细胞工程主要技术

细胞工程主要技术细胞工程主要技术2动物物细胞工程主要技胞工程主要技术l第一章第一章动物物细胞胞转化（化（诱变）l第二章第二章细胞融合技胞融合技术l第三章第三章哺乳哺乳动物克隆技物克隆技术l第四章第四章哺乳哺乳动物胚胎培养与移植物胚胎培养与移植l利用利用杂交瘤制交瘤制备单克隆抗体技克隆抗体技术l干干细胞技胞技术3第一章第一章 动物细胞的转化（诱变）动物细胞的转化（诱变）通通通通过过过过细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养，世世世世界界界界上上上上已已已已建建建建立立立立了了了了大大大大量量量量细细细细胞胞胞胞株株株株，我我我我国国国国业业业业已已已已建立了上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。建立了上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。建立了上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。建立了上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。正正正正常常常常组组组组织织织织的的的的初初初初级级级级培培培培养养养养物物物物，在在在在传传传传代代代代培培培培养养养养过过过过程程程程中中中中，细细细细胞胞胞胞的的的的寿寿寿寿命命命命有有有有一一一一定定定定的的的的限限限限度度度度，只只只只有有有有癌癌癌癌细细细细胞胞胞胞和和和和发发发发生生生生转转转转化化化化的的的的细细细细胞胞胞胞才才才才能能能能无无无无限限限限增增增增殖下去。殖下去。殖下去。殖下去。所所所所谓谓谓谓转化即即即即是是是是指指正正常常细细胞胞在在某某种种因因子子的的作作用用下下发发生生突突变变而成为具有癌特性的细胞。而成为具有癌特性的细胞。4建建立立无无限限细细胞胞系系的的关关键键就就是是要要千千方方百百计计地地使使培培养养细细胞胞发发生生转转化化，即即用用某某种种因因子子刺刺激激正常细胞发生突变而具有癌特性。正常细胞发生突变而具有癌特性。目目前前，使使正正常常培培养养细细胞胞发发生生转转化化的的刺刺激激因因子子主主要要有有三三大大类类：物物理理因因子子、化化学学因因子子和和生物因子。生物因子。5（一）物理因子（一）物理因子能使培养细胞发生转化的能使培养细胞发生转化的能使培养细胞发生转化的能使培养细胞发生转化的物理因子主要是指物理因子主要是指物理因子主要是指物理因子主要是指一些电离辐射：一些电离辐射：一些电离辐射：一些电离辐射：放射性同位素的射线：放射性同位素的射线：放射性同位素的射线：放射性同位素的射线：60606060CoCoCoCo、14141414C C C C、131131131131I I I I、32323232P P P P、3 3 3 3H H H HX X 射线射线射线射线紫外线照射紫外线照射紫外线照射紫外线照射物物理理致致癌癌剂剂6（二）化学因子（二）化学因子对细胞具有转化作用的对细胞具有转化作用的对细胞具有转化作用的对细胞具有转化作用的化学因子达数千种之多，化学因子达数千种之多，化学因子达数千种之多，化学因子达数千种之多，其中有无机物，也有有机物。其中有无机物，也有有机物。其中有无机物，也有有机物。其中有无机物，也有有机物。无机物：砷砷砷砷、石石石石棉棉棉棉、铬铬铬铬化化化化合合合合物物物物、镍镍镍镍化化化化合合合合物物物物、镉镉镉镉化化化化合合合合物物物物有机物：苯苯苯苯、联联联联苯苯苯苯胺胺胺胺、杂杂杂杂环环环环烃烃烃烃、煤煤煤煤焦焦焦焦油油油油、黄黄黄黄曲曲曲曲霉霉霉霉素素素素(aflatoxin)(aflatoxin)、亚硝胺、烟碱、亚硝胺、烟碱、亚硝胺、烟碱、亚硝胺、烟碱(nicotine)(nicotine)化化学学致致癌癌剂剂7（三）生物因子（三）生物因子对对对对细细细细胞胞胞胞具具具具有有有有转转转转化化化化作作作作用用用用的的的的生生生生物物物物因因因因子子子子为为为为肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤病病病病毒毒毒毒(tumor(tumor virus)virus)，又又又又 称称称称 致致致致 癌癌癌癌 病病病病 毒毒毒毒(oncogenic(oncogenic virus)virus)。现现现现已已已已发发发发现现现现有有有有许许许许多多多多种种种种病病病病毒毒毒毒可可可可引引引引起起起起动动动动物物物物或或或或植植植植物物物物发发发发生生生生肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤。肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤病病病病毒毒毒毒中中中中有有有有DNADNA病病病病毒毒毒毒，也也也也有有有有RNARNA病病病病毒。毒。毒。毒。8RousRous肉瘤病毒(Rous(Rous sarcoma sarcoma virus)virus)：一一一一种种种种RNARNA病病病病毒毒毒毒，其其其其基基基基因因因因组组组组含含含含有有有有一一一一个个个个癌癌癌癌基基基基因因因因srcsrc，编编编编码码码码产产产产物物物物为为为为具具具具有有有有蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质激激激激酶酶酶酶活活活活性性性性的的的的pp60pp60srcsrc蛋蛋蛋蛋白白白白，可可可可使使使使许许许许多蛋白质磷酸化，通过级联反应，诱发细胞癌变。多蛋白质磷酸化，通过级联反应，诱发细胞癌变。多蛋白质磷酸化，通过级联反应，诱发细胞癌变。多蛋白质磷酸化，通过级联反应，诱发细胞癌变。pp60pp60srcsrc蛋蛋蛋蛋白白白白是是是是一一一一种种种种膜膜膜膜蛋蛋蛋蛋白白白白，结结结结合合合合在在在在质质质质膜膜膜膜的的的的内内内内表表表表面面面面，它它它它可可可可催催催催化化化化磷磷磷磷酸酸酸酸根根根根转转转转移移移移到到到到一一一一些些些些蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质的的的的酪酪酪酪氨氨氨氨酸酸酸酸残残残残基基基基上上上上，使使使使磷磷磷磷酸酸酸酸化化化化酪酪酪酪氨氨氨氨酸酸酸酸在在在在细细细细胞胞胞胞中中中中的的的的含含含含量量量量提提提提高高高高了了了了1010倍。倍。倍。倍。9(Src(Src蛋白蛋白蛋白蛋白,Tyr,Tyr激酶激酶激酶激酶)P PTyrTyr蛋白质磷酸化蛋白质磷酸化蛋白质磷酸化蛋白质磷酸化细胞癌变细胞癌变无活性无活性无活性无活性pp60pp60srcsrcRSV病毒中病毒中v-src基因的致癌机制图解基因的致癌机制图解质膜质膜质膜质膜跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白细胞外配体细胞外配体细胞外配体细胞外配体活性活性活性活性p pp60p60srcsrc质膜质膜质膜质膜跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白磷酸化酪氨酸两种作用：磷酸化酪氨酸两种作用：一是使细胞的正常调节一是使细胞的正常调节机制失调机制失调,细胞增殖失去细胞增殖失去控制；控制；二是使细胞的粘着性丧二是使细胞的粘着性丧失失,易发生扩散和转移。易发生扩散和转移。10虽虽虽虽然然然然动动动动物物物物细细细细胞胞胞胞在在在在培培培培养养养养皿皿皿皿、培培培培养养养养瓶瓶瓶瓶、培培培培养养养养板板板板中中中中均均均均可可可可生生生生长长长长，但但但但在在在在体体体体外外外外利利利利用用用用培培培培养养养养罐罐罐罐进进进进行行行行大大大大量量量量培培培培养养养养就就就就不不不不象象象象培培培培养养养养细细细细菌菌菌菌和酵母那样容易，是动物细胞培养的技术难题之一。和酵母那样容易，是动物细胞培养的技术难题之一。和酵母那样容易，是动物细胞培养的技术难题之一。和酵母那样容易，是动物细胞培养的技术难题之一。目目目目前前前前这这这这一一一一问问问问题题题题已已已已经经经经解解解解决决决决，人人人人们们们们在在在在微微微微生生生生物物物物培培培培养养养养用用用用的的的的发发发发酵酵酵酵罐罐罐罐的的的的基基基基础础础础上上上上研研研研制制制制出出出出一一一一种种种种用用用用于于于于哺哺哺哺乳乳乳乳动动动动物物物物细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养的的的的反反反反应应应应罐罐罐罐，用用用用以以以以大大大大量量量量培培培培养养养养悬悬悬悬浮浮浮浮细细细细胞胞胞胞（1 1个个个个振振振振动动动动搅搅搅搅拌拌拌拌器器器器：可可可可以以以以使使使使细胞得到充足的营养和氧气）。细胞得到充足的营养和氧气）。细胞得到充足的营养和氧气）。细胞得到充足的营养和氧气）。转化动物细胞的规模化培养转化动物细胞的规模化培养11细细细细 胞胞胞胞 融融融融 合合合合(Cell(Cell fusion)fusion)又又又又 称称称称 为为为为 细细细细 胞胞胞胞 杂杂杂杂 交交交交(Cell(Cell hybridization)hybridization)，现现现现多多多多统统统统称称称称为为为为细细细细胞胞胞胞杂杂杂杂交交交交，是是是是指指指指2 2个个个个或或或或2 2个个个个以以以以上的细胞融合成上的细胞融合成上的细胞融合成上的细胞融合成1 1个细胞的过程个细胞的过程个细胞的过程个细胞的过程。人人人人工工工工的的的的细细细细胞胞胞胞融融融融合合合合开开开开始始始始于于于于1950s1950s，此此此此后后后后作作作作为为为为一一一一门门门门新新新新兴兴兴兴技技技技术术术术发发发发展展展展非非非非常常常常快快快快，应应应应用用用用范范范范围围围围也也也也极极极极为为为为广广广广泛泛泛泛，不不不不仅仅仅仅同同同同种种种种类类类类细细细细胞胞胞胞间间间间可以融合，种间远缘细胞也能融合。可以融合，种间远缘细胞也能融合。可以融合，种间远缘细胞也能融合。可以融合，种间远缘细胞也能融合。细胞工程的发展是建立在细胞融合基础上的细胞工程的发展是建立在细胞融合基础上的细胞工程的发展是建立在细胞融合基础上的细胞工程的发展是建立在细胞融合基础上的。第二章第二章 细胞融合技术细胞融合技术12细细细细胞胞胞胞融融融融合合合合不不不不仅仅仅仅可可可可用用用用于于于于生生生生物物物物学学学学的的的的基基基基础础础础理理理理论论论论研研研研究究究究，而而而而且且且且在在在在生生生生产产产产实实实实践践践践上上上上还还还还有有有有重重重重要要要要的的的的应应应应用用用用价价价价值值值值，如如如如目目目目前前前前在在在在单单单单克克克克隆隆隆隆抗抗抗抗体体体体的的的的制制制制备备备备、核核核核质质质质关关关关系系系系、体体体体细细细细胞胞胞胞的的的的遗遗遗遗传传传传和和和和发发发发育育育育、新新新新品品品品种种种种的的的的培培培培养养养养、免免免免疫疫疫疫作作作作用用用用、疾疾疾疾病病病病的的的的治治治治疗疗疗疗和和和和性性性性状状状状的的的的改改改改良、潜伏病毒的研究等，已取得了显著的成绩。良、潜伏病毒的研究等，已取得了显著的成绩。良、潜伏病毒的研究等，已取得了显著的成绩。良、潜伏病毒的研究等，已取得了显著的成绩。其中最突出的就是在制备其中最突出的就是在制备其中最突出的就是在制备其中最突出的就是在制备单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体方面的应用！方面的应用！方面的应用！方面的应用！13根根根根据据据据所所所所用用用用促促促促融融融融剂剂剂剂的的的的不不不不同同同同，细细细细胞胞胞胞融融融融合合合合技技技技术术术术主主主主要要要要可可可可分为四大类：分为四大类：分为四大类：分为四大类：病毒介导的细胞融合技术病毒介导的细胞融合技术病毒介导的细胞融合技术病毒介导的细胞融合技术化学介导的细胞融合技术化学介导的细胞融合技术化学介导的细胞融合技术化学介导的细胞融合技术电击介导的细胞融合技术电击介导的细胞融合技术电击介导的细胞融合技术电击介导的细胞融合技术激光介导的细胞融合技术激光介导的细胞融合技术激光介导的细胞融合技术激光介导的细胞融合技术14一、病毒介导的细胞融合技术一、病毒介导的细胞融合技术vv促促促促融融融融剂剂剂剂：麻麻麻麻疹疹疹疹病病病病毒毒毒毒、副副副副流流流流感感感感病病病病毒毒毒毒、新新新新城城城城鸡鸡鸡鸡瘟瘟瘟瘟病病病病毒毒毒毒、仙仙仙仙台台台台病病病病毒毒毒毒以以以以及及及及其其其其他他他他一一一一些些些些副副副副粘粘粘粘液液液液科科科科的病毒的病毒的病毒的病毒vv基基基基本本本本原原原原理理理理：病病病病毒毒毒毒被被被被膜膜膜膜中中中中的的的的糖糖糖糖蛋蛋蛋蛋白白白白含含含含有有有有融融融融合合合合蛋蛋蛋蛋白白白白(fusion(fusion protein)protein),既既既既可可可可介介介介导导导导病病病病毒毒毒毒同同同同宿宿宿宿主主主主细细细细胞融合胞融合胞融合胞融合,又可诱导细胞与细胞融合。又可诱导细胞与细胞融合。又可诱导细胞与细胞融合。又可诱导细胞与细胞融合。操作繁琐；操作繁琐；操作繁琐；操作繁琐；促融效果较好促融效果较好促融效果较好促融效果较好15融融融融合合合合蛋蛋蛋蛋白白白白是是是是副副副副粘粘粘粘病病病病毒毒毒毒的的的的两两两两种种种种包包包包膜膜膜膜糖糖糖糖蛋蛋蛋蛋白白白白之之之之一一一一，其其其其主主主主要要要要功功功功能能能能是是是是引引引引起起起起病病病病毒毒毒毒包包包包膜膜膜膜与与与与靶靶靶靶细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜或或或或被被被被感感感感染染染染的靶细胞膜之间发生融合。的靶细胞膜之间发生融合。的靶细胞膜之间发生融合。的靶细胞膜之间发生融合。细细细细胞胞胞胞融融融融合合合合过过过过程程程程需需需需要要要要另另另另一一一一种种种种包包包包膜膜膜膜糖糖糖糖蛋蛋蛋蛋白白白白血血血血凝凝凝凝素素素素-神神神神经经经经氨氨氨氨酸酸酸酸酶酶酶酶的的的的协协协协助助助助。融融融融合合合合蛋蛋蛋蛋白白白白需需需需要要要要和和和和同同同同源源源源性性性性血血血血凝凝凝凝素素素素-神神神神经经经经氨氨氨氨酸酸酸酸酶酶酶酶共共共共同同同同表表表表达达达达才才才才能能能能显显显显示示示示出出出出融融融融合合合合细胞的活性。细胞的活性。细胞的活性。细胞的活性。16病毒病毒病毒病毒增殖增殖增殖增殖紫外线灭活紫外线灭活紫外线灭活紫外线灭活稀释稀释稀释稀释细胞悬液细胞悬液细胞悬液细胞悬液细胞融合细胞融合细胞融合细胞融合诱导诱导诱导诱导基本操作流程基本操作流程筛选筛选筛选筛选17二、化学介导的细胞融合技术二、化学介导的细胞融合技术聚乙二醇聚乙二醇聚乙二醇聚乙二醇(polyethyleneglycol(polyethyleneglycol，PEGPEG)vv促融剂：促融剂：促融剂：促融剂：vv基基基基本本本本原原原原理理理理：一一一一般般般般认认认认为为为为，PEGPEG改改改改变变变变各各各各类类类类细细细细胞胞胞胞的的的的膜膜膜膜结结结结构构构构，使使使使两两两两细细细细胞胞胞胞相相相相互互互互接接接接触触触触部部部部位位位位的的的的膜膜膜膜脂脂脂脂双双双双层层层层中中中中磷磷磷磷脂脂脂脂分分分分子子子子发发发发生生生生疏疏疏疏散散散散、进进进进而而而而使使使使其其其其结结结结构构构构发发发发生生生生重重重重排排排排，再再再再加加加加上上上上膜膜膜膜脂脂脂脂双双双双层层层层的的的的相相相相互互互互亲亲亲亲合合合合以以以以及及及及彼彼彼彼此此此此间间间间表表表表面面面面张张张张力力力力的的的的作作作作用用用用，引引引引起起起起相相相相临临临临的的的的重重重重排排排排质质质质膜膜膜膜在在在在修修修修复复复复时时时时相相相相互互互互合合合合并并并并在在在在一一一一起起起起,使使使使两两两两细细细细胞胞胞胞的的的的胞胞胞胞质质质质沟通沟通沟通沟通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。从而造成相互接触的细胞之间发生融合。从而造成相互接触的细胞之间发生融合。从而造成相互接触的细胞之间发生融合。操作简便；操作简便；操作简便；操作简便；促融效果好促融效果好促融效果好促融效果好18诱导诱导基本操作流程基本操作流程A A细胞细胞细胞细胞融合细胞融合细胞B B细胞细胞细胞细胞A/BA/B细胞混合物细胞混合物细胞混合物细胞混合物按一定数量比例混合按一定数量比例混合与细胞混合物充分混匀与细胞混合物充分混匀与细胞混合物充分混匀与细胞混合物充分混匀一定温度、一定时间一定温度、一定时间一定温度、一定时间一定温度、一定时间计数计数筛选筛选筛选筛选PEG配配制制：加加热热溶溶化化，按按体体积积比比加加入入预预热热至至50oC的的无无血血清清培培养养基基后后混混匀匀，降降温温至至使用温度待用使用温度待用PEGPEG配制配制配制配制PEG(MW1000-PEG(MW1000-4000,4060%)4000,4060%)19促促促促融融融融效效效效果果果果与与与与PEGPEG的的的的分分分分子子子子量量量量及及及及其其其其浓浓浓浓度度度度成成成成正正正正比比比比；但但但但PEGPEG分分分分子子子子量量量量越越越越大大大大、浓浓浓浓度度度度越越越越高高高高,对对对对细细细细胞胞胞胞的的的的毒毒毒毒性性性性也也也也就就就就越越越越大大大大（在在在在实实实实验验验验时时时时常常常常常常常常采采采采用用用用的的的的分分分分子子子子量量量量1000400010004000的的的的PEGPEG，浓度一般为，浓度一般为，浓度一般为，浓度一般为4060%4060%）PEGPEG介导细胞融合效果的影响因素：介导细胞融合效果的影响因素：介导细胞融合效果的影响因素：介导细胞融合效果的影响因素：1.PEG1.PEG1.PEG1.PEG分子量与浓度分子量与浓度分子量与浓度分子量与浓度:融融融融合合合合效效效效果果果果与与与与温温温温度度度度成成成成正正正正比比比比（质质质质膜膜膜膜流流流流动动动动性性性性与与与与温温温温度度度度成成成成正正正正比比比比），为为为为获获获获得得得得最最最最佳佳佳佳融融融融合合合合效效效效果果果果,在在在在细细细细胞胞胞胞可可可可能能能能承承承承受受受受的的的的温温温温度度度度范范范范围围围围内内内内可可可可适适适适当当当当提提提提高高高高处处处处理理理理的的的的温温温温度度度度（哺乳动物细胞，一般采用（哺乳动物细胞，一般采用（哺乳动物细胞，一般采用（哺乳动物细胞，一般采用38403840）2.PEG2.PEG2.PEG2.PEG的的的的pHpHpHpH值值值值:pH8.08.2pH8.08.2：融合效果较好：融合效果较好：融合效果较好：融合效果较好3.PEG3.PEG3.PEG3.PEG作用时间作用时间作用时间作用时间:处处处处理理理理时时时时间间间间越越越越长长长长，融融融融合合合合效效效效果果果果越越越越好好好好,但但但但对对对对细细细细胞胞胞胞的的的的毒毒毒毒害害害害也也也也就就就就越越越越大大大大（一一一一般般般般将将将将处处处处理理理理时时时时间间间间限限限限制制制制在在在在1min1min之内）之内）之内）之内）4.4.4.4.融合温度融合温度融合温度融合温度:20三、电击介导的细胞融合技术三、电击介导的细胞融合技术操作简便、快速操作简便、快速操作简便、快速操作简便、快速/促促促促融效果好融效果好融效果好融效果好/高回收率高回收率高回收率高回收率/对细胞毒性小对细胞毒性小对细胞毒性小对细胞毒性小原原理理：游游游游离离离离动动动动物物物物细细细细胞胞胞胞或或或或去去去去壁壁壁壁原原原原生生生生质质质质体体体体，在在在在电电电电融融融融合合合合室室室室中中中中，在在在在高高高高频频频频交交交交流流流流电电电电场场场场的的的的作作作作用用用用下下下下，细细细细胞胞胞胞被被被被极极极极化化化化成成成成偶偶偶偶极极极极子子子子，造造造造成成成成细细细细胞胞胞胞间间间间相相相相互互互互连连连连接接接接成成成成点点点点接接接接触触触触状状状状态态态态；然然然然后后后后施施施施加加加加方方方方波波波波脉脉脉脉冲冲冲冲予予予予以以以以刺刺刺刺激激激激，由由由由于于于于电电电电脉脉脉脉冲冲冲冲的的的的瞬瞬瞬瞬间间间间作作作作用用用用，可可可可击击击击破破破破两两两两细细细细胞胞胞胞接接接接触触触触点点点点处处处处的的的的质质质质膜膜膜膜，此此此此时时时时质质质质膜膜膜膜的的的的脂脂脂脂类类类类分分分分子子子子发发发发生生生生重重重重组组组组，同同同同时时时时由由由由于于于于细细细细胞胞胞胞表表表表面面面面的的的的张张张张力力力力作作作作用，两个点接触细胞逐步发生细胞融合。用，两个点接触细胞逐步发生细胞融合。用，两个点接触细胞逐步发生细胞融合。用，两个点接触细胞逐步发生细胞融合。BioRadBioRad电融合仪电融合仪电融合仪电融合仪21动物细胞动物细胞动物细胞动物细胞0.6M0.6M甘露醇，甘露醇，甘露醇，甘露醇，0.5mMCaC10.5mMCaC12 22H2H2 20 080-300V/cm,80-300V/cm,0.5-10.5-1兆赫兹兆赫兹兆赫兹兆赫兹,30-9030-90秒秒秒秒0.5-1.5KV/cm,0.5-1.5KV/cm,幅度脉宽幅度脉宽幅度脉宽幅度脉宽2525微秒微秒微秒微秒融合细胞融合细胞融合细胞融合细胞诱导诱导诱导诱导基本操作流程基本操作流程筛选筛选筛选筛选电击液电击液电击液电击液悬浮于悬浮于悬浮于悬浮于融合小室的电极间融合小室的电极间融合小室的电极间融合小室的电极间加入至加入至加入至加入至细胞排列成串细胞排列成串细胞排列成串细胞排列成串电泳效应电泳效应电泳效应电泳效应正弦交变电场正弦交变电场正弦交变电场正弦交变电场施加施加施加施加2-32-3个脉冲电场个脉冲电场个脉冲电场个脉冲电场施加施加施加施加22原原理理：贴贴贴贴在在在在一一一一起起起起的的的的两两两两个个个个细细细细胞胞胞胞，用用用用高高高高峰峰峰峰值值值值功功功功率率率率密密密密度度度度激激激激光光光光对对对对细细细细胞胞胞胞接接接接触触触触处处处处的的的的质质质质膜膜膜膜进进进进行行行行辐辐辐辐照照照照，质质质质膜膜膜膜发发发发生生生生光光光光击击击击穿穿穿穿，可可可可产产产产生生生生微微微微米米米米量量量量级级级级的的的的微微微微孔孔孔孔，因因因因质质质质膜膜膜膜上上上上的的的的微微微微孔孔孔孔可可可可逆逆逆逆，质质质质膜膜膜膜分分分分子子子子在在在在重重重重组组组组过过过过程程程程中中中中借借借借助助助助细细细细胞胞胞胞连连连连接接接接处处处处小小小小孔孔孔孔的的的的很很很很高高高高的的的的表表表表面面面面曲曲曲曲率而处于高张力状态，导致细胞发生融合。率而处于高张力状态，导致细胞发生融合。率而处于高张力状态，导致细胞发生融合。率而处于高张力状态，导致细胞发生融合。四、激光细胞融合技术四、激光细胞融合技术23激光细胞融合法与其它化学物理方法相比较具有许多优点：激光细胞融合法与其它化学物理方法相比较具有许多优点：激光细胞融合法与其它化学物理方法相比较具有许多优点：激光细胞融合法与其它化学物理方法相比较具有许多优点：（1 1 1 1）能选择任意两个细胞之间进行融合；）能选择任意两个细胞之间进行融合；）能选择任意两个细胞之间进行融合；）能选择任意两个细胞之间进行融合；（2 2 2 2）因因因因仅仅仅仅在在在在两两两两个个个个细细细细胞胞胞胞的的的的接接接接触触触触点点点点照照照照射射射射激激激激光光光光，故故故故作作作作用用用用于细胞的应力和障碍小于细胞的应力和障碍小于细胞的应力和障碍小于细胞的应力和障碍小;（3 3 3 3）可进行非接触、安全且远距离的无菌操作；）可进行非接触、安全且远距离的无菌操作；）可进行非接触、安全且远距离的无菌操作；）可进行非接触、安全且远距离的无菌操作；（4 4 4 4）能适时观察融合过程。）能适时观察融合过程。）能适时观察融合过程。）能适时观察融合过程。24第三章第三章第三章第三章 哺乳动物克隆技术哺乳动物克隆技术哺乳动物克隆技术哺乳动物克隆技术（细胞核移植技术）（细胞核移植技术）（细胞核移植技术）（细胞核移植技术）25随随随随着着着着19971997年年年年2 2月月月月NatureNature杂杂杂杂志志志志报报报报道道道道英英英英国国国国RoslinRoslin研研研研究究究究所所所所I.WilmutI.WilmutI.WilmutI.Wilmut等等等等人人人人创创创创造造造造的的的的克克克克隆隆隆隆羊羊羊羊多多多多莉莉莉莉(Dolly)(Dolly)诞诞诞诞生生生生，生物工程掀开了新的一页。生物工程掀开了新的一页。生物工程掀开了新的一页。生物工程掀开了新的一页。克克克克隆隆隆隆(clone)(clone)一一一一词词词词原原原原意意意意为为为为无无无无性性性性繁繁繁繁殖殖殖殖系系系系，在在在在体体体体外外外外培培培培养养养养的的的的细细细细胞胞胞胞中中中中早早早早有有有有使使使使用用用用，细细细细胞胞胞胞克克克克隆隆隆隆是是是是指指指指由由由由一一一一个个个个细细细细胞胞胞胞经经经经细细细细胞胞胞胞分分分分裂裂裂裂而而而而产产产产生生生生出出出出的的的的一一一一群群群群细细细细胞胞胞胞，而而而而动动动动物物物物克克克克隆隆隆隆是是是是指指指指由由由由一一一一个个个个动动动动物物物物经经经经无无无无性性性性繁繁繁繁殖殖殖殖而而而而产产产产生生生生的的的的遗遗遗遗传传传传性性性性状状状状完完完完全全全全相相相相同同同同的的的的后代个体。后代个体。后代个体。后代个体。26克克克克隆隆隆隆羊羊羊羊“多多多多莉莉莉莉”诞诞诞诞生生生生后后后后，克克克克隆隆隆隆技技技技术术术术研研研研究究究究立立立立即即即即成成成成为为为为世世世世界界界界各各各各国国国国生生生生物物物物学学学学家家家家竞竞竞竞相相相相开开开开展展展展的的的的生生生生物物物物学学学学高高高高新新新新技技技技术研究。术研究。术研究。术研究。克克克克隆隆隆隆技技技技术术术术之之之之所所所所以以以以一一一一经经经经产产产产生生生生立立立立即即即即引引引引起起起起高高高高度度度度重重重重视视视视，是是是是因因因因为为为为克克隆隆技技术术不不但但具具有有重重要要的的理理论论意意义义而而且且具具有良好的应用前景有良好的应用前景。为什么要进行动物克隆?例：例：1997年，美国威斯康星州的一个奶牛年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一有一头叫叫卢辛达的奶牛，年辛达的奶牛，年产牛奶牛奶30.8t，创造了世界奶牛造了世界奶牛产奶量最高的奶量最高的纪录；而一而一头普通奶牛的普通奶牛的产奶量年平均水平奶量年平均水平仅为3-4t，如果能用体，如果能用体细胞核移植技胞核移植技术，克隆，克隆高高产奶牛，就可以大大提高牛奶奶牛，就可以大大提高牛奶产量。量。29第一节第一节 哺乳动物克隆的发展历史哺乳动物克隆的发展历史同种胚胎细胞克隆同种胚胎细胞克隆同种体细胞克隆同种体细胞克隆异种体细胞克隆异种体细胞克隆克克克克隆隆隆隆动动动动物物物物技技技技术术术术的的的的发发发发展展展展已已已已经经经经历历历历了了了了6060余余余余年年年年的的的的漫漫漫漫长长长长探探探探索索索索，根根根根据据据据供供供供体体体体细细细细胞胞胞胞核核核核与与与与去去去去核核核核卵卵卵卵细细细细胞胞胞胞的的的的来来来来源源源源可可可可归纳为归纳为归纳为归纳为3 3个标志性的发展阶段个标志性的发展阶段个标志性的发展阶段个标志性的发展阶段。3019381938年年年年,德国科学家德国科学家德国科学家德国科学家SpemannSpemann最早提出克隆设想最早提出克隆设想最早提出克隆设想最早提出克隆设想。19521952年年年年,美美美美国国国国科科科科学学学学家家家家BriggsBriggs和和和和KingKing将将将将发发发发育育育育后后后后期期期期的的的的青青青青蛙胚胎细胞核植入青蛙卵中蛙胚胎细胞核植入青蛙卵中蛙胚胎细胞核植入青蛙卵中蛙胚胎细胞核植入青蛙卵中,没有发育。没有发育。没有发育。没有发育。19651965年年年年,中中中中国国国国科科科科学学学学家家家家童童童童第第第第周周周周完完完完成成成成了了了了金金金金鱼鱼鱼鱼核核核核移移移移植植植植并并并并获获获获得成功得成功得成功得成功。19811981年年年年,IllmenseeIllmensee和和和和HoppeHoppe用用用用小小小小鼠鼠鼠鼠胚胚胚胚胎胎胎胎细细细细胞胞胞胞第第第第一一一一次次次次获得了获得了获得了获得了克隆小鼠克隆小鼠克隆小鼠克隆小鼠，但其实验未能被重复。，但其实验未能被重复。，但其实验未能被重复。，但其实验未能被重复。19841984年年年年,丹丹丹丹麦麦麦麦科科科科学学学学家家家家WilladsenWilladsen用用用用胚胚胚胚胎胎胎胎细细细细胞胞胞胞克克克克隆隆隆隆羊羊羊羊获成功。获成功。获成功。获成功。第一阶段第一阶段 同种胚胎细胞克隆同种胚胎细胞克隆童第周童第周童第周童第周（1902-19791902-1979）童第周等童第周等(1965)将金鱼囊胚细将金鱼囊胚细胞核移植到鳑鮍的去核卵中胞核移植到鳑鮍的去核卵中,获得了少数核质杂种获得了少数核质杂种(nucleo-cytoplasmic hybrid,NCH)幼鱼幼鱼321990199019901990年年年年,中中中中国国国国科科科科学学学学院院院院发发发发育育育育生生生生物物物物学学学学研研研研究究究究所所所所杜杜杜杜淼淼淼淼获获获获得得得得了了了了克克克克隆隆隆隆兔兔兔兔。随随随随后后后后,中中中中国国国国科科科科学学学学家家家家利利利利用用用用胚胚胚胚胎胎胎胎细细细细胞胞胞胞相相相相继克隆成了继克隆成了继克隆成了继克隆成了羊、猪、牛、小鼠羊、猪、牛、小鼠羊、猪、牛、小鼠羊、猪、牛、小鼠等几种动物。等几种动物。等几种动物。等几种动物。1993199319931993年年年年,美美美美国国国国的的的的FirstFirstFirstFirst用用用用牛牛牛牛内内内内细细细细胞胞胞胞团团团团细细细细胞胞胞胞成成成成功功功功地地地地获获获获得了得了得了得了克隆牛克隆牛克隆牛克隆牛。1997199719971997年年年年,中国学者孟励在美国中国学者孟励在美国中国学者孟励在美国中国学者孟励在美国成功获得成功获得成功获得成功获得克隆猴克隆猴克隆猴克隆猴。至此至此至此至此,国内外动物克隆采用的均为国内外动物克隆采用的均为国内外动物克隆采用的均为国内外动物克隆采用的均为胚胎细胞。胚胎细胞。胚胎细胞。胚胎细胞。331997199719971997年，用胚胎细胞获得的克隆猴年，用胚胎细胞获得的克隆猴年，用胚胎细胞获得的克隆猴年，用胚胎细胞获得的克隆猴3419641964年年年年,Gurdon,Gurdon以爪以爪以爪以爪蟾为材料蟾为材料蟾为材料蟾为材料,最早进行了最早进行了最早进行了最早进行了体细胞核移植的尝试体细胞核移植的尝试体细胞核移植的尝试体细胞核移植的尝试,获得了获得了获得了获得了1.51.5的蝌蚪。的蝌蚪。的蝌蚪。的蝌蚪。第二阶段第二阶段 同种体细胞克隆同种体细胞克隆35Dolly 的的产生生19971997年年年年,英英英英国国国国罗罗斯斯斯斯林林林林研研研研究究究究所所所所I.I.WilmutWilmut等等等等宣宣宣宣布布布布用用用用成成成成年年年年羊羊羊羊乳乳乳乳腺腺腺腺细细胞胞胞胞首首首首次次次次获获得得得得克克克克隆隆隆隆羊羊羊羊“多莉多莉多莉多莉”。实验成功的关成功的关键：血清血清饥饿法法 使使细胞核与去核卵胞核与去核卵细胞胞处于于细胞周期的同胞周期的同步状步状态,以利于恢复核的全能性以利于恢复核的全能性(重重编程程).).3819981998年年，美美国国夏夏威威夷夷大大学学的的YanagimachiYanagimachi等等用用克克隆隆鼠鼠的的卵卵丘丘细细胞胞核核作作供供体体，获获得得了克隆再克隆小鼠。了克隆再克隆小鼠。19981998年年，新新西西兰兰成成功功地地克克隆隆了了奶奶牛牛，并并克克隆了世界上仅存的最后一头珍稀牛。隆了世界上仅存的最后一头珍稀牛。至此，同种体细胞克隆进入成熟阶段。至此，同种体细胞克隆进入成熟阶段。39克隆牛克隆牛克隆牛克隆牛克隆克隆克隆克隆猕猕猴猴猴猴克隆狗克隆狗克隆狗克隆狗4020022002年初，我国首批成年体细胞克隆牛的群体诞生年初，我国首批成年体细胞克隆牛的群体诞生年初，我国首批成年体细胞克隆牛的群体诞生年初，我国首批成年体细胞克隆牛的群体诞生41第三阶段第三阶段 异种体细胞克隆异种体细胞克隆 濒濒危物种数量日益减少，很危物种数量日益减少，很危物种数量日益减少，很危物种数量日益减少，很难难提供用于克隆提供用于克隆提供用于克隆提供用于克隆的卵母的卵母的卵母的卵母细细胞和代孕受体，胞和代孕受体，胞和代孕受体，胞和代孕受体，促使科学家提出了异种促使科学家提出了异种促使科学家提出了异种促使科学家提出了异种克隆的克隆的克隆的克隆的设设想：想：想：想：将一种将一种将一种将一种动动物的体物的体物的体物的体细细胞核移植到另一胞核移植到另一胞核移植到另一胞核移植到另一种种种种动动物的去核物的去核物的去核物的去核(遗传遗传物物物物质质)卵母卵母卵母卵母细细胞中胞中胞中胞中，来得以，来得以，来得以，来得以实实现现克隆的技克隆的技克隆的技克隆的技术术。但此。但此。但此。但此阶阶段技段技段技段技术还处术还处在在在在实验实验探究探究探究探究阶阶段，尚未完全成熟。段，尚未完全成熟。段，尚未完全成熟。段，尚未完全成熟。421998199819981998年年年年1 1 1 1月，美国威斯康星大学的科学家们月，美国威斯康星大学的科学家们月，美国威斯康星大学的科学家们月，美国威斯康星大学的科学家们以牛的卵细胞为受体以牛的卵细胞为受体以牛的卵细胞为受体以牛的卵细胞为受体，成功克隆出猪、牛、羊、，成功克隆出猪、牛、羊、，成功克隆出猪、牛、羊、，成功克隆出猪、牛、羊、鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎。鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎。鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎。鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎。1998199819981998年年年年1999199919991999年，美国人年，美国人年，美国人年，美国人WhiteWhiteWhiteWhite用珍稀动物用珍稀动物用珍稀动物用珍稀动物盘羊的体细胞核与牛卵结合，我国学者陈大元将盘羊的体细胞核与牛卵结合，我国学者陈大元将盘羊的体细胞核与牛卵结合，我国学者陈大元将盘羊的体细胞核与牛卵结合，我国学者陈大元将大熊猫体细胞核与兔卵结合，大熊猫体细胞核与兔卵结合，大熊猫体细胞核与兔卵结合，大熊猫体细胞核与兔卵结合，均成功克隆出早期均成功克隆出早期均成功克隆出早期均成功克隆出早期胚胎胚胎胚胎胚胎。4320002000年，欧洲年，欧洲盘羊羊-奥姆布雷塔被成功克隆，科奥姆布雷塔被成功克隆，科学家是学家是为了了营救目前世界上数目稀少的欧洲救目前世界上数目稀少的欧洲盘羊，羊，避免它避免它们从地球上从地球上灭绝消失。消失。442003200320032003年年年年5 5 5 5月，世界上第一只克隆月，世界上第一只克隆月，世界上第一只克隆月，世界上第一只克隆骡骡子子子子-格姆在美国格姆在美国格姆在美国格姆在美国诞诞生生生生4520052005年年8 8月月2424日，中国科学院日，中国科学院动物研究所物研究所陈大元教授大元教授领导的的团队，国，国际首例体首例体细胞克隆胞克隆亚洲黄羊在山洲黄羊在山东顺利降生（用山羊做受体）。利降生（用山羊做受体）。46第二节第二节 哺乳动物克隆的技术方法哺乳动物克隆的技术方法克隆动物主要方法：克隆动物主要方法：p胚胎分割胚胎分割p胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植p体细胞核移植体细胞核移植p连续细胞核移植连续细胞核移植47优质动物体细胞的来源优质动物体细胞的来源优质动物体细胞的来源优质动物体细胞的来源动物卵母细胞的成熟培养动物卵母细胞的成熟培养动物卵母细胞的成熟培养动物卵母细胞的成熟培养重构胚重构胚重构胚重构胚胚胎移植胚胎移植胚胎移植胚胎移植克隆动物检测克隆动物检测克隆动物检测克隆动物检测体细胞核移植法克隆动物的基本操作流程体细胞核移植法克隆动物的基本操作流程卵母细胞核卵母细胞核卵母细胞核卵母细胞核体细胞核体细胞核体细胞核体细胞核核移植核移植核移植核移植核移植核移植体外培养体外培养体外培养体外培养481 1、动物体细胞的体外培养、动物体细胞的体外培养G G G G0 0 0 0期期期期(细胞周期时相细胞周期时相细胞周期时相细胞周期时相)常规体外培养常规体外培养常规体外培养常规体外培养降低血清使用量降低血清使用量降低血清使用量降低血清使用量细胞分裂停止细胞分裂停止细胞分裂停止细胞分裂停止移核前移核前移核前移核前49卵丘卵丘卵丘卵丘卵母细胞复合体卵母细胞复合体卵母细胞复合体卵母细胞复合体 (COC)(COC)用用用用M199M199M199M199洗洗洗洗3 3 3 3次次次次100l100l100l100l成熟培养液成熟培养液成熟培养液成熟培养液成熟培养液：成熟培养液：成熟培养液：成熟培养液：M199M199M199M199+10%FCS+10%FCS+10%FCS+10%FCS+10 g/mL PMSG+10 g/mL PMSG+10 g/mL PMSG+10 g/mL PMSG+10 g/mL HCG+10 g/mL HCG+10 g/mL HCG+10 g/mL HCG5%CO5%CO5%CO5%CO2 2 2 2，38.538.538.538.5，饱和湿度，饱和湿度，饱和湿度，饱和湿度24 h 24 h 24 h 24 h 或或或或 2828282830 h30 h30 h30 h观察卵丘扩展情况观察卵丘扩展情况观察卵丘扩展情况观察卵丘扩展情况例例例例:小牛卵母细胞的成熟培养小牛卵母细胞的成熟培养小牛卵母细胞的成熟培养小牛卵母细胞的成熟培养2 2、卵母细胞的成熟培养、卵母细胞的成熟培养50盲吸法盲吸法荧光法荧光法挤压法挤压法吸引法吸引法蔗糖法蔗糖法3 3、去核方法、去核方法51带下注射带下注射直接胞质内注射法直接胞质内注射法4 4、核注射方法、核注射方法透明带透明带透明带透明带应用压电应用压电-脉冲设备脉冲设备直接注射法直接注射法52常规法常规法原核互换两步法原核互换两步法孤雌活化协同法孤雌活化协同法化学诱导法化学诱导法5 5、核移植方法、核移植方法53将将将将数数数数枚枚枚枚重重重重构构构构胚胚胚胚放放放放入入入入100L100L的的的的胚胚胚胚胎胎胎胎培培培培养养养养液液液液（CR1-aaCR1-aa）中中中中培培培培养养养养48h48h后后后后，选选选选择择择择4 4细细细细胞胞胞胞以以以以上上上上的的的的胚胎移入铺满滋养层细胞的培养液滴中。胚胎移入铺满滋养层细胞的培养液滴中。胚胎移入铺满滋养层细胞的培养液滴中。胚胎移入铺满滋养层细胞的培养液滴中。在在在在120h120h半半半半换换换换液液液液，148h148h加加加加入入入入1mg/mL1mg/mL的的的的葡葡葡葡萄糖。以后每隔萄糖。以后每隔萄糖。以后每隔萄糖。以后每隔48h48h半换液。半换液。半换液。半换液。6 6、重构胚胎的体外培养、重构胚胎的体外培养小鼠胎儿成纤维细胞小鼠胎儿成纤维细胞小鼠胎儿成纤维细胞小鼠胎儿成纤维细胞547 7、胚胎移植方法、胚胎移植方法假孕的同步发情的寄母假孕的同步发情的寄母u输卵管内移植输卵管内移植(移植移植1 12 2细胞的受精卵细胞的受精卵)u子宫角移植子宫角移植(移植桑椹胚移植桑椹胚)55体体体体细细细细胞胞胞胞核核核核卵卵卵卵母母母母细细细细胞胞胞胞重构胚重构胚重构胚重构胚移入同步发情的动移入同步发情的动移入同步发情的动移入同步发情的动物输卵管或子宫内物输卵管或子宫内物输卵管或子宫内物输卵管或子宫内体细胞克隆动物研究路线图体细胞克隆动物研究路线图体细胞克隆动物研究路线图体细胞克隆动物研究路线图体外培养体外培养体外培养体外培养去核去核去核去核胚胎移植胚胎移植胚胎移植胚胎移植移核移核移核移核568 8、克隆动物的检测方法、克隆动物的检测方法u微卫星图谱法微卫星图谱法u同工酶法同工酶法57克隆牛克隆牛克隆牛克隆牛“动动动动动动动动”的微卫星检测结果的微卫星检测结果的微卫星检测结果的微卫星检测结果(红色代表标准分子量，蓝色和绿色代表扩增片段红色代表标准分子量，蓝色和绿色代表扩增片段红色代表标准分子量，蓝色和绿色代表扩增片段红色代表标准分子量，蓝色和绿色代表扩增片段)58l受胎率低（受胎率低（26.2%26.2%）l流产率高流产率高 (53.8%)(53.8%)l克隆动物的存活率低（克隆动物的存活率低（35.7%)35.7%)l常出现早衰现象常出现早衰现象存存 在在 问 题59第三节第三节 克隆动物的衰老问题克隆动物的衰老问题克克克克隆隆隆隆羊羊羊羊“多多多多莉莉莉莉”出出出出现现现现了了了了早早早早衰衰衰衰现现现现象象象象，其其其其端端端端粒粒粒粒长长长长度度度度比比比比正正正正常常常常出出出出生生生生的的的的羊羊羊羊短短短短了了了了20%20%，这这这这与与与与供供供供核核核核羊羊羊羊Finn Finn DorsetDorset的的的的6 6岁年龄直接相关。岁年龄直接相关。岁年龄直接相关。岁年龄直接相关。人类染色体端粒人类染色体端粒人类染色体端粒人类染色体端粒的荧光免疫原位的荧光免疫原位的荧光免疫原位的荧光免疫原位杂交照片杂交照片杂交照片杂交照片6019991999年年年年，美美美美籍籍籍籍华华华华人人人人杨杨杨杨向向向向中中中中教教教教授授授授第第第第一一一一个个个个报报报报道道道道了了了了克克克克隆隆隆隆动动动动物物物物具具具具有有有有正正正正常常常常长长长长度度度度的的的的端端端端粒粒粒粒和和和和遗遗遗遗传传传传年年年年龄龄龄龄，得得得得出出出出克克隆隆动动物物不不会会未未老老先先衰衰、克克隆隆动动物物的的遗遗传传年龄与供体动物年龄无关年龄与供体动物年龄无关的结论。的结论。的结论。的结论。此此此此后后后后，这这这这一一一一结结结结论论论论被被被被美美美美国国国国麻麻麻麻省省省省的的的的ATCATC公公公公司司司司在在在在克克克克隆隆隆隆牛牛牛牛和和和和美美美美国国国国洛洛洛洛克克克克菲菲菲菲勒勒勒勒大大大大学学学学在在在在克克克克隆隆隆隆鼠鼠鼠鼠的的的的实实实实验验验验中中中中得到证实。得到证实。得到证实。得到证实。61总总总总之之之之，由由由由于于于于细细细细胞胞胞胞衰衰衰衰老老老老的的的的分分分分子子子子机机机机理理理理至至至至今今今今仍仍仍仍未未未未能能能能研研研研究究究究清清清清楚楚楚楚，因因因因此此此此有有有有关关关关克克克克隆隆隆隆动动动动物物物物的的的的衰衰衰衰老老老老问问问问题题题题，目目目目前前前前仍在争论中，还需要进一步的研究来证实。仍在争论中，还需要进一步的研究来证实。仍在争论中，还需要进一步的研究来证实。仍在争论中，还需要进一步的研究来证实。端粒酶结构端粒酶结构端粒酶结构端粒酶结构的模式图解的模式图解的模式图解的模式图解62第四节第四节 克隆动物的应用前景克隆动物的应用前景克克隆隆动动物物在在畜畜牧牧业业和和医医学学方方面面具具有有极极为为重重要要的的意意义义，这这不不仅仅表表现现在在理理论论研研究究方方面面，更更重重要要的的是是其其在在应应用用开开发发方方面面的的实实用用价值。价值。631 1.克克克克隆隆隆隆技技技技术术术术能能能能快快快快速速速速培培培培育育育育出出出出大大大大量量量量的的的的优优优优良良良良品品品品种种种种家家家家畜畜畜畜，而而而而用用用用传传传传统统统统的的的的有有有有性性性性生生生生殖殖殖殖方方方方式式式式培培培培育育育育动动动动物物物物良良良良种种种种不不不不但但但但需需需需要要要要花花花花费费费费很很很很长长长长的的的的时时时时间间间间，而而而而且且且且优优优优良良良良性性性性状状状状难难难难以以以以在在在在后后后后代代代代得到控制。得到控制。得到控制。得到控制。克隆动物在畜牧业和医学方面的意义体现在：克隆动物在畜牧业和医学方面的意义体现在：2.2.克克克克隆隆隆隆动动动动物物物物的的的的遗遗遗遗传传传传背背背背景景景景完完完完全全全全一一一一致致致致，因因因因而而而而可可可可以以以以避避避避免免免免动动动动物物物物实实实实验验验验的的的的背背背背景景景景干干干干扰扰扰扰，如如如如用用用用在在在在药药药药物物物物检检检检测测测测上上上上，所所所所得结果将更加稳定可靠。得结果将更加稳定可靠。得结果将更加稳定可靠。得结果将更加稳定可靠。643.3.动动动动物物物物克克克克隆隆隆隆技技技技术术术术可可可可以以以以用用用用来来来来保保保保护护护护濒濒濒濒危危危危动动动动物物物物，用用用用濒濒濒濒危危危危动动动动物物物物的的的的冷冷冷冷冻冻冻冻细细细细胞胞胞胞随随随随时时时时可可可可以以以以克克克克隆隆隆隆出出出出新新新新的的的的成成成成体体体体动动动动物物物物，而而而而无须耗费大量的人力物力。无须耗费大量的人力物力。无须耗费大量的人力物力。无须耗费大量的人力物力。654.4.克克克克隆隆隆隆动动动动物物物物可可可可为为为为需需需需要要要要组组组组织织织织器器器器官官官官移移移移植植植植的的的的病病病病人人人人提提提提供供供供所所所所需需需需要要要要的的的的组组组组织织织织器器器器官官官官。国国国国外外外外已已已已经经经经开开开开始始始始了了了了这这这这方方方方面面面面的的的的研研研研究究究究，例例例例如如如如科科科科罗罗罗罗拉拉拉拉多多多多大大大大学学学学的的的的研研研研究究究究者者者者用用用用来来来来源源源源于于于于克克克克隆隆隆隆牛牛牛牛胎胎胎胎儿儿儿儿的的的的多多多多巴巴巴巴胺胺胺胺生生生生成成成成细细细细胞胞胞胞，治治治治疗疗疗疗帕帕帕帕金金金金森森森森氏氏氏氏病病病病模模模模型型型型大大大大鼠鼠鼠鼠，已取得一定效果。已取得一定效果。已取得一定效果。已取得一定效果。66治疗性克隆示意图治疗性克隆示意图675 5、动动动动物物物物克克克克隆隆隆隆技技技技术术术术 如如如如果果果果与与与与 转转转转基基基基因因因因动动动动物物物物技技技技术术术术 结结结结合合合合起来将具有更大的发展潜力。起来将具有更大的发展潜力。起来将具有更大的发展潜力。起来将具有更大的发展潜力。转基因动物克隆技术转基因动物克隆技术有有有有性性性性繁繁繁繁殖殖殖殖方方方方式式式式需需需需要要要要几几几几代代代代才才才才能能能能获获获获得得得得稳稳稳稳定定定定表表表表达达达达外外外外源源源源基基基基因因因因的的的的转转转转基基基基因因因因动动动动物物物物，而而而而通通通通过过过过转转转转基基基基因因因因克克克克隆隆隆隆动动动动物物物物的的的的方方方方式式式式，很很很很快快快快便便便便可可可可获获获获得得得得新新新新的的的的转转转转基基基基因因因因动动动动物物物物，从从从从而而而而提提提提高高高高转基因动物的生产效率。转基因动物的生产效率。转基因动物的生产效率。转基因动物的生产效率。68中国中国农业大学的科学家正在利用大学的科学家正在利用转基因奶牛生基因奶牛生产人人类母乳，并希望三年内在超市中母乳，并希望三年内在超市中销售。售。692011年年8月，荷月，荷兰研究人研究人员对山羊山羊进行行转基因改造，基因改造，让羊奶羊奶含有与蜘蛛含有与蜘蛛丝一一样的蛋白的蛋白质。利用。利用这种羊奶种羊奶织成的成的织物物强度是度是钢铁的的10倍，制造防倍，制造防弹皮肤。皮肤。70治治治治疗疗疗疗性性性性克克克克隆隆隆隆 动物模型动物模型动物模型动物模型器官移植器官移植器官移植器官移植濒濒濒濒危危危危动动动动物物物物转基因动物转基因动物转基因动物转基因动物乳腺生物反应器乳腺生物反应器乳腺生物反应器乳腺生物反应器基础研究基础研究基础研究基础研究遗传育种遗传育种遗传育种遗传育种 克隆71讨 论克隆人什么克隆人什么时候出候出现？克隆人有没有必要？克隆人有没有必要？72一位美国一位美国专家家说过，无，无论你相信你相信还是是怀疑，无疑，无论你支持你支持还是反是反对，“克隆人的潘多克隆人的潘多拉盒子将被打开拉盒子将被打开”，从那个盒子里跑出来的，从那个盒子里跑出来的是惊喜也好，是噩耗也好，人是惊喜也好，是噩耗也好，人类都只能接受都只能接受而无法阻止。而无法阻止。73第四章第四章第四章第四章哺乳动物胚胎培养哺乳动物胚胎培养哺乳动物胚胎培养哺乳动物胚胎培养 与胚胎移植与胚胎移植与胚胎移植与胚胎移植 74第一节第一节 胚胎培养胚胎培养 早早早早在在在在19131913年年年年BrachetBrachet就就就就尝尝尝尝试试试试对对对对兔兔兔兔囊囊囊囊胚胚胚胚进进进进行行行行体体体体外外外外培培培培养养养养实实实实验验验验，可可可可是是是是由由由由于于于于对对对对各各各各种种种种动动动动物物物物胚胚胚胚胎胎胎胎所所所所需需需需的的的