肠道致病菌检验技术培训课件

肠肠道致病菌道致病菌检验检验技技术术第一节第一节 概述概述一、食品中常见的肠道致病菌一、食品中常见的肠道致病菌沙门氏菌沙门氏菌志贺氏菌志贺氏菌大肠艾希氏菌大肠艾希氏菌变形杆菌变形杆菌耶尔森菌耶尔森菌2肠道致病菌检验技术二、生物学特性二、生物学特性1、形态与染色、形态与染色均均为为革革兰兰氏氏阴阴性性杆杆菌菌，中中等等大大小小，无无芽芽胞胞，多多数数具具有有周周身身鞭鞭毛毛能运动，志贺氏菌属无鞭毛无动力。能运动，志贺氏菌属无鞭毛无动力。2、培养和生化反应、培养和生化反应（1）、需需氧氧或或兼兼性性厌厌氧氧，菌菌落落中中等等大大小小，表表面面光光滑滑，液液体体培培养基混浊生长。养基混浊生长。（2）、肠肠道道致致病病菌菌一一般般不不分分解解乳乳糖糖，而而非非致致病病菌菌多多能能分分解解乳乳糖、葡萄糖产酸或产酸产气。糖、葡萄糖产酸或产酸产气。（3）、可还原硝酸盐为亚硝酸盐。）、可还原硝酸盐为亚硝酸盐。3肠道致病菌检验技术 三、抗原类型三、抗原类型 O抗原抗原也称菌体抗原，细胞壁脂肪糖，耐热也称菌体抗原，细胞壁脂肪糖，耐热100不不被破坏被破坏H抗原抗原也称鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐热，也称鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐热，60 30可破坏可破坏K抗原抗原也称表面抗原（荚膜抗原），多糖，具有阻抑也称表面抗原（荚膜抗原），多糖，具有阻抑O抗原发生凝集的现象，加热抗原发生凝集的现象，加热6030可消除抑可消除抑阻作用阻作用菌毛抗原菌毛抗原4肠道致病菌检验技术四、四、致病性致病性（一）、致病物质（一）、致病物质1、内内毒毒素素：能能引引起起机机体体发发热热，白白细细胞胞减减少少，低低血血糖糖，血压降低，严重者休克。血压降低，严重者休克。2、外外毒毒素素：对对小小肠肠粘粘膜膜细细胞胞具具有有物物殊殊毒毒害害作作用用，引引起起腹泻。腹泻。5肠道致病菌检验技术（二）、所致病疾（二）、所致病疾 1、伤寒和副伤寒、伤寒和副伤寒 2、食物中毒、食物中毒 3、细菌性痢疾、细菌性痢疾6肠道致病菌检验技术 五、微生物检验的基本程序五、微生物检验的基本程序 检样检样处理处理增菌培养增菌培养分离培养分离培养生化试验生化试验血清学鉴定血清学鉴定报告报告 7肠道致病菌检验技术思考题1 1、肠道致病菌具有哪些生物学特性、肠道致病菌具有哪些生物学特性?2 2、肠道致病菌具有哪些抗原？又称为什么？有、肠道致病菌具有哪些抗原？又称为什么？有什么特点？什么特点？3 3、写出肠道致病菌检验的基本程序、写出肠道致病菌检验的基本程序8肠道致病菌检验技术第二节、沙门氏菌检验第二节、沙门氏菌检验一、概况一、概况（一）沙门氏菌的发现与食物中毒（一）沙门氏菌的发现与食物中毒（二）沙门氏菌的命名（二）沙门氏菌的命名 根据所致疾病命名根据所致疾病命名 根据菌的发现地区命名根据菌的发现地区命名 以发现者的名字命名以发现者的名字命名（三）沙门氏菌的抵抗力（三）沙门氏菌的抵抗力 60 30可杀死可杀死9肠道致病菌检验技术（四）沙门氏菌的分类地位及定义（四）沙门氏菌的分类地位及定义1、地位：是肠杆菌科、埃希氏菌族、沙门氏、地位：是肠杆菌科、埃希氏菌族、沙门氏菌属中的细菌菌属中的细菌2、定义、定义 是是肠肠杆杆菌菌科科中中形形态态和和培培养养特特征征，生生化化反反应应及及抗抗原原结结构构相相似似，被被O1噬噬菌菌体体裂裂解解的的一一群群革革兰兰氏阴性杆菌。氏阴性杆菌。10肠道致病菌检验技术二、生物学特性二、生物学特性（一）、形态与染色：（一）、形态与染色：革革兰兰氏氏染染色色阴阴性性，无无荚荚膜膜，无无芽芽胞胞，多多数数有鞭毛，有动力，短小杆菌。有鞭毛，有动力，短小杆菌。（二）、培养特性（二）、培养特性 1、需需氧氧或或兼兼性性厌厌氧氧，最最适适温温度度37，PH7.27.4。11肠道致病菌检验技术(沙门氏菌（红色）侵入人体细胞 12肠道致病菌检验技术2、对营养要求不高，在普通培养基生长良好，、对营养要求不高，在普通培养基生长良好，37，24h，能形成菌落中等大小，直径，能形成菌落中等大小，直径2 23mm3mm，圆形或卵形，表面光滑湿润，无色半透，圆形或卵形，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落明，边缘整齐的菌落3 3、在在液液体体培培养养基基中中，呈呈均均匀匀混混浊浊性性生生长长，无无菌膜。菌膜。13肠道致病菌检验技术（三）、生化特性（三）、生化特性1、发发酵酵GLU，甘甘露露醇醇，山山梨梨醇醇产产酸酸产产气气（伤伤寒寒鸡鸡伤伤寒沙门氏菌少数不产气）寒沙门氏菌少数不产气）2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇3、多多数数产产生生H2S（+），不不产产靛靛基基质质（-），不不分分解解尿尿素（素（-），不产生乙酰甲基甲醇（），不产生乙酰甲基甲醇（VP）（）（-），），4、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（+）5、在、在KCN培养基中生长（培养基中生长（-），苯丙氨酸脱氨酸（），苯丙氨酸脱氨酸（-）14肠道致病菌检验技术（四）、抗原结构（四）、抗原结构主要两种：主要两种：A、O抗原抗原 B、H抗原抗原C、表面抗原（、表面抗原（K抗原）抗原）D、菌毛抗原、菌毛抗原15肠道致病菌检验技术2、O抗原抗原（1）O抗原的表示方法抗原的表示方法共有共有58种，用字母种，用字母O和阿拉伯数字标记：和阿拉伯数字标记：O1、O2、O3、O4如：伤寒杆菌：O9、O1216肠道致病菌检验技术（2）沙门氏菌的分群及表示方法）沙门氏菌的分群及表示方法用大写字母及相关符号表示：用大写字母及相关符号表示：A、B、C、D、E、F Z、O51 O63、O65 O6717肠道致病菌检验技术（3）沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原）沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原 A群群-O2 B群群-O4 C群群-O6 C1群群-O7、C2群群-O6 O8、C3群群-O8、C4群群-O6 O7 O14 D群群-O9 F群群-O11 E群群-O3 E2群群-O3、O10族族 E3群群-O3、O15 E4群群-O1、O3、O1918肠道致病菌检验技术3、H抗原（鞭毛抗原）抗原（鞭毛抗原）耐热性差：耐热性差：6015或酒精处理可破坏或酒精处理可破坏沙门氏沙门氏H抗原有两种：抗原有两种：第第1相相：特特异异相相，用用英英文文小小写写字字母母表表示示a、b、cz z1z55第第2相相：非非特特异异相相，用用阿阿拉拉伯伯数数字字表表示示1、2、3其其中也有用小写字母中也有用小写字母a、n、x等表示。等表示。19肠道致病菌检验技术4 4、表面抗原：、表面抗原：沙门氏菌有三种：沙门氏菌有三种：Vi、M、5抗原、抗原、K抗原抗原Vi抗抗原原位位于于菌菌体体的的最最表表层层，包包围围了了O抗抗原原，可可阻阻碍碍O抗抗原原的的血血清清学凝集试验。破坏学凝集试验。破坏Vi抗原：抗原：60 30，100 5含有含有Vi Vi 抗原的抗原的沙沙门氏氏菌：菌：伤寒沙寒沙门氏菌、丙型副氏菌、丙型副伤寒沙寒沙门氏菌、都柏林沙氏菌、都柏林沙门氏菌氏菌 20肠道致病菌检验技术三、沙门氏菌食物中毒三、沙门氏菌食物中毒（一）、引起食物中毒最常见的沙门氏菌：一）、引起食物中毒最常见的沙门氏菌：鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌（二）、易引起沙门氏菌中毒的食品（二）、易引起沙门氏菌中毒的食品 肉、蛋、乳类食品肉、蛋、乳类食品行业关注：美国两种花生酱含沙门氏菌 21肠道致病菌检验技术(三三)、中毒原因、中毒原因 1、食用病畜禽的肉制品食品、食用病畜禽的肉制品食品 2、病畜禽、带菌人和动物使食品受污染、病畜禽、带菌人和动物使食品受污染 3、用不洁净水外理食品、用不洁净水外理食品 22肠道致病菌检验技术（四）、临床病状（所致病菌）（四）、临床病状（所致病菌）1、肠热病：伤寒与副伤寒病，为慢性发热的菌血病。、肠热病：伤寒与副伤寒病，为慢性发热的菌血病。由伤寒与副伤寒菌引起，潜伏期由伤寒与副伤寒菌引起，潜伏期720天天2、急急性性肠肠胃胃类类：主主要要症症状状：头头痛痛、发发热热、恶恶心心、呕呕吐吐、腹泻、出冷汗、及全身不适，病程腹泻、出冷汗、及全身不适，病程23天天3、败血病、败血病：高烧、寒战、厌食、局部发炎、由猪霍乱沙：高烧、寒战、厌食、局部发炎、由猪霍乱沙门氏菌等引起门氏菌等引起 23肠道致病菌检验技术四、微生物检验四、微生物检验（一）、基本步骤（程序）（一）、基本步骤（程序）检样检样增菌（前增菌）增菌（前增菌）分离培养分离培养生化生化试验初步鉴定试验初步鉴定血清学反应最后鉴定血清学反应最后鉴定报告报告 24肠道致病菌检验技术1、前前增增菌菌：用用无无选选择择性性的的培培养养基基使使处处于于濒濒死死状状态态的的M恢复活力恢复活力;2、选选择择性性增增菌菌：使使沙沙门门氏氏菌菌优优势势繁繁殖殖，基基它它细细菌菌变变到到抑制抑制;3、选择性平板分离培养：分离出所需的细菌、选择性平板分离培养：分离出所需的细菌;4、生生化化试试验验：鉴鉴定定分分离离出出来来的的细细菌菌是是否否符符合合所所检检项项目目的细菌的细菌;5、血清学鉴定：进一步鉴定。、血清学鉴定：进一步鉴定。25肠道致病菌检验技术（二）、检验操作关键点（二）、检验操作关键点 1、增菌：使待检菌复壮，抑制杂菌生长，提高检出率。、增菌：使待检菌复壮，抑制杂菌生长，提高检出率。前增菌：用于加工过的食品，前增菌：用于加工过的食品，37，48h 或或1824h，长有杂菌。，长有杂菌。增增菌菌培培养养基基：增增菌菌液液一一般般用用MM和和SC两两种种，如如可可能能是是伤伤寒寒沙沙门门氏菌用氏菌用TTB，用，用42培养。培养。26肠道致病菌检验技术2、平板分离、平板分离 选择性培养基：选择性培养基：BS、DHL、HE、WS、SSBS中最好，中最好，DHL、HE、WS很好，很好，SS最差最差一般要用：一般要用：BS和和WS/SS两个平板，两个平板，BS主要用主要用于伤寒沙门氏菌的分离于伤寒沙门氏菌的分离27肠道致病菌检验技术BS上的菌落上的菌落DHL上的菌落上的菌落SS上的菌落上的菌落28肠道致病菌检验技术3、五项生化试验、五项生化试验 H H2 2S S、靛基质、靛基质、PH7.2尿素酶、尿素酶、KCN 、赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶 29肠道致病菌检验技术（1）三糖铁培养的培养）三糖铁培养的培养典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征：典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征：表面（表面（-）粉红色、底层（）粉红色、底层（+）黄色、）黄色、H H2 2S S（+）底层有黑色、有动）底层有黑色、有动力。力。在在TSI培养基中培养基中：表面（：表面（+）黄色、）黄色、H H2 2S S（-）的培养物可）的培养物可排除排除，其，其它培养物均有可能是沙门氏菌。它培养物均有可能是沙门氏菌。30肠道致病菌检验技术（2）其余四项生化实验）其余四项生化实验靛基质靛基质 PH7.2尿素酶尿素酶 KCN 赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶 反应序号：反应序号：A1、A2多见，多见，B1少见少见 31肠道致病菌检验技术（3）、典型沙门氏菌的五项生化反应及其检验的利用）、典型沙门氏菌的五项生化反应及其检验的利用 A、典型五项生化反应：、典型五项生化反应：A1 H2S（+）靛靛基基质质（-）PH7.2尿尿素素酶酶（-）KCN（-）赖氨酸脱羧赖氨酸脱羧E（+）32肠道致病菌检验技术B、利用五项生化反应鉴定沙门氏菌的最简单方案、利用五项生化反应鉴定沙门氏菌的最简单方案 a、对对于于H2S阳阳性性菌菌，利利用用五五项项生生化化反反应应试试验验可可判判别别沙沙门氏菌和柠檬酸杆菌。门氏菌和柠檬酸杆菌。b、对于、对于H2S阴性菌，查到阴性菌，查到B1时即：时即：H2S（-）靛靛基基质质（-）PH7.2尿尿素素酶酶（-）KCN（-）赖赖氨氨酸酸脱脱羧羧E（+），补补做做ONPE试试验验，可可判判定定沙沙门门氏氏菌菌属属和和埃埃希希氏氏菌菌属属（ONPE（-）为为沙沙门门氏氏菌菌，ONPE（+）大肠艾希氏菌）大肠艾希氏菌33肠道致病菌检验技术5、血清学试验（最后鉴定）、血清学试验（最后鉴定）（1）、沙门氏菌诊断血清的种类：）、沙门氏菌诊断血清的种类：10种种组组合合血血清清：主主要要用用于于伤伤寒寒和和副副伤伤寒寒沙沙门门氏氏菌菌鉴鉴定定 26种组合血清：常见致病菌的定群与分型种组合血清：常见致病菌的定群与分型 57种种组组合合血血清清：常常见见定定型型，初初步步鉴鉴定定AF群群以以外外的菌型的菌型144种组合血清种组合血清：全套装：全套装 34肠道致病菌检验技术（2）、血清学检验步骤、血清学检验步骤 抗抗原原准准备备 AF多多价价血血清清检检验验（判判定定是是否否是是沙沙门门氏氏菌菌）群群特特异异性性抗抗体体血血清清（如如O2、O4、O3、O7、O8、O9、O10、O11（判判定定O群群别别）O单单因因子子血血清清检检查查 H因因子子血血清清检检查查（分分型型）报告报告 35肠道致病菌检验技术五、检验结果的报告五、检验结果的报告1、凡凡血血清清学学鉴鉴定定与与生生化化反反应应均均符符合合者者，报报告告发现沙门氏菌。发现沙门氏菌。经检验，经检验，食品发现有沙门氏菌食品发现有沙门氏菌 2、凡血清学鉴定与生化反应均不符合者，、凡血清学鉴定与生化反应均不符合者，报告未发现沙门氏菌。报告未发现沙门氏菌。36肠道致病菌检验技术思考题：思考题：1、典型沙门氏菌的五项生化试验结果如何？、典型沙门氏菌的五项生化试验结果如何？2、沙门氏菌的形态特征，培养特性是什么？、沙门氏菌的形态特征，培养特性是什么？3、沙沙门门氏氏菌菌检检验验时时为为什什么么要要进进行行前前增增菌菌和和增增菌菌？4、沙沙门门氏氏菌菌有有哪哪些些抗抗原原？各各有有何何特特点点？O、H抗抗原原如如何何表表示示，AF群群沙沙门门氏氏菌菌中中，代代表表每每群群O特异性抗原的独特因子是什么？特异性抗原的独特因子是什么？37肠道致病菌检验技术5、沙沙门门氏氏菌菌哪哪几几个个菌菌型型具具有有Vi抗抗原原，Vi抗抗原原对对O抗抗原原血血清清涟涟试试验验有有何何影影响响，对对含含Vi抗抗原原菌菌，如如何何做做O抗抗原血清学试验。原血清学试验。6、沙沙门门氏氏菌菌在在SS平平板板，TSI培培养养基基上上生生长长的的现现象象如如何何，说明其原理。说明其原理。7、分分离离纯纯化化后后怎怎样样选选用用最最少少的的生生化化试试验验方方法法初初步步鉴鉴定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。8、如何进行沙门氏菌的血清学试验。、如何进行沙门氏菌的血清学试验。38肠道致病菌检验技术第三节、志贺氏菌的检验第三节、志贺氏菌的检验 一、生物学特性一、生物学特性 （一）、形态与染色（一）、形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛 23um*0.50.7um 39肠道致病菌检验技术（二）、培养特性（二）、培养特性1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37，PH7.27.42、在在普普通通琼琼脂脂和和SS平平板板上上，能能形形成成圆圆形形、微微凸凸、光光滑滑湿湿润润、无无色色半半透透明明、边边缘缘整整齐齐、在在中中等等大大小小的菌落的菌落3、宋宋氏氏志志贺贺氏氏菌菌菌菌落落较较大大，较较不不透透明明，粗粗糙糙而而扁扁平，在平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。40肠道致病菌检验技术（三）、生化反应（三）、生化反应1、发发酵酵葡葡萄萄糖糖，产产酸酸不不产产气气，除除宋宋氏氏志志贺贺氏菌外，均不发酵乳糖。氏菌外，均不发酵乳糖。2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。3、不不产产生生H2S，不不分分解解尿尿素素，V-P试试验验阴阴性性，不能利用柠檬酸盐。不能利用柠檬酸盐。4、甲基红阳性。、甲基红阳性。41肠道致病菌检验技术（四）、抗原结构（四）、抗原结构1、抗原构成：、抗原构成：O抗原：抗原：群特异性抗原：群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除抗原：除B群外，一般有群外，一般有K抗原抗原42肠道致病菌检验技术2、志贺氏菌的分群与血清型、志贺氏菌的分群与血清型志贺氏菌分为四群：志贺氏菌分为四群：A群（痢疾志贺氏菌）：群（痢疾志贺氏菌）：110型型 B群（福氏志贺氏菌）：群（福氏志贺氏菌）：16型型+X、Y两个变种，两个变种，C群（鲍氏志贺氏菌群（鲍氏志贺氏菌）：）：115型型D群（宋内氏志贺氏菌）群（宋内氏志贺氏菌）：1个型个型43肠道致病菌检验技术志贺氏菌属抗原的分类志贺氏菌属抗原的分类菌 名 血 清 分 类 生 化 特 性 群 型 亚 型 甘露醇 鸟氨酸脱羧酶 志贺氏菌 A 1 10 -福 氏 菌 B 16x、y变种 1a、1b、2a、2b、3a、3b3c、4a、4b+-鲍 氏 菌 C 1 15 +-宋内氏菌 D 1 +44肠道致病菌检验技术葡萄糖葡萄糖+乳糖-甘露醇甘露醇-痢疾志贺痢疾志贺氏菌氏菌1 1、3 3、4 4、5 5、6 6、9 9、1010型型 痢疾志痢疾志贺氏菌贺氏菌2 2、7 7、8 8型型 福氏福氏6型，型，鲍氏鲍氏1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、8 8、1010、1212、1414型型 福氏痢疾菌福氏痢疾菌（1、2 2、3 3、4 4、5 5型）鲍氏型）鲍氏5 5、7 7、9 9、1111、1313、1515型型靛基质靛基质-乳糖乳糖+宋氏志宋氏志贺氏菌贺氏菌 靛基质靛基质-靛基质靛基质+靛基质靛基质-靛基质靛基质+甘露醇甘露醇+45肠道致病菌检验技术3、属内外抗原关系、属内外抗原关系（1）群内抗原关系：）群内抗原关系：A群：群：2与与10型，具有密切关系型，具有密切关系 C群：群：1与与4和和11型，型，10与与11相关相关 B群：群抗原是群：群抗原是B群各型之间的共同抗原群各型之间的共同抗原（2）群间抗原关系：）群间抗原关系：C群群17型与型与A群群3型相关型相关 C群群18型与型与A群群11型相关型相关46肠道致病菌检验技术（3）属外抗原关系：）属外抗原关系：志志贺贺氏氏菌菌与与艾艾希希氏氏菌菌属属的的O抗抗原原关关系系非非常常密密切切，除除A群群9型型和和D群群宋宋氏氏菌菌与与埃埃氏氏希希菌菌的的O抗抗原原关关系系未未见见报报道道外外，每每一一个个型型都与一定的艾希氏菌的都与一定的艾希氏菌的O抗原有关抗原有关。47肠道致病菌检验技术4、K抗原对抗原对O抗原血清学试验的影响抗原血清学试验的影响 可可阻阻碍碍O抗抗原原的的血血清清学学凝凝集集试试验验，煮煮沸沸处理即可。处理即可。48肠道致病菌检验技术（五）志贺氏菌的抵抗力（五）志贺氏菌的抵抗力志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。一般在潮湿土壤中能存活34天，37水中存活20天，在粪便内（室温）存活11天。日光直接照射30分钟，56-6010分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，1%石炭酸中15-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。49肠道致病菌检验技术二、志贺氏菌的致病性与食物中毒二、志贺氏菌的致病性与食物中毒（一）流行病学（一）流行病学50肠道致病菌检验技术传染源食物、病人、粪便、苍蝇等食物、病人、粪便、苍蝇等51肠道致病菌检验技术（二）志贺氏菌的致病性（二）志贺氏菌的致病性致病因素致病因素：侵袭力、菌体内毒素、外毒素侵袭力、菌体内毒素、外毒素52肠道致病菌检验技术（二）临床症状（二）临床症状A、急性细菌性痢疾：、急性细菌性痢疾：急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。B、慢性细菌性痢疾：、慢性细菌性痢疾：慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。53肠道致病菌检验技术三、微生物检验三、微生物检验（一）检验步骤（程序）（一）检验步骤（程序）检检样样样样品品处处理理增增菌菌培培养养SS、EMB平平板板分分离离培培养养初初步步生生化化鉴鉴定定最最后血清学鉴定后血清学鉴定报告报告54肠道致病菌检验技术1、增菌培养、增菌培养培养基：培养基：GN增菌液增菌液在在361 1 68h68h，当当培培养养液液出出现现轻微混浊即中止培养。轻微混浊即中止培养。56肠道致病菌检验技术2 2、分离培养、分离培养 强选择性平板：强选择性平板：SSSS或或HEHE、WS WS 弱选择性平板：弱选择性平板：EMB或麦康数或麦康数 在工作中在工作中361361培养培养 1824h 1824h，菌落特征：菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌落。无色透明，中等大小，光滑圆形菌落。57肠道致病菌检验技术HE平板原理及反应平板原理及反应 发酵乳糖的某种肠杆菌 不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌 不发酵乳糖的肠道菌，可能就是志贺氏菌 58肠道致病菌检验技术SS平板原理及反应平板原理及反应SS Agar(Salmonella Shigella Agar)大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌 是沙门氏菌。有黑色中心。如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了59肠道致病菌检验技术麦康凯琼脂平板麦康凯琼脂平板 60肠道致病菌检验技术EMB平板照片及原理平板照片及原理 61肠道致病菌检验技术3、初步生化鉴定、初步生化鉴定 从从平平板板上上挑挑取取34个个可可疑疑菌菌落落，接接种种于于TSI和和葡葡萄萄糖糖半半固固体体培培养养基基各各一一管管，36，1824h，62肠道致病菌检验技术三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验的原理）琼脂试验的原理2志贺氏菌志贺氏菌3沙门氏菌沙门氏菌4大肠杆菌大肠杆菌 葡萄糖半固体原理及结果葡萄糖半固体原理及结果。Organism Test Result 1.Pseudomonas aeruginosa（铜绿假单胞菌）：Motile 2.Staphylococcus aureus：Non-motile 3.Bacillus subtilis：Motile 63肠道致病菌检验技术志贺氏菌在志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）：生长的结果（现象）：（1 1）斜面产碱仍为红色或粉红色；）斜面产碱仍为红色或粉红色；（2 2）底层产酸不产气，变黄色；）底层产酸不产气，变黄色；（3 3）不产）不产H2S，不出现黑色。，不出现黑色。志贺氏菌在志贺氏菌在半固体培养基生长：沿线生长，无半固体培养基生长：沿线生长，无动力。动力。64肠道致病菌检验技术在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：（1）在）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物表面上呈现蔓延生长的培养物（2）在）在1824h发酵乳糖、蔗糖的培养物发酵乳糖、蔗糖的培养物（3）不不分分解解葡葡萄萄糖糖，只只在在半半固固体体培培养养基基表表面面生生长长的培养物。的培养物。（4）产气的培养物）产气的培养物（5）有动力的培养物）有动力的培养物（6）产）产H2S的培养物的培养物65肠道致病菌检验技术 4、血清学试验和生化鉴定试验、血清学试验和生化鉴定试验（1）血清学分型：）血清学分型：凡凝为志贺氏菌，挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和群多价和D群血清分别试验。群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用115各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌312型多价血清及各型因子血清检查。66肠道致病菌检验技术（2）进一步的生化试验）进一步的生化试验葡萄糖铵葡萄糖铵 -西蒙氏柠檬酸盐西蒙氏柠檬酸盐-赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶-pH7.2尿素尿素-KCN生长生长-水杨苷和七叶苷的分解水杨苷和七叶苷的分解 -67肠道致病菌检验技术（3）生化分群）生化分群五项生化试验：五项生化试验：乳糖乳糖 甘露醇甘露醇 棉子糖棉子糖 甘油发酵甘油发酵 靛基质试验靛基质试验，68肠道致病菌检验技术 5、结果报告：、结果报告：综合生化血清学试验结果判定菌群，菌型，并做出报告。69肠道致病菌检验技术思考题：思考题：1、志志贺贺氏氏菌菌分分几几个个群群各各称称为为什什么么？抗抗原原结结构构如如何何？K抗抗原原对对O抗原试验有何影响？抗原试验有何影响？2、写写出出志志贺贺氏氏菌菌、沙沙门门氏氏菌菌、大大肠肠杆杆菌菌在在SS、EMB平平板板上生长的菌落特征？上生长的菌落特征？3、志贺氏菌在三糖铁培养基上生长的结果如何？、志贺氏菌在三糖铁培养基上生长的结果如何？4、在在志志贺贺氏氏菌菌中中，接接种种三三糖糖尿尿病病铁铁培培养养基基和和葡葡萄萄糖糖半半固固体体培培养养基基后后，哪哪些些培培养养物物可可认认为为不不属属于于本本菌菌生生长长现现象象的的范范围而可弃去？围而可弃去？5、如何用生化反应来区分志贺氏菌各群？、如何用生化反应来区分志贺氏菌各群？6、写出沙门氏菌、志贺氏菌的检验程序及所用培养基。、写出沙门氏菌、志贺氏菌的检验程序及所用培养基。70肠道致病菌检验技术