实验室十三琼扩实验-禽类实验室诊断技术ppt课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,琼脂扩散试验,琼脂扩散试验,原理,抗原、抗体在含有电解质的琼脂凝胶中可以向四周自由扩散，当抗原、抗体扩散至适当部位相遇时，则出现肉眼可见的沉淀线，这就是抗原、抗体的特异性结合物。,原理,反 应 原 理,反 应 原 理,在生产中的应用,1,、用于诊断疾病 即用已知的抗体测定未知的抗原，如马立克病的诊断。,2,、测定血清中的抗体效价 即用已知的抗原测定未知的抗体，如雏鸡体内法氏囊母源抗体的检测。,在生产中的应用1、用于诊断疾病 即用已知的抗体测定未知,鸡马立克氏病实验室诊断,鸡马立克氏病实验室诊断,一、实验器材,打孔器、,16#,针头、打孔纸样、记号笔、酒精灯、微量移液器、湿盒、培养箱、优质琼脂粉、氯化钠、蒸馏水、已知鸡马立克氏病阳性血清、已知鸡马立克氏病标准抗原、被检鸡的羽囊等。,一、实验器材 打孔器、16#针头、打孔纸样、记号笔、酒精灯、,二、实验步骤,1,、 琼脂糖平板制备,11.5g,琼脂粉,+8gNacl+100ml,蒸溜水，加热溶化；倒平皿，厚度为,34mm,；平置，在室温下凝固冷却（夏天适当增加琼脂糖浓度，但不能超过,1.5%,）。,二、实验步骤 1、 琼脂糖平板制备 11.5g琼脂,二、实验步骤,2,、打孔,将琼脂板放在预先印好的梅花形图案上，用打孔器按图形准确位置打孔，孔径为,34mm,，孔距均为,3mm,。然后用,16#,针头挑出孔内琼脂，并用记号笔在周围孔上标记,1,、,2,、,3,、,4,、,5,、,6,。,二、实验步骤2、打孔 将琼脂板放在预先印好的梅花形图案,实验室十三琼扩实验-禽类实验室诊断技术ppt课件,二、实验步骤,3,、,封底 将平皿底部在酒精灯火焰上微微加热，使孔底琼脂糖稍微融化。,二、实验步骤3、封底 将平皿底部在酒精灯火焰上微微加热，使,二、实验步骤,4,、加样,向中央孔加马立克阳性血清，向周边,1,、,4,孔加标准马立克琼扩抗原作对照，向周边,2,、,3,、,5,、,6,孔加待检羽髓浸液。,注：羽髓浸液制备：,选拔受检鸡含羽囊丰满的羽毛,10,根以上，将带有羽髓的毛根剪集于小试管内，每管加入,0.5,毫升生理盐水，用玻璃棒将羽毛根压集于管底，以适当压力转动玻璃棒,10,多次，待浸提液混浊后，用吸管将其移入外周孔内。,二、实验步骤4、加样 向中央孔加马立克阳性血清，向周,二、实验步骤,5,、放入湿盒,将琼脂平皿置湿盒内，于,37,温箱，扩散,48,72h,后观察结果。,二、实验步骤5、放入湿盒 将琼脂平皿置湿盒内，于37温,三、结果判定,1,阳性：如果中央阳性血清孔与周边羽髓孔之间出现一条清晰致密沉淀线，即为阳性。一般每只受检鸡采,6,根血羽，其中若有一根血羽出现沉淀反应，则制定该鸡为阳性鸡。,2,阴性：当中央阳性血清孔与周边羽髓孔之间不形成沉淀线者，则判为阴性。,三、结果判定,鸡传染性腔上囊病血清抗体效价检测,鸡传染性腔上囊病血清抗体效价检测,一、实验器材,打孔器、,16#,针头、打孔纸样、记号笔、酒精灯、微量移液器、湿盒、培养箱、琼脂糖平板、,已知法氏囊标准抗原、待检血清,、,生理盐水。,一、实验器材 打孔器、16#针头、打孔纸样、记号笔、酒精灯、,二、实验步骤,1,、 琼脂糖平板制备,2.,打孔,3.,封底,4.,加样,中央孔滴加法氏囊标准琼扩抗原，周边第,1,孔加阳性血清作对照，第,2,、,3,、,4,、,5,、,6,孔滴加不同稀释倍数的血清（不稀释、,2,倍、,4,倍、,8,倍、,16,倍稀释）。,二、实验步骤1、 琼脂糖平板制备,三、结果判定,出现沉淀线的血清最大稀释倍数，即为该血清的抗体效价。,三、结果判定 出现沉淀线的血清最大稀释倍数，即为该血清的抗体,四、注意事项,1,、琼脂糖平板应放在,4,冰箱中充分冷却后再打孔为佳。,2,、琼脂用打孔器打孔后，一定要用对孔的底部进行封口，以防孔内物质渗漏。,3,、向孔中滴加样品时，均以加满而不溢出为度，否则会影响反应效果。,四、注意事项,五、实验作业,1,、写出琼扩试验的操作方法及结果判断。,2,、琼脂扩散试验的应用价值如何？操作时应注意哪些事项？,五、实验作业1、写出琼扩试验的操作方法及结果判断。,