胚胎体外培养和胚胎评估的培训培训ppt课件

胚胎体外培养和胚胎体外培养和胚胎胚胎评评估的培估的培训训胚胎体外培养和胚胎评估的培训1胚胎体外培养胚胎体外培养胚胎评估胚胎评估胚胎体外培养2空气、振动、光照空气、振动、光照培养箱外环境培养箱外环境人员人员/操作操作培养流程培养流程alarmi iauto-auto-startstart O2 CO2cal90auto-startdoor90hl37.037.05.05.095.095.0培养箱内环境培养箱内环境气体、气体、湿度、培养湿度、培养皿、油皿、油培养液培养液胚胎体外培养体系胚胎体外培养体系空气、振动、光照培养箱外环境人员/操作alarmiaut3培养箱外环境培养箱外环境空气及污染物空气及污染物振动、噪音振动、噪音光照光照室内湿度室内湿度培养箱外环境空气及污染物4挥发性有机化合物挥发性有机化合物VOC总挥发性有机化合物总挥发性有机化合物（TVOC）：）：熔点低于室温熔点低于室温沸点沸点50260挥发性有机化合物的总称挥发性有机化合物的总称世界卫生组织(WHO,1989)挥发性有机化合物VOC总挥发性有机化合物（TVOC）：世界卫5VOC分类分类苯系物（苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯）苯系物（苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯）二异氰酸酯（二异氰酸酯（TDI）二异氰甲苯酯二异氰甲苯酯有机氯化物（三氯乙烯、三氯甲烷、三有机氯化物（三氯乙烯、三氯甲烷、三氯乙烷）氯乙烷）氟里昂类氟里昂类石油烃类石油烃类有机酮、醛、胺、醇、醚、酯、酸等有机酮、醛、胺、醇、醚、酯、酸等VOC分类苯系物（苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯）6测定测定VOC先俘获、后测定先俘获、后测定各种各种VOC的俘获方法不同的俘获方法不同测定总测定总VOC？目前测定的目前测定的“TVOC”：613个碳原子的个碳原子的苯系有机物苯系有机物其他其他VOC有各自的俘获测定方法有各自的俘获测定方法未知未知VOCVOC很难测定很难测定测定VOC先俘获、后测定未知VOC很难测定7尘埃粒子尘埃粒子直径直径0.5um的悬浮粒子的悬浮粒子十万级：十万级：3500000/m3万级：万级：350000/m3千级：千级：35000/m3尘埃粒子直径0.5um的悬浮粒子8光照光照来源：室内照明灯、显微镜光源来源：室内照明灯、显微镜光源危害：危害：损害线粒体损害线粒体培养液成分分解培养液成分分解紫外线产生活性氧，对所有细胞有害紫外线产生活性氧，对所有细胞有害光照来源：室内照明灯、显微镜光源9光照光照豚鼠卵，超过一小时，影响后续受精和豚鼠卵，超过一小时，影响后续受精和有丝分裂有丝分裂低照度利于人卵的囊胚形成和妊娠低照度利于人卵的囊胚形成和妊娠有相反的结论有相反的结论兔卵进行光照兔卵进行光照2030分钟后，随后的受精率和着床率并未受分钟后，随后的受精率和着床率并未受到明显影响到明显影响光照豚鼠卵，超过一小时，影响后续受精和有丝分裂10相对湿度（相对湿度（RH）1m1m3 3空气空气252523g23g23g23g水蒸气水蒸气水蒸气水蒸气10g10g10g10g水蒸气水蒸气水蒸气水蒸气RH=绝对湿度绝对湿度/饱和湿度饱和湿度3030g30g水蒸气水蒸气RH=43.5%RH=33.3%相对湿度（RH）1m3空气25 23g水蒸气10g水蒸气R11理想的室内相对湿度？理想的室内相对湿度？设备设备抑制霉菌抑制霉菌人员人员减少液体蒸发减少液体蒸发01003060%理想的室内相对湿度？设备抑制霉菌人员减少液体蒸发01003012培养箱内环境培养箱内环境气体气体温度温度培养皿培养皿液滴液滴培养方式培养方式油油培养箱内环境气体13气体气体二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱CO2alarmi iauto-auto-startstart O2 CO2cal90auto-startdoor90hl37.037.05.05.095.095.0三气培养箱三气培养箱桌面式培养箱桌面式培养箱N2气体二氧化碳培养箱CO2alarmiauto-O2 14气体纯度气体纯度99.99%?99.995%?99.999%?剩余的0.001%是什么？CO2气体纯度99.99%?剩余的0.001%是什么？CO215高浓度氧，胚胎基因表达异常？高浓度氧，胚胎基因表达异常？低氧培养改善体外胚胎发育低氧培养改善体外胚胎发育低氧培养，人囊胚细胞数增加低氧培养，人囊胚细胞数增加低氧培养低氧培养高浓度氧，胚胎基因表达异常？低氧培养16低氧培养低氧培养部分文献部分文献不必要低氧不必要低氧?培养液内，添加了抗氧化物质（牛磺酸、培养液内，添加了抗氧化物质（牛磺酸、丙酮酸）丙酮酸）可能消除高氧的不利影响可能消除高氧的不利影响37.037.05.05.095.095.0maxmin%CO2%rHdesautozeroauto-startcontrolidesstart/stopIO低氧培养部分文献不必要低氧?37.05.095.0max17ASRM，2013年年支持低氧环境利于囊胚形成！支持低氧环境利于囊胚形成！ASRM，2013年支持低氧环境利于囊胚形成！18低氧同样利于卵裂期胚胎低氧同样利于卵裂期胚胎LowoxygenconcentrationsforembryocultureinassistedreproductivetechnologiesStephanBontekoe1,*,EleniMantikou1,MadelonvanWely1,PublishedOnline:11JUL2012Assessedasup-to-date:4NOV2011DOI:10.1002/14651858.CD008950.pub2荟萃分析，随机对照研究1382 名IVF/ICSI患者20%vs 5%O2活产率从32%提高到43%低氧同样利于卵裂期胚胎Low oxygen concentr19温度温度鼠胚鼠胚室温室温5分钟分钟降低卵裂率降低卵裂率15分钟分钟囊胚形成率减半囊胚形成率减半人卵母细胞人卵母细胞低温损害纺锤体低温损害纺锤体温度鼠胚20温度温度纺锤体解聚与恢复纺锤体解聚与恢复33下，下，5分钟解聚，分钟解聚，10分钟完全消分钟完全消失失37后后,10分钟内恢复分钟内恢复28，解聚加快，恢复时间长，解聚加快，恢复时间长，20分钟不能完全恢复分钟不能完全恢复温度纺锤体解聚与恢复33下，5分钟解聚，10分钟完全消21液滴液滴/培养方式培养方式单独培养单独培养液滴/培养方式单独培养22集合培养集合培养胚胎自分泌、旁分泌作用胚胎自分泌、旁分泌作用减小体积减小体积适当增加胚胎数目适当增加胚胎数目液滴自分泌自分泌旁分泌旁分泌集合培养胚胎自分泌、旁分泌作用液滴自分泌旁分泌23集合培养集合培养依据依据鼠、羊、牛胚胎培养证据鼠、羊、牛胚胎培养证据具体旁分泌因子未确定具体旁分泌因子未确定集合培养依据鼠、羊、牛胚胎培养证据24集合培养集合培养方法方法2050ul25个胚胎个胚胎/液滴液滴盖油（石蜡油、矿物油）盖油（石蜡油、矿物油）液滴矿物油物油液滴液滴集合培养方法2050ul液滴矿物油液滴液滴25集合培养集合培养缺点：不利于单个胚胎的连续观察缺点：不利于单个胚胎的连续观察解决解决1：按：按Day3形形态学学评分分分分组培培养养8细胞碎片0108细胞碎片20406细胞碎片2050集合培养缺点：不利于单个胚胎的连续观察解决1：按Day3形态26解决解决2：特殊培养皿特殊培养皿液滴解决2：液滴27培养液培养液培养液种类培养液种类水、离子水、离子碳水化合物碳水化合物氨基酸氨基酸pH值及缓冲物质值及缓冲物质维生素，抗生素维生素，抗生素螯合剂螯合剂抗氧化物质抗氧化物质蛋白质，大分子蛋白质，大分子激素，生长因子激素，生长因子培养液培养液种类28培养液种类培养液种类序贯培养液序贯培养液单一培养液单一培养液培养液种类序贯培养液29序贯培养序贯培养mmol/LGardner,1998序贯培养mmol/LGardner,199830序贯培养序贯培养葡萄糖葡萄糖不利于分裂期胚胎发育不利于分裂期胚胎发育囊胚主要能量来源囊胚主要能量来源EDTA利于分裂期胚胎发育利于分裂期胚胎发育抑制囊胚内细胞团发育抑制囊胚内细胞团发育氨基酸氨基酸序贯培养葡萄糖31序贯培养系统序贯培养系统Day1Day3:卵裂期培养液卵裂期培养液Day3Day6：囊胚培养液：囊胚培养液序贯培养系统Day1Day3:卵裂期培养液32单一培养液？单一培养液？单一培养：简化流程，形成率类似单一培养：简化流程，形成率类似Day3换液换液Day3不换液！不换液！单一培养液？单一培养：简化流程，形成率类似33pH值与缓冲物质值与缓冲物质pH：代表氢离子浓度：代表氢离子浓度pH与细胞各种生理功能关系极密切与细胞各种生理功能关系极密切pH指示剂：酚红指示剂：酚红缓冲物质：维持缓冲物质：维持pH稳定，成对或一种：稳定，成对或一种：碳酸盐缓冲对、碳酸盐缓冲对、MOPS、HEPES1pH值值147pH值与缓冲物质pH：代表氢离子浓度1pH值14734pH值与值与CO2浓度浓度最重要的缓冲对最重要的缓冲对碳酸盐缓冲对：碳酸盐缓冲对：HCO3-/H2CO2pH=pKa+lg（）HCO3 H2CO3 pH值与CO2浓度最重要的缓冲对pH=pKa+lg（35培养系统的培养系统的pH值值7.2-7.4碳酸盐体系不稳定！碳酸盐体系不稳定！暴露空气会使暴露空气会使PH迅速升高迅速升高盖油减少培养基气体交换盖油减少培养基气体交换培养系统的pH值7.2-7.436CO2浓度影响因素浓度影响因素设定值：设定值：5%？6%传感器类型传感器类型培养箱开门方式培养箱开门方式温度、湿度温度、湿度CO2浓度影响因素设定值：5%？6%37无机离子参与渗透压形成无机离子参与渗透压形成高浓度氯化钠不利于鼠囊胚形成高浓度氯化钠不利于鼠囊胚形成胞外镁和钙的水平与早期胚胎细胞对细胞外镁和钙的水平与早期胚胎细胞对细胞内稳态调节能力有关胞内稳态调节能力有关磷在含有葡萄糖的简单培养基例如磷在含有葡萄糖的简单培养基例如HTF或或Earls抑制抑制人胚胎的发育人胚胎的发育无机离子无机离子无机离子参与渗透压形成无机离子 38铵铵氨基酸代谢及自然分解产生的氨会导致氨基酸代谢及自然分解产生的氨会导致胚胎毒性物质胚胎毒性物质-铵离子的积累铵离子的积累铵离子可以改变胚胎分化、代谢及基因铵离子可以改变胚胎分化、代谢及基因表达表达会严重降低移植后种植率及胎儿发育率会严重降低移植后种植率及胎儿发育率铵氨基酸代谢及自然分解产生的氨会导致胚胎毒性物质-铵离子的积39抗生素抗生素培养基中一般均含抗生素例如青霉素、培养基中一般均含抗生素例如青霉素、链霉素和庆大霉素链霉素和庆大霉素主要作用时防止培养基的细菌污染主要作用时防止培养基的细菌污染抗生素培养基中一般均含抗生素例如青霉素、链霉素和庆大霉素40蛋白质蛋白质/大分子物质大分子物质白蛋白白蛋白可以降低配子和胚胎表面电荷，可以降低配子和胚胎表面电荷，避免其粘到玻璃或塑料上便于操作，且避免其粘到玻璃或塑料上便于操作，且可以抵消毒性效应可以抵消毒性效应如：人血清蛋白（如：人血清蛋白（HSA）和牛血清蛋白、）和牛血清蛋白、人血浆蛋白粉、人血浆蛋白粉、5%血浆蛋白注射液、及合血浆蛋白注射液、及合成血清替代品（成血清替代品（sss）蛋白质/大分子物质 白蛋白可以降低配子和胚胎表面电荷，避免其41阻止培养液的蒸发及培养基阻止培养液的蒸发及培养基pH的变化的变化种类：种类：矿物油矿物油石蜡油石蜡油油油阻止培养液的蒸发及培养基pH的变化油42培养液储运培养液储运冷链运输，冷链运输，28保持容器密封，有泄漏的容器导致培养保持容器密封，有泄漏的容器导致培养液碱化，镁离子沉淀液碱化，镁离子沉淀减少细菌污染风险减少细菌污染风险培养液储运冷链运输，2843分装分装目的：减少开瓶次数目的：减少开瓶次数分装量：根据使用情况，一次一支分装量：根据使用情况，一次一支分装容器，与量匹配分装容器，与量匹配标记分装日期标记分装日期分装目的：减少开瓶次数44胚胎移植移植时期胚胎移植移植时期广泛采用广泛采用D3（约（约8-cell）胚胎移植）胚胎移植在体内此时的胚胎是在输卵管内，而不是在在体内此时的胚胎是在输卵管内，而不是在子宫内子宫内卵裂期移植的妊娠率卵裂期移植的妊娠率低于低于D4及囊胚移植及囊胚移植胚胎移植移植时期 广泛采用D3（约8-cell）胚胎移植45囊胚培养囊胚培养进一步筛选胚胎进一步筛选胚胎灵活的移植时间灵活的移植时间便于便于PGD/PGS减少异位妊娠减少异位妊娠囊胚培养进一步筛选胚胎46囊胚的整倍体率囊胚的整倍体率年龄与囊胚的整倍体率Baris Ata 2012年龄囊胚的整倍体率年龄与囊胚的整倍体率Baris Ata 20147人员及操作人员及操作人员数量适当人员数量适当每项关键技术均至少每项关键技术均至少2人能熟练实施人能熟练实施确保足够人力实现双人复核确保足够人力实现双人复核卫生部（卫科教卫生部（卫科教20031762003176号文件）规定，实号文件）规定，实验室专业技术人员不得少于验室专业技术人员不得少于3 3人。年周期超过人。年周期超过10001000个周期的中心需要适当增加技术人员个周期的中心需要适当增加技术人员每名全职胚胎学家完成每名全职胚胎学家完成250400250400周期周期/年年人员及操作人员数量适当卫生部（卫科教2003176号文件48人员及操作人员及操作操作时间操作时间对卵、胚胎的应激对卵、胚胎的应激核对核对人员及操作操作时间49胚胎体外培养胚胎体外培养胚胎评估胚胎评估胚胎体外培养50卵巢刺激后获得的胚胎发育潜能不一致卵巢刺激后获得的胚胎发育潜能不一致减少移植胚胎数，挑选减少移植胚胎数，挑选正确正确的胚胎！的胚胎！胚胎胚胎评估评估、胚胎选择是、胚胎选择是IVF实验室技术实验室技术中的核心中的核心卵巢刺激后获得的胚胎发育潜能不一致51常规胚胎形态学评估常规胚胎形态学评估始于第一例始于第一例IVF-ET1981年年Edwards阐述了阐述了形态学评估的方法形态学评估的方法常规胚胎形态学评估始于第一例IVF-ET52胚胎形态学评估胚胎形态学评估多种评分体系可进行胚胎形态学评估多种评分体系可进行胚胎形态学评估缺点缺点依赖操作者主观能力依赖操作者主观能力优势优势快速而有效快速而有效胚胎形态学评估多种评分体系可进行胚胎形态学评估53Alpha“Toadvancetheartandscienceofclinicalembryologyforthebenefitofthepublicworldwide,throughinternationalpromotionofeducation,communication,andcollaboration.”objectives唯一由资深胚胎学家组成的国际组织唯一由资深胚胎学家组成的国际组织Alpha“To advance the art and 54Alpha共识共识embryomorphologycryopreservationKPIsTheProfessionalStatusoftheClinicalEmbryologistAlpha 共识embryo morphology55Istanbul consensus workshop on embryo assessment:proceeding of an expert meeting 2010Istanbul consensus workshop on56胚胎的形态学指标胚胎的形态学指标透明带透明带极体极体卵周隙卵周隙胚胎形状胚胎形状裂球数量裂球数量裂球形状裂球形状裂球排列裂球排列原核原核碎片碎片多核多核颗粒颗粒空泡空泡致密化致密化囊胚腔大小囊胚腔大小ICM形状形状TE细胞数细胞数早卵裂早卵裂胚胎的形态学指标透明带胚胎形状原核碎片致密化囊胚腔大小早卵裂57Righttime，rightembryo！Right time，58评估时间评估时间观察内容受精后时间Expected stage of development受精17 1 hPronuclear stageSyngamy check23 1 hUp to 50%in syngamy(up to 20%at the 2-cell stage)早卵裂26 1 h post-ICSI28 1 h post-IVF2-cell stageDay 2 44 1 h4-cell stageDay 368 1 h8-cell stageDay 492 2 hMorulaDay 5116 2 hBlastocyst评估时间观察内容受精后时间Expected stage of59原核期评分原核期评分1998年前后提出年前后提出原核核仁的数量，排列原核核仁的数量，排列原核大小及排列原核大小及排列胞浆状态胞浆状态2001年年,原核期评分能够预测囊胚形成，与妊娠率相关原核期评分能够预测囊胚形成，与妊娠率相关近近10余年一直存在争议，研究多为回顾性余年一直存在争议，研究多为回顾性2011年年time-lapse：对评分方法提出质疑：对评分方法提出质疑原核期评分1998年前后提出2001年,原核期评分能够预测囊60原核期评分原核期评分GradeRatingDescription1Symmetrical Equivalent to Z1 and Z22Non-symmetricalOther arrangements,including peripherally-sited pronuclei3AbnormalPronuclei with 0 or 1 NPB原核期评分GradeRatingDescription1Sy61早卵裂早卵裂2427小时的第一次分裂小时的第一次分裂Shoukir，1997年提出早卵裂是发育能力年提出早卵裂是发育能力的重要标志的重要标志后多人研究证实后多人研究证实早卵裂2427小时的第一次分裂62分裂对称性分裂对称性卵裂球均等性卵裂球均等性012012Day2卵裂期评分卵裂期评分分裂对称性卵裂球均等性012012Day2卵裂期评分63Day3细胞数细胞数Edwards提出人早期胚胎提出人早期胚胎有相对固定的发育速度有相对固定的发育速度超出或低于此速度，均影超出或低于此速度，均影响后续发育响后续发育大量文献：细胞数大量文献：细胞数种种植率、囊胚形成率！植率、囊胚形成率！Day3 细胞数Edwards提出人早期胚胎有相对固定的发育64i Alikani M.Hum Reprod 2000i Alikani M.Hum Reprod 20065碎片碎片：无细胞核，细胞膜包裹的细胞外胞碎片：无细胞核，细胞膜包裹的细胞外胞浆结构（浆结构（Alikani，1999）细胞代谢或分裂过程异常造成的凋亡过程细胞代谢或分裂过程异常造成的凋亡过程染色体异常造成碎片？染色体异常造成碎片？仅仅是目前我们对碎片的认识仅仅是目前我们对碎片的认识碎片碎片：无细胞核，细胞膜包裹的细胞外胞浆结构（Alikan66“细胞细胞”大小与大小与DNADay2胚胎，卵裂球胚胎，卵裂球65-70um小于小于45um2有有DNA大于大于45um67有有DNADay3胚胎，卵裂球胚胎，卵裂球55-60um小于小于40um3有有DNA大于大于40um66有有DNA45um35um“细胞”大小与DNADay2胚胎，卵裂球65-70um45u67碎片对胚胎发育的后续影响碎片对胚胎发育的后续影响局部融合局部融合Day4可能发可能发生局部融合生局部融合部分卵裂球和部分卵裂球和碎片排除在外碎片排除在外碎片对胚胎发育的后续影响局部融合Day4可能发生局部融合68局部融合局部融合囊胚质量下降囊胚质量下降局部融合囊胚质量下降69卵裂球对称性卵裂球对称性文献非常少文献非常少卵裂球严重不均匀的胚胎种植率下降卵裂球严重不均匀的胚胎种植率下降Hardarson，2001卵裂球对称性文献非常少70多核现象多核现象可能与染色体异常有关可能与染色体异常有关囊胚形成率下降囊胚形成率下降种植率下降种植率下降妊娠率下降妊娠率下降VanRoyen，2003Magli，2007多核现象可能与染色体异常有关71Day3胚胎形态学评价胚胎形态学评价细胞数与碎片含量，哪个指标更重要细胞数与碎片含量，哪个指标更重要？在所有形态学指标中，细胞数是在所有形态学指标中，细胞数是最重要的独立的预测胚胎活性的最重要的独立的预测胚胎活性的指标！指标！RonitMachtinger，2013Day3 胚胎形态学评价细胞数与碎片含量，哪个指标更重要？在72细胞数与囊胚形成率细胞数与囊胚形成率北京协和医院妇产科P U M C HO B G Y N细胞数与囊胚形成率北 京 协 和 医 院 妇 产 科P U 73碎片、细胞数与碎片、细胞数与day6囊胚形成囊胚形成北京协和医院妇产科P U M C HO B G Y N碎片、细胞数与day6囊胚形成北 京 协 和 医 院 妇 产74卵裂期胚胎评估卵裂期胚胎评估细胞数少于8个种植能力下降多于8个种植率可能下降碎片:定义:d2 45m;d3 40m分级：少量(25%)不需要记录碎片位置多核现象:一个卵裂球内超过一个细胞核;d2评估细胞大小:2-,4-,和 8-cell阶段应均匀卵裂期胚胎评估细胞数75卵裂期胚胎分级卵裂期胚胎分级GradeRatingDescription1Good 25%)cell size not stage-specific evidence of multinucleation卵裂期胚胎分级GradeRatingDescription176day4胚胎形态（桑葚胚）胚胎形态（桑葚胚）相关文献很少相关文献很少GradeAF(2011)致密化与滋养层的形成有重要关系致密化与滋养层的形成有重要关系致密化非常重要致密化非常重要day4胚胎形态（桑葚胚）相关文献很少致密化非常重要77Day4胚胎分级胚胎分级GradeRatingDescription1GoodEntered into a 4th round of cleavageEvidence of compaction that involves virtually all the embryo volume2FairEntered into a 4th round of cleavageCompaction involves the majority of the volume of the embryo3PoorDisproportionate compaction of embryo,with some cells remaining as discrete blastomeresDay4 胚胎分级GradeRatingDescriptio78囊胚质量评价囊胚质量评价Gardner评分方法评分方法16期期6期5期4期3期2期囊胚质量评价Gardner评分方法6期5期4期3期2期79AA80BB81CC82AA83BB84CC85囊胚形态学评估囊胚形态学评估滋养细胞层重要？滋养细胞层重要？内细胞团重要？内细胞团重要？囊胚形态学评估滋养细胞层重要？86第第5天新鲜天新鲜SET的回顾性研究的回顾性研究形态学指标（扩张程度、形态学指标（扩张程度、ICM和和TE）对于）对于持续妊娠持续妊娠/活产的预测价值活产的预测价值2006年年1月至月至2010年年6月的回顾性分析月的回顾性分析每每ET的持续妊娠或活产率的持续妊娠或活产率Ahlstrom2011第5天新鲜SET的回顾性研究形态学指标（扩张程度、ICM和T87结果结果形态指标形态指标分级分级妊娠率妊娠率（）（）P扩张程度扩张程度338.1448.40.021内细胞团内细胞团A46.8B34.00.024C14.3滋养细胞层滋养细胞层A52.0B32.40.0001C8.0滋养层形态比滋养层形态比ICM的预测价值更高的预测价值更高结果形态指标分级妊娠率（）P扩张程度338.1448.4088囊胚分级囊胚分级GradeRatingDescriptionStage of development1早期2囊胚3扩张囊胚4部分或完全孵出囊胚Inner Cell Mass1GoodProminent,easily discernible,with many cells that are compacted and tightly adhered2FairEasily discernible with many cells loosely grouped together3PoorDifficult to discern,with few cellsTrophecto-derm1GoodMany cells forming a cohesive epithelium2FairFew cells forming a loose epithelium3PoorVery few cells囊胚分级GradeRatingDescriptionStag89小结小结胚胎培养体系是培养室环境、培养箱、胚胎培养体系是培养室环境、培养箱、培养液和人员操作的综合体培养液和人员操作的综合体胚胎形态学评估是胚胎选择的重要方法胚胎形态学评估是胚胎选择的重要方法多种胚胎形态学指标有不同的意义，但多种胚胎形态学指标有不同的意义，但已经逐渐达成共识已经逐渐达成共识小结胚胎培养体系是培养室环境、培养箱、培养液和人员操作的综合90谢谢!谢谢!91