真菌学鉴定具有一定的挑战性课件

真菌学鉴定具有一定的挑战性 学习丝状真菌的常规检查7/12/20241pumch xxl真菌学鉴定具有一定的挑战性 学习丝状真菌的常规检查7自然界真菌无处不在，是一类极为兴旺的生物，已逐渐成为微生物学科的主流部分过去被认为“污染菌”菌种，教科书中还没有致病菌描述的条件致病菌，从正常无菌部位，免疫受损病人中分离出7/12/20242pumch xxl自然界真菌无处不在，是一类极为兴旺的生物，已逐渐成为微生物学实验室技术人员必须认清该类菌种不断扩大潜在的致病性想要具备认清并鉴定医学重要真菌的能力，学习形态学和熟悉主要结构的名词，真菌基本结构和分类的规律7/12/20243pumch xxl实验室技术人员必须认清该类菌种不断扩大潜在的致病性7/31/真菌的形态学可简单分为霉菌和酵母菌酵母通常是单细胞的，由母细胞自身的一部分形成的子细胞,无菌丝称酵母型,有假菌丝称类酵母型霉菌是多细胞的菌丝交织成缠结结构称为菌丝体,有隔或无隔,分枝或不分枝,有色或无色菌丝7/12/20244pumch xxl真菌的形态学可简单分为霉菌和酵母菌7/31/20234pum真菌的繁殖靠形成的孢子、孢子分为无性或有性两种,无性孢子有两种类形：孢囊孢子和分生孢子1.产孢囊孢子的无性孢子归为接合菌亚门：例如：根霉属（Rhizopus）和毛霉属（Mueor）2.具有分生孢子是裸生的无性孢子，归为半知菌类，例如：曲霉、青霉、和皮肤真菌7/12/20245pumch xxl真菌的繁殖靠形成的孢子、孢子分为无性或有性两种,无性孢子有两单纯依靠真菌在宿主体内的寄生形态鉴定比较困难,如只能看到菌丝有无分隔,还需选择合适的培养基才能鉴定到种半知菌是常见医学真菌,其有性特征未知,鉴定主要主要依靠孢子的形态,分生孢子梗和产孢细胞的特点孢子类型的鉴定对于真菌的属种与判断极为重要7/12/20246pumch xxl单纯依靠真菌在宿主体内的寄生形态鉴定比较困难,如只能看到菌丝显微镜观察形态学是非常重要的步骤某些真菌特异性结构是在感染病症是，显微镜直接检查确诊如：血液和骨髓中荚膜组织胞浆菌 卡氏肺孢子虫菌孢囊的检测 皮炎芽生和粗球孢子菌的直接检测7/12/20247pumch xxl显微镜观察形态学是非常重要的步骤7/31/20237pumcHistoplasma capsulatum-Microscopic Morphology-Yeast,1000 x Giemsa 荚膜组织胞浆菌荚膜组织胞浆菌7/12/20248pumch xxlHistoplasma capsulatum-MicroHistoplasma capsulatum-Colonial Morphology-Mold,Sabouraud agar 组织胞浆菌组织胞浆菌25菌丝相菌丝相7/12/20249pumch xxlHistoplasma capsulatum-Colon Histoplasma capsulatum-Colonial Morphology-Yeast,Brain Heart Infusion agar with blood 组织胞浆菌组织胞浆菌37培养酵母相培养酵母相7/12/202410pumch xxl Histoplasma capsulatum-ColoHistoplasma capsulatum-Microscopic Morphology-Mold,500 x 典型舵轮状大分生孢子典型舵轮状大分生孢子7/12/202411pumch xxlHistoplasma capsulatum-Micro统计近一年内细菌室肺泡罐洗液统计近一年内细菌室肺泡罐洗液真菌培养156份,阳性标本26例，阳性率21%烟曲霉5株、曲霉属5株、黑曲霉1株(占 42%）青霉菌5株、桔青霉1株(占23%）白念株菌5株(占 19%）支孢霉属3株(占 11%）根霉属1株、链格孢1株、紫色拟青霉1株9例标本培养和涂片匀阳性(占 35%）17例标本培养阳性涂片阴性(占 65%）3例标本培养阴性涂片阳性7/12/202412pumch xxl统计近一年内细菌室肺泡罐洗液真菌培养156份,阳性标本26例直接检查的局限性和潜在的问题，直接检查阴性结果，决不能排除真菌感染错误的阳性结果也会出现：如：墨汁染色中溶解的淋巴细胞错误认 为新型隐球菌 胶原纤维被错误认为是病原体 脂肪滴容易与出芽酵母细胞混淆7/12/202413pumch xxl直接检查的局限性和潜在的问题，直接检查阴性结果，决不能排除真可疑的发现通常需要多人审查，或用第二种方法来证实强调：直接检查中一个错误的阳性结果比一个错误的阴性结果危害性更大。7/12/202414pumch xxl可疑的发现通常需要多人审查，或用第二种方法来证实7/31/2真菌标本中不常见条件致病菌或环境中污染菌的区别例：根霉的培养阳性结果可能是污染菌也 可能是致病菌 青霉菌属（Aspergillus）或透明丝孢霉和暗色丝孢霉病的病原体 这些报告的准确性与临床起始或延迟抗真菌治疗是至关重要的 7/12/202415pumch xxl真菌标本中不常见条件致病菌或环境中污染菌的区别例：根霉的培养Rhizopus species-Colonial Morphology,Sabouraud agar 根霉属根霉属7/12/202416pumch xxlRhizopus species-Colonial MoRhizopus species-Microscopic Morphology,100 x 根霉属根霉属 假根假根,孢囊梗孢囊梗,孢子囊孢子囊,孢子孢子孢子孢子7/12/202417pumch xxlRhizopus species-MicroscopicPenicillium species-Colonial Morphology,Sabouraud agar 青霉属青霉属 气生菌丝密毯状气生菌丝密毯状7/12/202418pumch xxlPenicillium species-ColonialPenicillium species-Microscopic Morphology,400 x Lactophenol cotton blue青霉属青霉属(帚狀枝帚狀枝,分生分生孢子孢子)7/12/202419pumch xxlPenicillium species-MicroscoCladosporium species Sabouraud agar支孢霉属支孢霉属:28C培养14天灰黑色短而密气生菌丝,真菌球真菌球,角膜真菌病角膜真菌病(卡氏支孢霉卡氏支孢霉)背面背面7/12/202420pumch xxlCladosporium species SabouraudCladosporium species 枝孢霉属枝孢霉属分生孢子排列成向顶性分枝孢子链分生孢子排列成向顶性分枝孢子链7/12/202421pumch xxlCladosporium species 枝孢霉属7/3真菌室培养阳性率最高的丝状真菌真菌室培养阳性率最高的丝状真菌曲霉菌属：185种，约20种被报道过，其中烟曲霉、黄曲霉是常见的致病菌可从痰、支气管灌洗液、血、脑脊液、角膜刮出物、外耳道、鼻窦、腹膜液、玻璃体中分离到7/12/202422pumch xxl真菌室培养阳性率最高的丝状真菌曲霉菌属：185种，约20种被直接镜检对痰、窦道排泄物及气管冲洗液等标本直接镜检可以看到透明分支的菌丝、脓血或痰太粘稠用10KOH处理后再进行镜检如果曲霉菌寄生与空气相通的器官中，镜检甚至可以看到曲霉头菌丝有隔，呈二叉型，45 分枝。7/12/202423pumch xxl直接镜检对痰、窦道排泄物及气管冲洗液等标本直接镜检可以看到透Aspergillus flavus-在Sabouraud葡萄糖琼脂黄曲霉菌葡萄糖琼脂黄曲霉菌生长快黄色表面粉末状生长快黄色表面粉末状7/12/202424pumch xxlAspergillus flavus-在SabouraAspergillus flavus-Microscopic Morphology,100 x Lactophenol cotton blue 黄曲霉菌黄曲霉菌(二列为主)分生孢子头、分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子7/12/202425pumch xxlAspergillus flavus-MicroscopAspergillus fumigatus-Colonial Morphology,Sabouraud葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌7/12/202426pumch xxlAspergillus fumigatus-ColoniAspergillus fumigatus-Microscopic Morphology,100 x Lactophenol cotton blue (单列单列)分生孢子头、分生孢分生孢子头、分生孢子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子7/12/202427pumch xxlAspergillus fumigatus-MicrosAspergillus niger-Colonial Morphology,Sabouraud agar黑黑曲霉菌曲霉菌(背面)7/12/202428pumch xxlAspergillus niger-Colonial MAspergillus niger-Microscopic Morphology,100 x Lactophenol cotton blue(二列为主二列为主)分生分生孢子头、分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢孢子头、分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子子7/12/202429pumch xxlAspergillus niger-Microscopi毛霉菌目条件致病性感染，主要诱因是糖尿病性酸中毒,严重烧伤,胃溃疡,血液病,淋巴瘤,血液透析,免疫缺损,长期使用抗生素等毛霉科中的几个属，如毛霉属、根霉属、犁头霉属，可以引起毛霉菌病 7/12/202430pumch xxl毛霉菌目条件致病性感染，主要诱因是糖尿病性酸中毒,严重烧伤,直接镜检活体组织标本,鼻窦抽吸物,肺支气管冲洗液（离心）可见菌丝宽大（7-15mm）透明极少分隔，似带状，通常分断裂或扭曲的，分支呈直角的菌丝提示:由于空气中常有毛霉孢子、培养时常有污染，如果直接镜检中若见到宽大无分隔菌丝则很有意义，但如果病人有糖尿病或免疫抑制，则培养阳性有意义。7/12/202431pumch xxl直接镜检活体组织标本,鼻窦抽吸物,肺支气管冲洗液（离心）7/Mucor species-Colonial Morphology,Sabouraud agar 毛霉属毛霉属7/12/202432pumch xxlMucor species-Colonial MorphMucor species-Microscopic Morphology,100 x Lactophenol cotton blue 90 度角分枝菌丝度角分枝菌丝7/12/202433pumch xxlMucor species-Microscopic MoMucor species-Microscopic Morphology,400 x Lactophenol cotton blue 大型孢子囊大型孢子囊,无囊托无囊托,无匍匐菌丝及假根无匍匐菌丝及假根7/12/202434pumch xxlMucor species-Microscopic MoRhizopus species-Colonial Morphology,Sabouraud agar 根霉属根霉属7/12/202435pumch xxlRhizopus species-Colonial MoRhizopus species-Microscopic Morphology,100 x Lactophenol cotton blue 根霉属根霉属,假根假根,孢囊梗孢囊梗,孢子囊孢子囊,孢子囊孢子孢子囊孢子7/12/202436pumch xxlRhizopus species-Microscopic镰刀菌属感染包括角膜炎,鼻窦炎,心内膜炎,骨髓炎,脑脓肿,烫伤或坏死皮肤伤口或溃疡真菌中的形态类型：透明的有隔菌丝直径：3-6um宽形态特征：菌丝有隔很难与其它透明菌丝分别，如曲霉菌7/12/202437pumch xxl镰刀菌属感染包括角膜炎,鼻窦炎,心内膜炎,骨髓炎,脑脓肿,Fusarium solani-Colonial Morphology,Sabouraud agar 茄病镰刀菌茄病镰刀菌 25C 十天后菌丝呈棉絮状十天后菌丝呈棉絮状7/12/202438pumch xxlFusarium solani-Colonial MorFusarium solani-Microscopic Morphology,100 x Lactophenol cotton blue显示茄病镰刀菌大分生显示茄病镰刀菌大分生孢子镰刀状孢子镰刀状7/12/202439pumch xxlFusarium solani-Microscopic 马尔内菲霉菌真菌中的形态类型：酵母型（裂殖）直径3um形态特征：裂殖酵母，不是出芽酵母鉴定:双相真菌 37C培养呈酵母培养呈酵母,镜下圆形橢圆形长形酵镜下圆形橢圆形长形酵 母样菌母样菌,25C 侧支分生孢子梗和分生孢子链侧支分生孢子梗和分生孢子链(帚状分枝帚状分枝)7/12/202440pumch xxl马尔内菲霉菌真菌中的形态类型：酵母型（裂殖）7/31/202Penicillium marneffei-Colonial Morphology-Mold,Sabouraud agar马尔内菲霉菌双相真菌25 菌丝相 背面背面7/12/202441pumch xxlPenicillium marneffei-ColoniPenicillium marneffei-Colonial Morphology-Yeast,Brain Heart Infusion agar with blood 双相真菌双相真菌37酵母相酵母相7/12/202442pumch xxlPenicillium marneffei-Coloni7/12/202443pumch xxl7/31/202343pumch xxl显示侧支分生孢子梗和分生显示侧支分生孢子梗和分生孢子链的马内菲青霉菌孢子链的马内菲青霉菌7/12/202444pumch xxl显示侧支分生孢子梗和分生孢子链的马内菲青霉菌7/31/207/12/202445pumch xxl7/31/202345pumch xxl显示显示37C培养呈酵母培养呈酵母镜下圆形橢圆形长形酵母样菌体镜下圆形橢圆形长形酵母样菌体7/12/202446pumch xxl显示37C培养呈酵母镜下圆形橢圆形长形酵母样菌体7/3Alternaria species-Colonial Morphology,Sabouraud agar链格孢霉链格孢霉 生长快生长快,羊毛至絨毛状羊毛至絨毛状,绿绿褐色至深褐色褐色至深褐色 背面黑色背面黑色7/12/202447pumch xxlAlternaria species-Colonial Alternaria species-Microscopic Morphology,链格孢霉链格孢霉 砖格状分生孢子及分生孢子链砖格状分生孢子及分生孢子链7/12/202448pumch xxlAlternaria species-MicroscopPaecilomyces species-Microscopic Morphology,拟青霉属拟青霉属 帚狀枝疏散帚狀枝疏散,瓶梗较长瓶梗较长,瓶孢子链较长瓶孢子链较长7/12/202449pumch xxlPaecilomyces species-MicroscPseudoallescheria boydii(Scedosporium apiospermum)-Colonial Morphology,Sabouraud agar尖端赛多孢子菌尖端赛多孢子菌白色棉花样白色棉花样,日久变烟灰日久变烟灰色色,背面灰黑色背面灰黑色7/12/202450pumch xxlPseudoallescheria boydii(ScedPseudoallescheria boydii(Scedosporium apiospermum)-Microscopic Morphology,400 x Lactophenol cotton blue分生孢子梗分生孢子梗,末端末端有厚壁的分生孢子有厚壁的分生孢子7/12/202451pumch xxlPseudoallescheria boydii(ScedNocardia asteroides-Colonial Morphology,Sabouraud agar星形奴卡菌星形奴卡菌 表面有皱褶表面有皱褶,或呈颗粒状或呈颗粒状7/12/202452pumch xxlNocardia asteroides-ColonialNocardia asteroides-Microscopic Morphology,1000 x Gram stain菌丝纤细分支不规则菌丝纤细分支不规则,有时断裂形成球菌样有时断裂形成球菌样7/12/202453pumch xxlNocardia asteroides-MicroscoNocardia asteroides-Microscopic Morphology,1000 x7/12/202454pumch xxlNocardia asteroides-MicroscoNocardia brasiliensis-Colonial Morphology,Sabouraud agar巴西奴卡菌巴西奴卡菌 高起高起皱褶皱褶,有沟纹的菌落有沟纹的菌落7/12/202455pumch xxlNocardia brasiliensis-ColoniNocardia brasiliensis-Microscopic Morphology,1000 x Modified Kinyoun Acid Fast7/12/202456pumch xxlNocardia brasiliensis-Micros机会性真菌感染的发病率和病死率急剧上升提高真菌病诊断水平是临床工作者最大难题之一真菌工作者既是职责又是挑战,我们任重而道远!7/12/202457pumch xxl机会性真菌感染的发病率和病死率急剧上升7/31/2023577/12/202458pumch xxl7/31/202358pumch xxl