数法,摩尔消光系数,：在特定条件下，一定波长的光，光径为1.00cm时，通过所含吸光物质的浓度为1.00mol/L时的吸光度。,U/L=,A,min,V10,6,vL,吸光度变化,反应体系体积（ml）,摩尔消光系数（cm,2,mol,-1,）,样品量（ml）,比色杯光径（cm）,将mol换算成,mol,（二）、酶活性浓度单位U/L=AminV106v,96,（三）、,参考值和正常上限倍数的应用,因仪器、试剂、方法不同，各实验室应建立自己的参考值。,正常上限（ULN）倍数：测定值/正常上限值,（三）、参考值和正常上限倍数的应用,97,七、系数K值的计算与应用,U/L=,A,min,K,K=,V10,6,vL,酶活性浓度定量系数,如连续监测法测定血清中LD活性浓度，已知,为6.22,10,3,cm,2,mol,-1,，血清量为50,l，底物液为1ml，比色杯光径为1cm，则K=1.0510,6,/6.2210,3,0.051=3376,七、系数K值的计算与应用U/L=AminKK=V106,98,（一）、,系数K值的意义与设置,K值大，线性宽，但重复性差；,K值小，线性窄，精密度好。,K值设置应兼顾参考上限与测定时间。,上限大，测定时间长，则K值大；,上限小，测定时间短，则K值小。,仪器噪音（仪器对同一溶液反复测定时的吸光度误差）一般只能控制在0.001水平。若K为8000，测定时间为1min，则误差为8U/L，测定时间为2min，误差为4U/L，测定时间为0.5min，误差为16U/L。,改变K值最简章的方法就是改变标本的稀释度，稀释倍数越大，K值越大。（标本加样体积 v/V）,（一）、系数K值的意义与设置,99,（二）、,系数K值的类型与计算,理论K值,：由理论,值计算得出,仪器实测K值,：,U/L,标,=,A,标,min,K,校正品已给出数值,仪器可测出,（二）、系数K值的类型与计算U/L标=A标minK校正品,100,标准化途径：使用推荐方法或参考方法、使用公认的酶校正物或酶参考物。,全球参比体系：,八、临床酶学测定的标准化,八、临床酶学测定的标准化,101,九、酶的免疫化学测定,利用酶蛋白的抗原性，通过抗原抗体反应直接测定酶的浓度（活性浓度或质量浓度）。,方法 放射免疫测定（RIA）、免疫抑制法、化学发光免疫测定（CLIA）、酶免疫测定（EIA）、荧光酶免疫测定（FELA）。,九、酶的免疫化学测定利用酶蛋白的抗原性，通过抗原抗体反应直接,102,（一）、测定原理,总的来说，就是利用抗原抗体反应进行测定，具体到不同的方法，又有所差异。,以RIA为例,直接法,：核素标记物+待测酶,产生沉淀,沉淀定量分析,间接法,：待测酶与标记酶竞争有限抗体，据竞争程度来定 量样品中的酶蛋白量。,报告方式：活性单位U/L，质量单位ng/ml或,g/L。,（二）、免疫化学测定的优缺点,优点：灵敏度高、特异性强、能用于一些不表现酶活性或无活性的酶测定，特别适用于同工酶的测定。,缺点：试剂制备困难、操作繁琐、成本高。,（一）、测定原理,103,同工酶及其亚型测定,isoenzyme,同工酶及其亚型测定isoenzyme,104,同工酶,：同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多肽链单体、纯聚体或杂合体，具有相同的催化功能，但其分子组成、空间构象、理化性质、生物学性质以及器官分布和细胞内定位不同的一类酶。,亚型,：指基因在编码过程中，由于翻译后修饰差异所形成的多种形式的一类酶，往往在基因编码产物从细胞内释入血浆时因肽酶的降解作用而形成。,同工酶：同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多肽链单体、纯,105,人体中几种重要的同工酶,酶,中文名,同工酶种类,相关疾病,CK,肌酸激酶,CK-BB，CK-MB，CK-MM（CK,1,，CK,2,，CK,3,）,心梗、肌病、颅脑损伤、肿瘤,LD,乳酸脱氢酶,LD,1,、LD,2,、LD,3,、LD,4,、LD,5,心梗、肌病、肺梗死、肝病、肿瘤,ALP,碱性磷酸酶,肝型，小肠型，骨型，胎盘型，肾型,肝胆疾病、骨病、妊娠、结肠炎、肿瘤,ACP,酸性磷酸酶,红细胞型，前列腺型，溶酶体型,前列腺癌、血液病、骨肿瘤,-GT,-谷氨酰转移酶,-GT,1,，,-GT,2,，,-GT,3,，,-GT,4,肝癌、梗阻性黄疸,AMY,淀粉酶,P-AMY（P,1,，P,2,，P,3,），S-AMY（S,1,，S,2,，S,3,，S,4,）,急、慢性胰腺炎、腮腺炎,人体中几种重要的同工酶酶中文名同工酶种类相关疾病CK肌酸激酶,106,酶,中文名,同工酶种类,相关疾病,ALT,丙氨酸氨基转氨酶,ALTs，ALTm,心梗、肝病,AST,（天）门冬氨酸氨基转移酶,ASTs，ASTm,心梗、肝病,GP,糖原磷酸化酶,GP-BB，GP-LL，GP-MM（GP,1,，GP,2,，GP,3,）,心梗、脑损伤、肾病、肌病,GST,谷胱甘肽转移酶,GST,1,和GST,2,（GST-,），GST,3,（GST-,），GST,4,和GST,5,（GST-,）,肺癌、肝炎,ALD,醛脱氢酶,ALD-A，ALD-B，ALD-C,肝癌、肝炎、神经细胞癌,NAG,N-乙酰-,-氨基葡萄糖苷酶,NAG-A，NAG-B，NAG-I,肝病、肾病,酶中文名同工酶种类相关疾病ALT丙氨酸氨基转氨酶ALTs，A,107,【医学大全】诊断酶学全套ppt课件,108,一、分类,单基因决定的同工酶,复等位基因同工酶,多基因决定的同工酶,修饰的同工酶,一、分类单基因决定的同工酶,109,二、分析方法,理论基础,：同工酶及其亚型的一级结构不同，导致其在理化性质、催化活性、生物学性质等方面有明显的性质差异，利用这些差异进行分析。,分析步骤,：先分离再测定,常用方法,：电泳法、色谱法、免疫分析法（,免疫抑制法，免疫化学测定法RIA、EIA、FIA、CLIA,）、动力学分析法、蛋白酶水解法。,二、分析方法理论基础：同工酶及其亚型的一级结构不同，导致其在,110,1、电泳法,方法,：醋纤膜电泳（以往多用），琼脂糖凝胶电泳（日前国内外的一些自动化电泳分析系统多采用琼脂糖凝胶作支持介质，采用高压电泳进行同工酶及其亚型的分离与鉴定），聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳、毛细管电泳。,显色染料,：偶氮染料和四唑盐,扫描定量,：显色后的区带用光密度计或荧光计扫描定量分析。,1、电泳法方法：醋纤膜电泳（以往多用），琼脂糖凝胶电泳（日前,111,巨分子酶,若区带数与同工酶数不一致时，应特别注意巨分子酶的存在，其形成原因主要有：,酶与免疫球蛋白形成的复合物，如CK-BB-IgG、 CK-MM-IgA、 LD-IgA等。,酶与其他蛋白质形成的复合物，如LD-,-脂蛋白等。,酶亚基或酶分子之间形成的聚合物，如CK-Mt聚合物、LD亚基自身聚合等。现已有关于CK、LD、AST、AMY、,-GT和ALP等巨分子酶的报道。如患者临床症状不典型，同工酶谱异常时要特别警惕血清中有无巨分子酶，以免造成对酶测定结果的错误判断和临床误诊。,用免疫抑制法测定CK-MB时，如出现CK-MB高于总CK的现象时，就要怀疑有巨CK的存在。可用电泳法、热失活法、免疫学方法进行鉴定。,巨分子酶若区带数与同工酶数不一致时，应特别注意巨分子酶的存,112,1,2,3,4,5,1,2,3,4,5,1,2,3,4,5,1,2,3,4,5,+,-,+,-,+,-,+,-,正常,急性心肌梗死,慢性肝炎,溶血性贫血,正常和几种病理状况时血清LD同工酶的琼脂糖凝胶电泳分离图谱,12345123451234512345+-+-+-+-正常,113,MM,3,MM,2,MM,1,CK-MM,MB,2,MB,1,CK-MB,CK-BB,-,+,阴极,阳极,巨CK,2,腺苷酸激酶（AK）,巨CK,1,（CK-BB-IgG）,巨CK,1,（CK-BB-IgA）,清蛋白复合物,*,CK-MT,*清蛋白与内源性荧光物质形成的复合物,A,B,A 典型CK同工酶与亚型区带,B 异常CK区带,正常和病理状况时琼脂糖凝胶电泳分析血清CK同工酶可能出现的酶带,MM3MM2MM1CK-MMMB2MB1CK-MBCK-BB,114,2、色谱法,3、免疫分析法,免疫抑制法,利用同工酶的一种亚基与相应的抗体结合后，酶活性受到抑制，测定 加与不加抗体前后样品中酶活性变化，可以计算出该型同工酶的活性。,M,M,M,B,B,B,CK-MM（CK,3,）,CK-MB（CK,2,）,CK-BB（CK,1,）,若亚基M与相应抗体结合，酶活性受到抑制。CK-MM将被完全抑制，CK-MB被抑制50%，而CK-BB则不受影响，当血清中无CK-BB或仅有痕量时，则：,不加抗CK-MM血清时样品的CK活性=CK-MM和CK-MB活性,加入抗CK-MM血清时样品的CK活性=50%CK-MB的活性,加入抗CK-MM血清时样品的CK活性,2,= CK-MB活性,所测CK-MM和CK-MB之总活性CK-MB活性= CK-MM活性,2、色谱法MMMBBBCK-MM（CK3）CK-MB（CK2,115,免疫沉淀法,加入抗体前测得的总活性-上清液酶活性=被沉淀的同工酶的活性,前列腺ACP（PAP）、胎盘ALP的测定。,其他免疫学方法测定酶蛋白均是测质量。,免疫沉淀法,116,4、动力学分析法,5、蛋白酶水解法,4、动力学分析法,117,临床常用血清酶、同工酶及其亚型分析,转氨酶及其同工酶,-谷氨酰转移酶及其同工酶,肌酸激酶及其同工酶和亚型,乳酸脱氢酶及其同工酶,碱性磷酸酶及其同工酶,酸性磷酸酶及其同工酶,淀粉酶及其同工酶,脂肪酶,胆碱酯酶,临床常用血清酶、同工酶及其亚型分析转氨酶及其同工酶,118,酶浓度变化的病理机制及其病因推断,由细胞坏死或细胞膜通透性变化引起，表示脏器或组织损伤；,细胞内酶合成增加所致，提示组织再生、修复、成骨或异位分泌，或提示有恶性肿瘤的可能；,酶排泄障碍引起者说明有梗阻存在。,同工酶的分析与鉴定则更能反映疾病的部位、性质和程度。,酶浓度变化的病理机制及其病因推断由细胞坏死或细胞膜通透性变化,119,一、转氨酶及其同工酶,转氨酶（氨基转移酶）,：催化氨基在氨基酸与,-酮酸间转移的酶类，体内有60多种，丙氨酸氨基转移酶（ALT）、（天）门冬氨酸氨基转移酶（AST）是最重要的两种。,一、转氨酶及其同工酶转氨酶（氨基转移酶）：催化氨基在氨基酸,120,现用名,丙氨酸氨基转移酶,（天）门冬氨酸氨基转移酶,英文名,ALT,AST,曾用名,谷丙转氨酶（GPT）,谷草转氨酶（GOT）,器官含量多少顺序,肝,、肾、心、骨骼肌,心,、肝、骨骼肌、肾、胰腺、脾、肺、红细胞,同工酶,（ALTs）、（ALTm）,ASTs、ASTm,细胞内定位,细胞质（多）、线粒体（少）,细胞质 线粒体,（少）、 （多）,（一）、生物化学特征,现用名丙氨酸氨基转移酶（天）门冬氨酸氨基转移酶英文名ALTA,121,L-丙氨酸 +,-酮戊二酸,ALT,L-谷氨酸 +,L-丙酮酸,H,+,+ NADH +,LD,L-乳酸 + NAD,+,（二）、测定方法,L-门冬氨酸 +,-酮戊二酸,AST,草酰乙酸,+ L-谷氨酸,H,+,+ NADH +,MD,L-苹果酸 + NAD,+,二反应中，NADH的氧化速率与标本中的AST和ALT活性呈正比，在340nm处检测吸光度的下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率（-A/min），计算出AST、ALT的活性浓度。,L-丙氨酸 + -酮戊二酸ALTL-谷氨酸 + L-丙,122,（三）临床意义,ALT,反映肝损害的一个很灵敏的指标，临床上主要用于肝脏疾病的诊断。ALT主要存在于胞质中，正常情况下肝细胞中ALT浓度约为血清中的7000倍，1/1000肝损害可使血清中ALT升高1倍。,反映急性肝损害,急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒，ALT很快升高，峰值可为20ULN甚至100ULN以上；,判断病情,ALT水平与急性肝炎病情轻重相平行，最先升高最后降至正常，可用它判断肝炎是否恢复；,鉴别诊断肝脏疾病,AST/ALT：急性肝炎时1，肝硬化时2 ，肝癌时3,注意酶胆分离,重症肝炎时由于大量肝细胞坏死，血中ALT逐渐下降，而胆红素却进行性上升，出现所谓“酶胆分离”现象，常是肝坏死的前兆。,其他疾病,心脏、骨骼肌受损，胆石症、胆囊炎、肝癌、肝淤血、药物等可引起血中ALT升高（很少超过10ULN）。,（三）临床意义ALT 反映肝损害的一个很灵敏的指标，,123,AST,心肌含量最高，以往多用于AMI的诊断，但由于它升高迟于CK，恢复早于LD，故诊断AMI价值不大，现少用。肝中含量约为ALT的2.5倍，主要存在于线粒体中，急性肝炎时升高程度不及ALT；慢性肝炎，特别是肝硬化时，病变累及线粒体，AST升高程度超过ALT。,ALT、AST,轻度增高（13ULN）：胰腺炎、乙醇性脂肪肝、肝硬化、肉芽肿、肿瘤；中度增高（310ULN）：传淋、慢活肝、肝外胆道梗阻、心肌梗死；重度增高（,20ULN）：病毒性肝炎、中毒性肝炎等；ASTALT：肝硬化、慢活肝、心肌梗死。,AST 心肌含量最高，以往多用于AMI的诊断，但由于它,124,二、,-谷氨酰转移酶及其同工酶,催化,-谷氨酰基从谷胱甘肽（GSH）或其他含-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上。含SH基的糖蛋白。底物特异性较差。,二、-谷氨酰转移酶及其同工酶催化-谷氨酰基从谷胱甘肽（G,125,现用名,-谷氨酰转移酶,英文名,-GT或GGT,曾用名,-谷氨酰转肽酶,-GTP或GGTP,器官含量多少顺序,肾、胰、肺、肝,同工酶,-GT,1,、,-GT,2,、,-GT,3,、,-GT,4,细胞内定位,线粒体、细胞膜,（一）生物化学特征,现用名-谷氨酰转移酶英文名-GT或GGT曾用名-谷氨酰,126,（二）测定方法,L-,-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺 + 甘氨酰甘氨酸,-GT,pH7.4,2-硝基-5-氨基苯甲酸 +,-谷氨酰双甘肽,黄色物质，410nm处直接连续监测，吸光度的增高速率与,-GT活性成正比关系。,（二）测定方法L-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺 + 甘氨,127,（三）临床意义,胆道疾病（胆石症、胆道炎症、肝外梗阻）,明显增高，可达530ULN,阳性率高，为85%93%,肝实质疾病（肝炎、脂肪肝、肝硬化）,中度增高，可达25ULN,肝癌（原发、继发）,明显增高且阳性率高,诱导作用（乙醇、苯巴比妥、含雌激素避孕药）,轻度增高，停药后降至正常,正常人只见,-GT,2,和,-GT,3,，重症肝胆疾病和肝癌时常有,-GT,1,出现，乙醇性肝坏死和胆总管结石时常有,-GT,2,增加，胰腺炎时,-GT,2,也增加。,-GT,4,与胆红素增高密切相关。,（三）临床意义胆道疾病（胆石症、胆道炎症、肝外梗阻）明显增高,128,三、肌酸激酶及其同工酶,三、肌酸激酶及其同工酶,129,现用名,肌酸激酶,英文名,CK,曾用名,肌酸磷酸激酶,CPK,器官含量多少顺序,骨骼肌、心肌、脑,同工酶,CK-BB（CK,1,）、CK-MB（CK,2,）、CK-MM（CK,3,）、线粒体CK（CK-Mt）,细胞内定位,细胞质、线粒体,亚型,CK-MM,1,、CK-MM,2,、CK-MM,3,、CK-MB,1,、CK-MB,2,、CK-BB（氧化型、中间型、还原型）,（一）生物化学特征,现用名肌酸激酶英文名CK曾用名肌酸磷酸激酶器官含量多少顺序骨,130,（二）测定方法,磷酸肌酸+ ADP,CK,pH6.5,肌酸+ ATP,葡萄糖 +,HK,6-磷酸葡萄糖 + ADP,+ NADP,+,G6PD,6-磷酸葡萄糖酸盐 + NADPH + H,+,340nm处测定NADPH生成速率而计算CK活性浓度,CK同工酶测定多用电泳法和免疫抑制法，现条件好的地方采用免疫化学方法测CK-MB的质量。CK同工酶亚型多用琼脂糖凝胶高压电泳或等电聚焦电泳。,（二）测定方法磷酸肌酸+ ADPCKpH6.5肌酸+ ATP,131,（三）临床意义,CK、CK同工酶,：心肌、骨骼肌、脑疾患的诊断和鉴别诊断及预后判断。AMI在梗死后38h即升高，1024h达峰值，34d恢复正常。全身性疾病（如肌肉疾病）时可引起CK的极度升高（3000U/L），心肌炎、皮肌炎时可升高，但神经疾病引起的肌萎缩时CK一般正常，新生儿窒息、脑梗塞等引起脑组织损伤时可见升高。,同工酶亚型,：对早期AMI的检出较同工酶更为敏感，但由于分析方法的准确性稍差，且诊断AMI有更好的标志物如肌钙蛋白等，使用受到限制。,（三）临床意义CK、CK同工酶：心肌、骨骼肌、脑疾患的诊断和,132,四、乳酸脱氢酶及其同工酶,L-乳酸 + NAD,+,pH 8.89.8,pH 7.47.8,丙酮酸 + NADH + H,+,四、乳酸脱氢酶及其同工酶L-乳酸 + NAD+pH 8.8,133,现用名,乳酸脱氢酶,英文名,LD或LDH,曾用名,器官含量多少顺序,肝、心肌、肾、肌肉、红细胞,同工酶,LD,1,、LD,2,、LD,3,、LD,4,、LD,5,同工酶的组织特异性,心肌、红细胞（ LD,1,，LD总活性的50%以上）、横纹肌、肝脏（LD,5,），脾、肺（ LD,3,）,（一）生物化学特征,现用名乳酸脱氢酶英文名LD或LDH曾用名器官含量多少顺序肝、,134,-羟丁酸脱氢酶（-HBD）,LD是由M和H两种理化性质、催化功能和免疫反应性均不同的亚基按不同比例组成的四聚体，不同方法测出LD结果差异很大。,-HBD是用-羟丁酸作底物，测定LD中H亚基的活性（主要为LD,1,和LD,2,之和），由于是催化,-羟丁酸脱氢，故称为-羟丁酸脱氢酶。,用-羟丁酸作底物测定的-HBD活性并不等于以乳酸为底物测定的LD,1,和LD,2,活性之和。,-HBD并不是一种独特的酶，而是LD的H亚基作用于另一底物的反映，以心、肾和红细胞的含量最高。,-羟丁酸脱氢酶（-HBD）LD是由M和H两种理化性质、催,135,（二）测定方法,L-乳酸 + NAD,+,pH 8.89.8,pH 7.47.8,丙酮酸 + NADH + H,+,以丙酮酸为底物（反应方向P,L）为逆向反应（称LD-P法）；,以乳,酸为底物（反应方向LP）为正向反应（称LD-L法），逆向速率比正向快，但由于NAD,+,价格明显低于NADH，我同多采用LD-L法。,LD同工酶多采用电泳法、免疫沉淀法、免疫抑制法。以琼脂糖凝胶电泳最常用，成人：LD,2,LD,1,LD,3,LD,4,LD,5,，部分儿童：LD,1,LD,2,。,（二）测定方法L-乳酸 + NAD+pH 8.89.8pH,136,（三）临床意义,总酶活性,AMI,显著升高5ULN，梗死818h升高，48144h达峰值，510d恢复正常，与其他酶相比升高最迟，最后恢复正常，特异性较差，诊断亚急性心肌梗死有一定价值。,运动、肾综、肝病、胆道炎、甲减,轻度升高,3ULN,肝炎、休克、白血病、溶贫、晚期恶性肿瘤,中度或显著升高,渗出液,胸水LD/血清LD0.6，腹水LD/血清LD0.4,漏出液,与上相反,（三）临床意义总酶活性AMI显著升高5ULN，梗死81,137,同工酶,心肌梗死、心肌炎,LD,1,和LD,2,升高为主，AMI时LD,1,/LD,2,1,骨骼肌、肝细胞损伤,LD,5,LD,4,急性肝炎,LD,1,和LD,2,相对下降， LD,5,升高,慢性肝炎,LD,5,升高，LD,1,LD,3,肺、胰、脾、淋巴结坏死和炎症及各种恶性疾病,LD,2,、LD,3,、LD,4,升高,溶贫、镰贫、地贫、阵睡,LD,1,和LD,2,升高，LD,2,LD,