第二章药物的鉴别试验10课件

第二章第二章 药物的鉴别试验药物的鉴别试验（Identification Test）金郁华东理工大学药学院华东理工大学药学院20242024年年7 7月月1414日日-主要内容主要内容 鉴别方法鉴别方法 鉴别试验的项目和原理鉴别试验的项目和原理23 3 鉴别试验的概念鉴别试验的概念3 1 小结和习题小结和习题5 鉴别试验的条件鉴别试验的条件3 4-一、概述一、概述鉴别试验鉴别试验的的定义定义鉴别试验鉴别试验的的对象对象 根据药物的分子结构、理化性质，采用根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学方法来判断药化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪。它是药品质量检验工作中的物的真伪。它是药品质量检验工作中的首项任务。首项任务。有标签内容的药物有标签内容的药物不是对未知物进行定性分析不是对未知物进行定性分析-鉴别项下规定的试验方法，仅适用于鉴别药物的真伪；对于原料鉴别项下规定的试验方法，仅适用于鉴别药物的真伪；对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认。药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认。二、鉴别试验的项目二、鉴别试验的项目（1 1）性性 状状（2 2）一般鉴别试验一般鉴别试验（3 3）专属性鉴别试验专属性鉴别试验-药物的性状（药物的性状（description）反映了药物特有的物理性质，一般）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。包括外观、溶解度和物理常数等。（一）性状（一）性状卡莫司汀卡莫司汀 【性状性状】本品为无色或微黄或微黄绿色结晶或结晶本品为无色或微黄或微黄绿色结晶或结晶性粉末；无臭。性粉末；无臭。扑米酮扑米酮 【性状性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，味微苦。本品为白色结晶性粉末；无臭，味微苦。卡波姆卡波姆 【性状性状】本品为白色疏松状粉末；有特征性微臭；有本品为白色疏松状粉末；有特征性微臭；有引湿性。引湿性。1外观外观 指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。-2.溶解度溶解度 在一定程度上反映了药品的纯度。药典采用在一定程度上反映了药品的纯度。药典采用“极易溶、易溶、溶解、极易溶、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述药品在不同溶剂中的溶解来描述药品在不同溶剂中的溶解性能。性能。溶解性能 含 义 极易溶解溶质1g（ml）能在溶剂不到1ml中溶解 溶 解溶质1g（ml）能在溶剂1ml不到10ml中溶解 易 溶溶质1g（ml）能在溶剂10ml不到30ml中溶解 略 溶溶质1g（ml）能在溶剂30ml不到100ml中溶解 微 溶溶质1g（ml）能在溶剂100ml不到1000ml中溶解极微溶解溶质1g（ml）能在溶剂1000ml不到10000ml中溶解几乎不溶或不溶溶质1g（ml）在溶剂10000ml中不能溶解-去乙酰毛花苷去乙酰毛花苷 本品在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在水或氯仿中几乎不溶。本品在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在水或氯仿中几乎不溶。丙硫氧嘧啶丙硫氧嘧啶 本品在乙醇中略溶，在水中极微溶解，在氢氧化钠试液或氨试液中本品在乙醇中略溶，在水中极微溶解，在氢氧化钠试液或氨试液中溶解。溶解。丙酸氯倍他索丙酸氯倍他索 本品在氯仿中易溶，在醋酸乙酯中溶解，在甲醇和乙醇中略溶，在本品在氯仿中易溶，在醋酸乙酯中溶解，在甲醇和乙醇中略溶，在水中不溶。水中不溶。-3.物理常数物理常数 不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。药品的纯杂程度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。碘值、吸收系数。-（1）熔熔 点点1测定易粉测定易粉碎的固体碎的固体药品药品。2测定不易粉碎测定不易粉碎的固体药品的固体药品(如脂肪、脂如脂肪、脂肪酸、石蜡、肪酸、石蜡、羊毛脂等羊毛脂等)。3测定凡士林或测定凡士林或其他类似物质其他类似物质。熔点：固体熔点：固体 液体的温度液体的温度-（2）比旋度）比旋度比旋度：在一定波长与温度下，偏振光透过长比旋度：在一定波长与温度下，偏振光透过长ldm且每且每1ml中含有旋光性中含有旋光性物质物质1g的溶液时测得的的溶液时测得的旋光度旋光度称为比旋度。是反映手性药物特性及其纯度称为比旋度。是反映手性药物特性及其纯度的主要指标。的主要指标。固体样品 计算公式Dt=(100)(LC)液体样品 计算公式Dt=()(Ld)u t 测定 时 的 温 度,一般为 20；u D 钠 光 谱 的D线(589.3nm)；u C 每 100m L 溶 液中含有被测物质的重量(按干燥品或无 水物计算)单位g/ml;u L 测 定 管 长度,单位是dm;u d 液 体 的 相 对 密度；u 测 得 的旋 光 度-（3）吸收系数）吸收系数替硝唑替硝唑 2-甲基甲基-1-2-（乙基磺酰基）乙基（乙基磺酰基）乙基-5-硝基硝基-1H咪唑咪唑吸收系数吸收系数 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含中约含12g的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法(附附 录录 A)，在，在317nm的波长处测的波长处测定吸收度，吸收系数定吸收度，吸收系数为为352378。在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。液层厚度时的吸收度称为吸收系数。有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者是中国药典有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者是中国药典收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓度为收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓度为1 1（W/V)W/V)，厚度为，厚度为lcmlcm时的吸光度，用时的吸光度，用 表示。表示。-一般鉴别试验（一般鉴别试验（general identification test)是依据某一类药是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪真伪。（二）一般鉴别试验（二）一般鉴别试验无机药物无机药物有机药物有机药物阴离子和阳离子的特殊反应阴离子和阳离子的特殊反应典型的官能团反应典型的官能团反应u只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物u数种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在不适用数种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在不适用-有机氟化物有机氟化物无机酸根无机酸根有机酸盐有机酸盐芳香第一胺芳香第一胺无机金属盐无机金属盐托烷生物碱类托烷生物碱类药品药品几类典型一般鉴别试验几类典型一般鉴别试验-鉴别原理 苯巴比妥及其钠盐、司可巴比妥、异戊巴比妥及其钠盐等原料药及其制剂的分子结构中均以丙二酰脲为母体，都能在弱碱性溶液中与硝酸银作用生成二银盐的白色沉淀；也能与铜吡啶试液作用显紫色。(1)(1)丙二酰脲类丙二酰脲类-巴比妥类药物的基本结构通式巴比妥类药物的基本结构通式-典型药物典型药物己琐巴比妥己琐巴比妥司可巴比妥司可巴比妥硫喷妥钠硫喷妥钠苯巴比妥苯巴比妥异戊巴比妥巴比妥-I I 与银盐反应与银盐反应丙二酰脲类丙二酰脲类取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2分钟，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。-II II 与铜盐反应与铜盐反应丙二酰脲类丙二酰脲类取供试品约50mg，加吡啶溶液(110)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml,即显紫色或生成紫色沉淀。-取供试品约取供试品约7mg，照，照氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法（附录（附录 C）进行有机破坏，用水）进行有机破坏，用水20ml与与0.01mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，待燃烧完毕后，充分振摇；为吸收液，待燃烧完毕后，充分振摇；取吸收液取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加，再加12醋酸钠的稀醋酸溶液醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色；同时做，即显蓝紫色；同时做空白对照试验。空白对照试验。鉴别方法鉴别方法茜素氟蓝茜素氟蓝蓝紫色蓝紫色（2）有机氟化物）有机氟化物-例：例：氟康唑氟康唑 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品，加乙醇制成每取本品，加乙醇制成每1ml1ml中含中含200g200g的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法(附录附录 A)A)测定，测定，在在261nm 261nm 与与267nm267nm的波长处有最大吸收，在的波长处有最大吸收，在264nm264nm的波长处有最小吸收。的波长处有最小吸收。(2)(2)本品的红外本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致光吸收图谱应与对照品的图谱一致。(3)(3)本品本品显有机氟化物的鉴别反应显有机氟化物的鉴别反应(附录附录)。2-(2,4-二氟苯基)-1,3-双(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-丙醇-（3）有机酸盐）有机酸盐包括：水杨酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐-水杨酸盐鉴别方法：（1）取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即 显紫色。（反应式）（2）取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨 酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。-例：例：水杨酸镁水杨酸镁 【鉴别鉴别】(1)(1)取含量测定项下的溶液，照分光光取含量测定项下的溶液，照分光光度法（附录度法（附录 A A）测定。在）测定。在296 nm296 nm的波长处有的波长处有最大吸收。最大吸收。(2)(2)本品的红外光吸收图谱应与本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集对照的图谱（光谱集6060图）一致。图）一致。(3)(3)本品的水溶液显镁盐与水杨酸盐的鉴别反应本品的水溶液显镁盐与水杨酸盐的鉴别反应（附录（附录）。）。-酒石酸盐酒石酸盐鉴别方法-银镜反应：供试品的中性溶液，置试管中，加硝酸银试液数滴，即发生白色沉淀，用少量氨试液使沉淀溶解后，将试管置水浴中，银即游离，附在试管内形成银镜。-例：例：酒石酸美托洛尔酒石酸美托洛尔 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品，加乙醇制成每取本品，加乙醇制成每1ml 1ml 中含中含20g 20g 的溶液，照分光光度法（附的溶液，照分光光度法（附 录录 A A）测定，在测定，在224nm 224nm 的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。(2)(2)取本品约取本品约0.3g0.3g，置洁净的试管中，加水，置洁净的试管中，加水10ml10ml溶溶解，加硝酸银试液过量，即生成解，加硝酸银试液过量，即生成 白色沉淀，白色沉淀，滴加氨试液恰使沉淀溶解后，将试管置水浴中滴加氨试液恰使沉淀溶解后，将试管置水浴中加热，银即游离并附在管的内壁成银镜。加热，银即游离并附在管的内壁成银镜。-（4）芳香第一胺）芳香第一胺取供试品约5mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1 mol/L 亚硝酸钠液数滴，滴加碱性萘酚试液数滴视供试品不同，发生由橙黄到猩红色沉淀。普鲁卡因，苯佐卡因及磺胺类药物均呈此反应。有一个氨基与苯环直接相连-氨苯砜氨苯砜 【鉴别鉴别】(1)(1)本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）。）。(2)(2)取本品，加甲醇制成每取本品，加甲醇制成每1ml 1ml 中含中含5g5g的溶液，照分的溶液，照分光光度法（附录光光度法（附录 A A）测定，）测定，在在261nm261nm与与296nm 296nm 的波长的波长处有最大吸收。其吸收度分别为处有最大吸收。其吸收度分别为0.350.350.380.38与与0.590.590.620.62（橙黄色）（橙黄色）-（5）托烷生物碱）托烷生物碱生物碱 生物碱（alkaloid）是存在于生物体（主要为植物）中的一类含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性。按照生物碱的基本结构，已可分为60类左右。主要类型：有机胺类(麻黄碱、益母草碱、秋水仙碱)、吡咯烷类(古豆碱、千里光碱、野百合碱)、吡啶类(菸碱、槟榔碱、半边莲碱)、异喹啉类(小檗碱、吗啡、粉防己碱)、吲哚类(利血平、长春新碱、麦角新碱)、莨菪烷类(阿托品、东莨菪碱)、咪唑类(毛果芸香碱)、喹唑酮类(常山碱)、嘌呤类(咖啡碱、茶碱)、甾体类(茄碱、浙贝母碱、澳洲茄碱)、二萜类(乌头碱、飞燕草碱)、其它类(加兰他敏、雷公藤碱)。-莨菪（liangdang)类水解托烷类托烷类-COOHCHCH2OH+NO2NO2O2NH2OKOHNOOKNO2O2NCHCH2OHCO2+（深紫色）（深紫色）-例：例：氢溴酸山莨菪碱氢溴酸山莨菪碱 【鉴别鉴别】(1)(1)本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录）(2)(2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集287 287 图）一致图）一致(3)(3)本品的水溶液显溴化物的鉴别反应（附录本品的水溶液显溴化物的鉴别反应（附录）。）。-（6 6）无机金属盐）无机金属盐（）钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应（）钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应 焰色反应焰色反应是某些金属或它们的挥发性化合物在无色火焰中灼烧时使火焰呈现特征的颜色的反应。灼烧金属或它们的挥发性化合物时，原子核外的电子吸收一定的能量，从基态跃迁到具有较高能量的激发态，激发态的电子回到基态时，会以一定波长的光谱线的形式释放出多余的能量，从焰色反应的实验里所看到的特殊焰色，就是光谱谱线的颜色。每种元素的光谱都有一些特征谱线，发出特征的颜色而使火焰着色，根据焰色可以判断某种元素的存在。-取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显各离子的特征颜色。钠离子显鲜黄色，钾离子显紫色，钙离子显砖红色。-例：例：氨苄西林钠氨苄西林钠 【鉴别鉴别】(1)(1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主峰保留时间应与溶液的主峰保留时间应与 对照品溶液的主峰保留时对照品溶液的主峰保留时间一致。间一致。(2)(2)本品的红外光吸收图谱应与氨苄西本品的红外光吸收图谱应与氨苄西林林 三水物的对照图谱（光谱集三水物的对照图谱（光谱集658658图）一致。图）一致。(3)(3)本品显钠盐的火焰反应（附录本品显钠盐的火焰反应（附录）。）。-（3）铵盐加碱加热后放出氨或胺的反应测定原理酰胺、内酰胺、磺酰胺、胺类和铵盐等能与酸生成盐的药物在过量碱作用下水解，受热时放出氨或胺、有氨或胺臭，并可使湿润的红色石蕊试纸变蓝。氨与硝酸亚汞反应析出单质汞。-NH4+OH-NH3+H2O RCONH2+NaOH RCOONa+NH3RNH2HX+NaOH RNH2+NaX+H2O-（7 7）无机酸根）无机酸根（1）氯化物 取供试品溶液，加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；u分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成。u如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。-取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰,混匀,加硫酸湿润,缓缓加热，即发生氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。-例例 盐酸妥卡尼盐酸妥卡尼 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约50mg50mg，加水，加水4ml4ml溶解后，加溶解后，加盐酸溶液盐酸溶液(9100)1ml(9100)1ml、重氮对硝基苯胺试液、重氮对硝基苯胺试液2ml2ml、氢、氢 氧化钠试液氧化钠试液4ml4ml与正丁醇与正丁醇2ml2ml，振摇，振摇，静置俟分层，正丁醇层显红色。静置俟分层，正丁醇层显红色。(2)(2)本品的水溶液显氯化物的鉴别反应本品的水溶液显氯化物的鉴别反应(附录附录)。-（2）硫酸盐取供试品溶液，加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别)。-例例硫酸特布他林硫酸特布他林 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约1mg1mg，置试管中，加水，置试管中，加水1ml1ml溶解，加缓冲溶解，加缓冲液液(pH9.5)(pH9.5)(取二羟甲基氨基甲烷取二羟甲基氨基甲烷36.3g36.3g，加水溶解并稀释，加水溶解并稀释至至1000ml1000ml，用，用1mol/L1mol/L盐酸溶液调节盐酸溶液调节pHpH值至值至9.5)5ml9.5)5ml，加新，加新鲜制备的鲜制备的2 24-4-氨基安替比林溶液氨基安替比林溶液0.5ml0.5ml及新鲜制备的铁氰及新鲜制备的铁氰化钾溶液化钾溶液(225)2(225)2滴，混和，置水浴中加热，溶液显紫红滴，混和，置水浴中加热，溶液显紫红色。色。(2)(2)取本品，加取本品，加0.1mol/L0.1mol/L盐酸溶液制成每盐酸溶液制成每1ml1ml中含中含0.1mg0.1mg的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法(附录附录 A)A)测定，在测定，在276nm276nm的的波长处有最大吸收。波长处有最大吸收。(3)(3)本品的红外光吸收图谱应与对照本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致品的图谱一致(附录附录 C)C)，如不一致时，再取本品适量，如不一致时，再取本品适量，溶于无醛甲醇中，置水浴蒸干后测定溶于无醛甲醇中，置水浴蒸干后测定。(4)(4)本品的水溶液本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应显硫酸盐的鉴别反应(附录附录)。-（3）硝酸盐（1）取供试品溶液，置试管中，加等量的硫酸，注意混合，冷后，沿管壁加硫酸亚铁试液，使成两液层，接界面显棕色。（2）取供试品溶液，加硫酸与铜丝(或铜屑)，加热，即发生红棕色的蒸气。（3）取供试品溶液，滴加高锰酸钾试液，紫色不应褪去(与亚硝酸盐区别)。-（三）专属鉴别试验（三）专属鉴别试验 药物的专属鉴别试验（药物的专属鉴别试验（specific identification test)是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。-PhenylbarbitalSecobarbital5BarbitalThiopental Sodium 实例1-巴比妥类药物丙二酰脲母核-基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819实例2-甾体激素类药物-一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别鉴别不同药物类别的区别不同药物类别的区别。专属鉴别试验，则是在专属鉴别试验，则是在一般鉴别试验的基础一般鉴别试验的基础上，上，利用各种利用各种药物的化学结构差异药物的化学结构差异，来鉴别药物，以区别，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终达到最终确证药物真伪确证药物真伪的目的。的目的。-三三三三、鉴鉴鉴鉴 别别别别 方方方方 法法法法化学鉴别法化学鉴别法化学鉴别法化学鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法生物学法生物学法 HPLC、GC鉴别法鉴别法 薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法 纸色谱鉴别法纸色谱鉴别法 呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法 色谱鉴别法色谱鉴别法 气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 测定生成物的熔点测定生成物的熔点荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法-（一）、化学鉴别法化学鉴别法是根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反应或官能团反应生成不同颜色，不同沉淀，放出不同气体，呈现不同荧光，从而做出定性分析结论的方法。特点：反应迅速、现象明显-呈色反应 沉淀生成反应 生成气体反应 生成荧光反应 褪色反应 生成衍生物测定熔点化学鉴别法-呈色反应1.呈呈色色反反应应鉴鉴别别法法 指指供供试试品品溶溶液液中中加加入入适适当当的的试试剂剂溶溶液液，在在一一定定条条件件下进行反应，生成易于观测的有色产物。下进行反应，生成易于观测的有色产物。（1）三氯化铁呈色反应：）三氯化铁呈色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基用于酚羟基或水解后产生酚羟基（2）异羟肟酸铁反应：）异羟肟酸铁反应：多用于芳酸及其酯类、酰胺类多用于芳酸及其酯类、酰胺类（3）茚三酮呈色反应：）茚三酮呈色反应：用于结构中含有脂肪氨基药物用于结构中含有脂肪氨基药物（4）重氮化）重氮化-偶合显色反应：偶合显色反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基（5）氧化还原显色反应及其它颜色反应）氧化还原显色反应及其它颜色反应-沉淀生成反应沉淀生成反应指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成不同颜色的沉淀。（1 1）与重金属离子的沉淀反应）与重金属离子的沉淀反应（2 2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应：）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应：多多用用于于生生物物碱碱及及其其盐盐，具具有有芳芳香香环环的的有有机机碱碱及及其盐。其盐。（3 3）其它沉淀反应。）其它沉淀反应。-1 1）化学鉴别法：）化学鉴别法：呈色反应与沉淀呈色反应与沉淀 呋塞米呋塞米 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约25mg25mg，加水，加水5ml 5ml，滴加氢，滴加氢氧化钠试液使恰溶解，加硫酸铜氧化钠试液使恰溶解，加硫酸铜 试液试液1 12 2滴，即滴，即生成绿色沉淀。生成绿色沉淀。(2)(2)取本品取本品25mg25mg，置试管中，加，置试管中，加乙醇乙醇2.5ml 2.5ml 溶解后，沿管壁滴加对二甲氨基苯甲溶解后，沿管壁滴加对二甲氨基苯甲醛醛 试液试液2ml 2ml，即显绿色，渐变深红色。，即显绿色，渐变深红色。(3)(3)取取本品，加本品，加0.4 0.4 氢氧化钠溶液制成每氢氧化钠溶液制成每1ml 1ml 中含中含5g5g的溶液，照分光光度法（的溶液，照分光光度法（附录附录 A A）测定，）测定，在在228nm228nm与与271nm 271nm 的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。-生成荧光反应生成荧光反应常用的荧光发射形式有以下类型：1）药物本身可在可见光下发射荧光；2）药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光；3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。-1 1）化学鉴别法）化学鉴别法:荧光反应荧光反应 硫酸奎宁硫酸奎宁 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约20mg20mg，加水，加水20ml20ml溶解后，溶解后，分取溶液分取溶液10ml10ml，加稀硫酸使成酸，加稀硫酸使成酸 性，即显蓝色荧性，即显蓝色荧光。光。(2)(2)取鉴别取鉴别(1)(1)项剩余的溶液项剩余的溶液5ml5ml，加溴试液，加溴试液3 3滴与氨试液滴与氨试液1ml 1ml，即显翠绿色。，即显翠绿色。(3)(3)取鉴别取鉴别(1)(1)项剩余的溶液项剩余的溶液5ml5ml，加盐酸使成酸性后，加氯化钡，加盐酸使成酸性后，加氯化钡试液试液1ml1ml，即发生白色沉淀。，即发生白色沉淀。(4)(4)本品的红外光本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集吸收图谱应与对照的图谱（光谱集488488图）一致。图）一致。-生成气体反应生成气体反应 1)大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气；2)化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；3)含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。-1 1）化学鉴别法：）化学鉴别法：生成气体反应生成气体反应 氯氮平氯氮平【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约100mg 100mg，加碳酸钠等，加碳酸钠等量搅拌均匀，置干燥试管中灼烧，管口覆量搅拌均匀，置干燥试管中灼烧，管口覆以用以用1 11,2-1,2-萘醌萘醌-4-4-磺酸钠溶液湿润的试磺酸钠溶液湿润的试纸，试液显紫蓝色。纸，试液显紫蓝色。(2)(2)本品的红外光吸本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集收图谱应与对照的图谱（光谱集504 504 图）图）一致。一致。-褪色反应褪色反应 具有不饱和键与高锰酸钾或溴水反应，如司可巴比妥钠。氧化还原反应，如碘液等。-1 1）化学鉴别法：）化学鉴别法：使试剂褪色的鉴别反应使试剂褪色的鉴别反应 维生素维生素 【鉴别鉴别】取本品取本品0.2g0.2g，加水，加水10ml10ml溶解后，照下述溶解后，照下述方法试验。方法试验。(1)(1)取溶液取溶液5ml 5ml，加硝酸银试液，加硝酸银试液0.5ml 0.5ml，即生成银的黑色沉淀。，即生成银的黑色沉淀。(2)(2)取溶液取溶液5ml 5ml，加二氯靛酚钠试液，加二氯靛酚钠试液1 1 2 2 滴，试液的颜滴，试液的颜色即消失。色即消失。(3)(3)本品的红外光吸收图谱应与对本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集照的图谱（光谱集450450图）一致。图）一致。-生成衍生物测定熔点生成衍生物测定熔点利用甾醇、甾酮类药物与一些试剂反应生成酯、缩氨基脲或水解甾体生成相应母体，测定熔点。-（二）、光谱鉴别法（二）、光谱鉴别法定义：是以物质的物理和物理化学性质为基础的分析方法，需要特殊仪器。具有灵敏度高、信息量大等特点。-（二）、光谱鉴别法（二）、光谱鉴别法1.紫外可见光谱鉴别法分子的紫外-可见吸收光谱法是基于分子内电子跃迁产生的吸收光谱进行分析的一种常用的光谱分析法。分子在紫外-可见区的吸收与其电子结构紧密相关。-常用方法：常用方法：u测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长u规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度u规定吸收波长和吸收系数法规定吸收波长和吸收系数法u规定那个吸收波长和吸光度比值法规定那个吸收波长和吸光度比值法u经化学处理后测定其反应产物的吸收光谱值经化学处理后测定其反应产物的吸收光谱值-例例1 1：布洛芬布洛芬 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品，加取本品，加0.40.4氢氧化钠溶液制成每氢氧化钠溶液制成每1ml1ml中含中含0.25mg0.25mg的溶液，照的溶液，照 分光光度法（附录分光光度法（附录 A A）测定，）测定，在在265nm265nm与与273nm273nm的波长处有最大吸收的波长处有最大吸收，在在245nm245nm与与271nm 271nm 的波长处有最小吸收的波长处有最小吸收，在在259nm259nm的波长处有一肩峰。的波长处有一肩峰。(2)(2)本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集8585图）一致。图）一致。-例例2 2：维生素维生素2 2 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约1mg 1mg，加水，加水100ml 100ml 溶解后，溶解后，溶液在透射光下显淡黄绿色并溶液在透射光下显淡黄绿色并 有强烈的黄绿色荧有强烈的黄绿色荧光；分成二份，一份中加无机酸或碱溶液，荧光即光；分成二份，一份中加无机酸或碱溶液，荧光即消失；另一份中加消失；另一份中加 连二亚硫酸钠结晶少许，摇匀连二亚硫酸钠结晶少许，摇匀后，黄色即消褪，荧光亦消失。后，黄色即消褪，荧光亦消失。(2)(2)取含量测定取含量测定项下的溶液，照分光光度法（附录项下的溶液，照分光光度法（附录 A A）测定，在）测定，在267nm267nm、375nm375nm、与与444nm 444nm 的波长处有最大吸收的波长处有最大吸收。375nm375nm波长处的吸收度与波长处的吸收度与267nm267nm波长处的吸收度的比波长处的吸收度的比值应值应 为为0.310.310.330.33；444nm444nm波长处的吸收度与波长处的吸收度与267nm267nm波长处的吸收度的比值应为波长处的吸收度的比值应为0.360.360.390.39。-2.红外光谱法红外光谱法 专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）。专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）。主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于结构复杂、主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于结构复杂、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。鉴别方法：中国药典和鉴别方法：中国药典和BP(2000）均采用标准图谱对照法。）均采用标准图谱对照法。中国药典收载的光谱图，系用分辨率为中国药典收载的光谱图，系用分辨率为2cm-1条件绘制，基线条件绘制，基线 一般控制在一般控制在90%透光率以上，供试品取样量一般控制在使其最强透光率以上，供试品取样量一般控制在使其最强吸收峰在吸收峰在10透光率以下。透光率以下。-红外光区的划分 红外光谱在可见光区和微波光区之间，波长范围约为 0.75-1000m，根据仪器技术和应用不同，习惯上又将红外光区分为三个区：近红外光区（0.75-2.5m）中红外光区（2.5-25m）远红外光区（25-1000m）波长与波数之间的关系为：/(cm-1)=104/(m）-红外光谱法的一般特点红外光谱法的一般特点1.专属性、专属性、2.测定快速、测定快速、3.不破坏试样、不破坏试样、4.试样用量少、试样用量少、5.操作简便、操作简便、6.能分析各种状态的试样、能分析各种状态的试样、7.分析灵敏度较低、定量分析误差较大分析灵敏度较低、定量分析误差较大 定性的巨人、定量的矮子定性的巨人、定量的矮子-如压片法如下：取供试品约1mg，置玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉约200mg，充分研磨，移置于直径为13mm的压模中，使铺布均匀，压模与真空泵相连，抽气约2min后，加压至0.81GPa，保持25min，除去真空，取出制成的供试片，用目视检查应均匀，无明显颗粒。将供试片置于供试品的样品光路中，并扣除用同法制成的空白溴化钾或氯化钾片的背景，录制光谱图。要求空白片的光谱图的基线应大于75%透光率；除去3440cm-1及1630cm-1附近因残留附着水而呈现一定的吸收峰外，其他区域不应出现大于基线3%透光率的吸收谱带。试样制备-IR对样品的要求对样品的要求试样纯度应大于试样纯度应大于98%试样不应含水（结晶水或游离水）试样不应含水（结晶水或游离水）水有红外吸收，与羟基峰干扰，而且会侵蚀吸收池的盐窗。水有红外吸收，与羟基峰干扰，而且会侵蚀吸收池的盐窗。所用试样应当经过干燥处理所用试样应当经过干燥处理试样浓度和厚度要适当试样浓度和厚度要适当(使最强吸收透光度在使最强吸收透光度在520%之间之间)-3.3.光谱鉴别法光谱鉴别法 ：近红外光谱：近红外光谱 系通过测定被测物质在近红外谱区系通过测定被测物质在近红外谱区750-750-2500nm2500nm（12800-4000cm12800-4000cm-1-1)的特征光谱并利用适宜的的特征光谱并利用适宜的化学计量学方法提取相关信息后，对被测物质进行定化学计量学方法提取相关信息后，对被测物质进行定性，定量分析的一种分析技术。性，定量分析的一种分析技术。-4.光谱鉴别法：原子吸收 利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度可以进行定性，定量分析-原子吸收光谱分析 的特点：灵敏度高：其检出限可达 10-9 g/ml(某些元素可更高)；选择性好（分析不同元素时，选用不同元素灯，提高分析的选择性）；具有较高的精密度和准确度；试样处理简单-5.5.质谱法（质谱法（mass spectrometry,MSmass spectrometry,MS）MS是在高真空状态下将被测物质离子化，按离子的质荷比(m/z)大小分离而实现物质成分和结构分析的方法。通过离子峰强度及相互关系，提供与分子结构有关的信息。-5.5.光谱鉴别法：核磁共振（光谱鉴别法：核磁共振（NMRNMR）核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)是指某些有磁矩的原子核，在静磁场中由于磁矩和磁场相互作用形成一组分裂的能级，在合适频率的射频作用下，能级间发生跃迁而出现的共振现象。1946年美国斯坦福大学的F.Bloch和哈佛大学的E.M.Purcell两个研究小组首次独立观察到核磁共振现象，为此他们两人获1952年诺贝尔物理奖。自此以后，核磁共振波谱学得到了迅猛的发展，广泛应用于工业、农业、化学、生物和医药等领域。通过测定供试品指定基团上质子峰的化学位移和偶合常通过测定供试品指定基团上质子峰的化学位移和偶合常数进行化合物的鉴别。数进行化合物的鉴别。原子核在外加磁场作用下，核磁矩与磁场相互作用导致能级分裂，能级差与外加磁场强度成正比。-（三）射线粉末衍射法（三）射线粉末衍射法X射线是一种波长很短(约为0.011 nm)的电磁波，能穿透一定厚度的物质，并能使荧光物质发光、照相乳胶感光、气体电离。在用电子束轰击金属“靶”产生的X射线中,包含与靶中各种元素对应的具有特定波长的X射线，称为特征（或标识）X射线.1912年德国物理学家劳厄(M.von Laue)提出一个重要的科学预见：晶体可以作为X射线的空间衍射光栅,即当一束 X射线通过晶体时将发生衍射，衍射波叠加的结果使射线的强度在某些方向上加强，在其他方向上减弱。分析在照相底片上得到的衍射花样，便可确定晶体结构。这一预见随即为实验所验证。1913年英国物理学家布喇格父子(W.H.Bragg,W.L.Bragg)在劳厄发现的基础上,不仅成功地测定了NaCl、KCl等的晶体结构,并提出了作为晶体衍射基础的著名公式布拉格定律-（三）射线粉末衍射法（三）射线粉末衍射法 每一种结晶物质，都有其特有的结构参数，包括点阵类型、晶胞大小、单胞中原子（离子或分子）的数目及位置等。这些结构参数在X射线的衍射花样上均有所反映。当X射线束照射在晶体样品上时，由于晶体中原子排列的规则性，各原子散射波互相干涉时，将会在某些方向互相加强，而在另一些方向上互相抵消，合成波的强度随方向而变化 化合物的晶体无论是单晶还是多晶，都有其特定的射线衍射图。衍射极大点（或线）间的距离及相对强度可以用以进行结晶物质的定性或定量分析。-（四）、色谱法（四）、色谱法 利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（色谱行为（Rf，值或保留时间）进行鉴别试验。采，值或保留时间）进行鉴别试验。采用与对照品（或经确证的已知药品）在相同的条件用与对照品（或经确证的已知药品）在相同的条件下进行色谱分离，并进行比较鉴别。下进行色谱分离，并进行比较鉴别。（）薄层色谱法（）薄层色谱法(Thin layer chromatography,TLC)（）高效液相色谱法（）高效液相色谱法 (High performance liquid chromatography,HPLC)（）气相色谱法（）气相色谱法(Gas chromatography,GC)-1.薄层色谱法薄层色谱法 一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品与对一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品与对照品主斑点的颜色与位置应一致。照品主斑点的颜色与位置应一致。一种物质在固定的条件下有固定的Rf值，不同物质在相同的条件下可有不同的Rf值。因此，未知物与已知物（标准物质）在相同条件下比较Rf值可提供定性依据。-薄层板种类薄层板种类:uG型型:在硅胶中加入在硅胶中加入10%-15%的煅石膏的煅石膏uGF-254型。型。uH型型:不含粘合剂的硅胶不含粘合剂的硅胶uHF-254型：在型：在H型硅胶中加入荧光物质，在型硅胶中加入荧光物质，在254nm或或366nm下有强烈黄绿色荧光背景。下有强烈黄绿色荧光背景。薄层板是在板基上铺一层吸附剂（或者吸干了固定相的载体）而形成的层析板。-Rf(1)(2)(3)(4)l 同等条件下供试品与对照品的对比同等条件下供试品与对照品的对比l 供试品与对照品等体积混合供试品与对照品等体积混合l 与供试品化学类似结构的样品与对照品的对比与供试品化学类似结构的样品与对照品的对比l 与供试品化学类似结构的溶液与供试品溶液混合与供试品化学类似结构的溶液与供试品溶液混合鉴别方法鉴别方法-（）薄层色（）薄层色 硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星【鉴别鉴别】(1)取本品与阿米卡星标准品适量，分别加水制取本品与阿米卡星标准品适量，分别加水制成每成每1ml 中含中含10mg的溶的溶 液，照薄层色谱法（附录液，照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶 薄层板上，以氯仿甲醇浓氨溶液水薄层板上，以氯仿甲醇浓氨溶液水(1:4:2:1)为展为展开剂，展开后，开剂，展开后，晾干，喷晾干，喷 以以0.2 茚三酮的水饱和正丁茚三酮的水饱和正丁醇溶液，在醇溶液，在100 加热加热10分钟，供试品溶液与标准品溶分钟，供试品溶液与标准品溶液液 所显主斑点的颜色与位置应相同。所显主斑点的颜色与位置应相同。-(2)HPLC一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。内标法时，要求药物与内标物峰的保留时间比值也应相同。-Method Conditions:Column:Zorbax SB C18 7.5 cm x 4.6 mm ID x 5 m Eluent A:0.1%FAEluent B:Acetonitrile(0.1%FA)Temperature:30 CFlow:1 mL/minInjection:10 mLDetector:UV 296 nmSample Prep:0.25 mg/mL in 30:70(v:v)ACN/milli-Q water Eluent A:0.1%TFAEluent B:Acetonitrile(0.1%TFA)Gradient:Time(min)%Eluent A%Eluent B0851515208020158520.18515238515 目标化合物UV Spectra 205-400nm-(3)气相色谱-2.HPLC vs GCn气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占 有机物总数的20。对于占有机物总数近80的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。n气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。n 气相色谱一般都在较高温度下进行的 而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。-）生物学法）生物学法利用微生物或实验动物进行鉴别的方法。利用微生物或实验动物进行鉴别的方法。-四、鉴别试验的条件四、鉴别试验的条件n溶液的浓度溶液的浓度n溶液的温度溶液的温度n溶液的溶液的pH值值n反应时间反应时间n干扰成分干扰成分-小结小结药品的鉴别项目药品的鉴别项目 性状性状,一般鉴别试验（有机氟化物、有机酸、无机金属盐）一般鉴别试验（有机氟化物、有机酸、无机金属盐），专属性鉴别试验，专属性鉴别试验鉴别方法鉴别方法 化学鉴别法、光谱鉴别法、化学鉴别法、光谱鉴别法、X射线粉末衍射法、色谱鉴别射线粉末衍射法、色谱鉴别法、生物学法法、生物学法-