第10章经典液相色谱法课件

经典典液相色液相色谱1 LSC2 LLC3ICE4SCE5TLC6PC第第10章章1.经典典液液相相色色谱法法包包括括经典典柱柱色色谱法法和和平平面面色色谱法法，是是在在常常压下下靠靠重重力力或或毛毛细作作用用输送送流流动相相的的色色谱方法。方法。经典典色色谱法法与与现代代色色谱法法的的区区别主主要要在在于于输送送流流动相相方方式式、固固定定相相种种类和和规格格、分分离离效效能能、分分析析速速度度和和检测灵敏度等方面。灵敏度等方面。经典典液液相相色色谱法法设备简单，操操作作方方便便，分分析析速速度度快快。在在药物物研研究究、食食品品化化学学、环境境化化学学、临床床化化学学、法法检分分析析及及化化学学化化工工等等领域域都都有有广广泛泛的的应用用。特特别是是在在天天然然药物物成成分分的的鉴别、分分离离等等方方面面发挥着着独独特特的的作作用，是中用，是中药鉴别的主要方法之一。的主要方法之一。2.第第1节 液液-固吸附柱色固吸附柱色谱法（法（LSC）经典典的的液液固固吸吸附附色色谱（liquid solid adsorption chromatography，LSC）是是以以吸吸附附剂为固固定定相相，有有机机溶溶剂为流流动相相，利利用用不不同同组分分在在吸吸附附剂上上吸吸附附性性能能的差异，的差异，进行分离分析的方法。行分离分析的方法。用用于于分分离离分分析析极极性性至至弱弱极极性性的的化化合合物物，不不适适用用于于分分离分析离分析强极性的物极性的物质。3.一、基本原理一、基本原理 1吸吸附附与与吸吸附附平平衡衡 吸吸附附是是指指溶溶质分分子子与与吸吸附附剂分分子子之之间所所存存在在的的某某些些化化学学作作用用力力而而被被吸吸附附在吸附在吸附剂的表面。的表面。吸吸附附过程程则是是试样中中溶溶质分分子子（X）与与流流动相相分分子子（Y）争争夺吸吸附附剂表表面面活活性性中中心心的的过程程，即即为竞争吸附争吸附过程（程（图10-1）。）。图10-1 10-1 吸附色吸附色谱示意示意图m.m.流流动相相 a.a.吸吸附附剂 Xm.Xm.流流动相相中中溶溶质分分子子 Ym.Ym.流流动相相分分子子 Xa.Xa.被吸附的溶被吸附的溶质分子分子 4.吸附平衡常数:由于流动相分子是大量的,所以Ym/Ya 可视为常数。（10-2）为吸吸附附剂的的表表面面积，为流流动相相的的体体积，Cs为溶溶质在在固固定定相相的的浓度度，Cm为溶溶质在在流流动相相中中的的浓度度。吸吸附附平平衡衡常常数数K是是与与组分分的的性性质、吸吸附附剂和和流流动相相的的性性质与与温温度度有有关关的的一一个个常数。常数。K值小小，说明明该物物质被固定相吸附得不牢固，易被流被固定相吸附得不牢固，易被流动相相分子解吸附，在固定相中滞留分子解吸附，在固定相中滞留时间短，在柱中短，在柱中移移动速率快速率快，先流出色先流出色谱柱；若柱；若K值大大，说明明该物物质被吸附得牢固，在固被吸附得牢固，在固定相中滞留定相中滞留时间长，移移动速率慢速率慢，后流出色，后流出色谱柱，柱，5.2吸附等温吸附等温线 一定温度与一定温度与压力下力下,某某组分在吸附分在吸附剂表面吸附平衡表面吸附平衡,该组分在两相中的分在两相中的浓度相关曲度相关曲线。（1）线性吸附等温性吸附等温线 吸附平衡常数吸附平衡常数K为一定一定值时，则吸吸附等温附等温线为线型。即达到平衡型。即达到平衡时，组分在固定相中的分在固定相中的浓度度Cs与其在流与其在流动相中的相中的浓度度Cm 成正比成正比(Cs=KCm)，直，直线的斜的斜率率为K。线型吸附等温型吸附等温线是理想的等温是理想的等温线，同一种溶，同一种溶质的平衡常的平衡常数数K与溶液的与溶液的浓度无关，即度无关，即K为一常数。一常数。组分流出速度不受分流出速度不受浓度的影响，度的影响，故在洗脱或展开故在洗脱或展开时，同一溶，同一溶质分子在柱内具有分子在柱内具有相同的迁移速率，能得到左右相同的迁移速率，能得到左右对称的流出曲称的流出曲线。如。如图10-2A所示。所示。6.（2）凸凸形形吸吸附附等等温温线 在在绝大大多多数数情情况况下下，吸吸附附等等温温线都都有有些些弯弯曲曲而而呈呈现凸凸形形吸吸附附等等温温线。其其中中主主要要原原因因之之一一是是固固体体吸吸附附剂表表面面的的不不均均一一性性。例例如如硅硅胶胶表表面面上上有有几几种种吸吸附能力不同的吸附中心附能力不同的吸附中心强的、的、较强的、弱的、极弱的的、弱的、极弱的 同同一一溶溶质分分子子总是是先先占占据据强的的吸吸附附中中心心，两两者者之之间作作用用力力强，溶溶质分分子子被被吸吸附附得得牢牢，吸吸附附平平衡衡常常数数K值大大，迁迁移移速速率率慢慢；后后占占据据弱弱的的吸吸附附中中心心，两两者者之之间作作用用力力弱弱，吸吸附平衡常数附平衡常数K值小，迁移速率快，并依此小，迁移速率快，并依此类推。推。显然然，同同一一溶溶质分分子子具具有有不不同同的的吸吸附附平平衡衡常常数数K，即即具具有有不不同同的的迁迁移移速速率率。在在溶溶质分分子子集集中中的的区区域域，吸吸附附剂的的所所有有吸吸附附中中心心达达到到吸吸附附饱和和，K值小小，迁迁移移速速率率快快，先先流流出出色色谱柱柱；在在溶溶质分分子子稀稀少少的的区区域域，由由于于仅仅占占据据了了强吸吸附附中中心心，K值大大，迁迁移移速速率率慢慢，后后流流出出色色谱柱柱。从从而而导致致流流出出曲曲线前前沿沿陡陡峭峭，后后沿沿拖拖尾尾，形形成成拖拖尾尾峰峰，且且保保留留时间亦亦随随样品量的增加而减小品量的增加而减小。如。如图10-2B所示。所示。7.（3）凹凹形形：由由于于进样量量较大大，影影响响了了固固定定相相的的物物理理性性质。随随溶溶质量的增加量的增加,Cs/Cm增加，所以呈凹形。增加，所以呈凹形。吸吸 附附 等等温温柱柱 内内 溶溶质 浓 度度分布分布柱柱 内内 溶溶质 浓 度度的的 分分 布布曲曲线流流 出出 曲曲线 保保 留留 时间 与与 进样 量量 的的关系关系 8.拖尾峰的出拖尾峰的出现对以下以下产生了不利的影响：生了不利的影响：利用峰面利用峰面积进行定量行定量时峰面峰面积的的积分精度和重分精度和重现性。性。利用峰高定量利用峰高定量时检测的灵敏度。的灵敏度。定性分析定性分析时保留保留值与物与物质性性质的相关性。的相关性。组分之分之间相互分离的程度。相互分离的程度。因此因此应尽量避免色尽量避免色谱峰的拖尾。峰的拖尾。克服的方法是：减小克服的方法是：减小进样量或量或样品的品的浓度，即利度，即利用凸形吸附等温用凸形吸附等温线的直的直线部分，从而得到左右部分，从而得到左右对称称的流出曲的流出曲线。9.二、二、吸附吸附剂对吸附吸附剂的要求：的要求：(1)表面积大，具有一定的吸附能力。(2)不应与流动相发生化学反应。(3)粒度要细，一般要150目。1.吸附吸附剂：常用的有：氧化铝、聚酰胺、硅胶等。酸性pH=54 分离酸性物质.如氨基酸 (1)中性pH=7.5 氧化铝 分离生物碱.如挥发油,甾体等 碱性pH=910 分离碱性.如生物碱 (2)硅胶:吸附能力稍弱于氧化铝,用于分离弱酸与中性物(如 有机酸、氨基酸、甾体等)。硅醇基是使硅胶有一 定吸附能力的活性基团。10.三种存在形式:吸附能力：活性大小：11.(3)聚聚酰胺胺:由由酰胺聚合而成的高分子物胺聚合而成的高分子物质。其吸附原理利用分子内其吸附原理利用分子内酰胺基和胺基和羰基。基。酰胺胺基基中中的的羰基基与与酚酚类、黄黄酮类、酚酚类中中的的羟基基或或羧基形成基形成氢键；酰胺胺基基中中的的氨氨基基与与醌类、硝硝基基类中中的的醌基基、硝硝基基形形成成氢键而而产生生吸吸附附作作用用。不不同同的的化化合合物物，由由于于活活性性基基团的的种种类、数数目目与与位位置置的的不不同同，形形成成氢键的的能能力力不不同同，而而实现分离。分离。对位位间位位取取代代基基均均能能形形成成氢键的的,吸吸附附力力增增大大。邻位位基基团间能能形形成成分分子子内内氢键的的,吸吸附附力力减减小小。芳芳香香核核具具有有较多共多共轭键时,吸附力增大。吸附力增大。12.（4）大孔吸附）大孔吸附树脂脂 大孔吸附大孔吸附树脂是一种不含交脂是一种不含交换基基团，具有大孔网状，具有大孔网状结构的高分子吸附构的高分子吸附剂。粒度。粒度多多为20-60目。理化性目。理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机定，不溶于酸、碱及有机溶溶剂。大孔。大孔树脂可分脂可分为非极性和中等极性两非极性和中等极性两类，在，在水溶液中吸附力水溶液中吸附力较强且有良好的吸附且有良好的吸附选择性，而在性，而在有机溶有机溶剂中吸附能力中吸附能力较弱。弱。大孔吸附大孔吸附树脂脂主要用于水溶性化合物的分离主要用于水溶性化合物的分离纯化化，近年来多用于皂苷及其它苷近年来多用于皂苷及其它苷类化合物与水溶性化合物与水溶性杂质的分离。也可的分离。也可间接用于水溶液的接用于水溶液的浓缩，从水溶液中，从水溶液中吸附有效成分。吸附有效成分。13.硅胶含水量硅胶含水量（%）氧化铝含水氧化铝含水量（量（%）活度级别活度级别051525380361015表表10-1 硅胶、氧化硅胶、氧化铝的含水量与活度的含水量与活度级别的关系的关系2.吸附吸附剂的活性的活性：氧化铝、硅胶的吸附力的大小,还与其含水量有较大的关系：注意注意:吸附吸附剂的吸附活性的吸附活性(能力能力)与与活度活度级别的相反关系的相反关系14.活度级数 含水量 活性 吸附能力 小 少 大 强 大 多 小 弱 所以，加热除水，活性提高，吸附力加强。加一定水，活性下降，吸附力减弱。活化：105110加热除水为活化。脱活：加一定水份，降低活性。15.三、色三、色谱条件的条件的选择由于吸附由于吸附剂的种的种类有限，因此，当被分离物有限，因此，当被分离物质、吸附、吸附剂种种类一定一定时，分离成，分离成败的关的关键取决于流取决于流动相的相的选择 流动相又称洗脱剂、展开剂或移动相。要求:1.纯度高 2.稳定(对样品和吸附剂不反应)3.对样品溶解度大 4.粘度小(易洗脱)。1.被分离物质的极性被分离物质的极性越大,被吸附剂吸附得越牢!常见的化合物极性大小顺序:烷烃 烯烃 醚类 硝基化合物 二甲胺 脂类 酮类 醛类 硫醇 胺类 酰胺 醇类 酚类 羧酸类 被分离物质的极性与结构的关系 (1)基本母核相同,基团极性愈大,分子极性愈大。基本母核相同,极性基团数目愈多,分子极性愈大。16.(2)分子双分子双键多多,吸附力吸附力,共共轭度度,吸附性吸附性 。(3)空空间排列排列,影响极性。影响极性。如：如：2.吸附吸附剂的活性的活性:吸附吸附剂的活性的活性大，大，对被被测组分的吸附能力分的吸附能力强被分离物被分离物质的极性的极性吸附吸附剂活性活性大大应选小小防吸附太牢防吸附太牢,难洗脱洗脱小小应选大大防防tR太小太小,不易分离不易分离 17.3.流动相:流动相极性大，对被测组分的洗脱能力大常用流动相极性强弱顺序:石油醚 环己烷 四氯化碳 苯 甲苯几 乙醚 氯仿 醋酸乙酯 正丁醇 丙醇 乙醇、甲醇 1,说明B+较牢地结合在树脂上 KB/A 1,说明A+较牢地结合在树脂上 所以KB/A说明了树脂对A+、B+两种离子选择性交 换的能力,故也称之为选择性系数性系数。KB/A,B与树脂结合能力强,洗脱慢,tR 。30.2.选择性系数与分配系数的关系:即:分配系数不同是离子交换分离的先决条件。31.要求要求：固定相离子交换树脂流动相水为溶剂的缓冲溶液被分离组分离子型的有机物或无机物分离机制分离机制见图示示分离机制：分离机制：依依据据被被测组分分与与离离子子交交换剂交交换能能力力（亲和和力力）不同而不同而实现分离分离32.第第4节 空空间排阻柱色排阻柱色谱法（法（SEC）空空间排阻色排阻色谱(steric exclusion chromatography，SEC)是是20世世纪60年代年代发展起来的一种色展起来的一种色谱分离方法，又称分离方法，又称为：凝胶色凝胶色谱法法(gel chromatography)分子排阻色分子排阻色谱法法(molecular exclusion chromatography)分子分子筛色色谱法法(molecular sieve chromatography)尺寸排阻色尺寸排阻色谱法法(size exclusion chmmatography)。该色色谱法根据流法根据流动相的不同又可分相的不同又可分为两两类：以有机溶：以有机溶剂为流流动相者，称相者，称为凝胶渗透色凝胶渗透色谱法法(gel permeation chromatography，GPC)；以水溶液；以水溶液为流流动相者，称相者，称为凝凝胶胶过滤色色谱法法(gel filtration chromatography，GFC)。主。主要用于大分子物要用于大分子物质如蛋白如蛋白质、多糖等的分离。、多糖等的分离。33.一、基本原理一、基本原理 以凝胶（有机高分子的多孔聚合物）作以凝胶（有机高分子的多孔聚合物）作为固定相，固定相，有机溶有机溶剂或水溶液作或水溶液作为流流动相，利用相，利用样品中不同品中不同组分的分子尺寸的差异以分的分子尺寸的差异以实现混合物的分离。混合物的分离。分离机制分离机制：利利用用被被测组分分分分子子大大小小不不同同、在在固固定定相相上上选择性渗透性渗透实现分离分离.34.要求要求：固定相多孔性凝胶 流动相水凝胶过滤色谱 流动相有机溶剂凝胶渗透色谱 分离机制分离机制见图示示渗透系数渗透系数 注：注：注：注：KpKp仅仅取决于待取决于待取决于待取决于待测测分子尺寸和凝胶孔径大小，分子尺寸和凝胶孔径大小，分子尺寸和凝胶孔径大小，分子尺寸和凝胶孔径大小，与流与流与流与流动动相的性相的性相的性相的性质质无关无关无关无关35.第第5节薄薄层色色谱法法TLC 操作流程:铺板 活化 点样 饱和 展开 显色 定性,定量。一一.基本原理基本原理:1.分离分离过程程 将混合组分的试液,点在铺了吸附剂的玻璃板一端,在密闭容器中用适当的溶剂(展开剂、流动相)展开,各组分不断地被吸附,解吸附 随展开剂前移,利用吸附剂对不同组分的吸附力(吸附常数)不同,产生差速迁移,而达到分离。特点:快速、灵敏(几几十微克)、高选择、显色方便。36.RfA=a/c RfB=b/c2.比移比移值 比移比移值 当固定相、流当固定相、流当固定相、流当固定相、流动动相一定相一定相一定相一定时时，RfRf与与与与与与与与组组分分分分性性性性质质K K的关系如下：的关系如下：的关系如下：的关系如下：色色色色谱谱条条条条件件件件一一一一定定定定，RfRf只只只只与与与与组组分分分分性性性性质质有有有有关关关关，是是是是薄薄薄薄层层色色色色谱谱基基基基本本本本定定定定性性性性参数，参数，参数，参数，说说明明明明组组分的色分的色分的色分的色谱谱保留行保留行保留行保留行为为Rf=0 未移行未移行 (被固定完全吸附被固定完全吸附,K)Rf=1 移至前沿移至前沿 (组分不被固定相吸附分不被固定相吸附,K 0)一般一般:0 Rf 137.1）固定相、流固定相、流固定相、流固定相、流动动相一定相一定相一定相一定时时，R Rf f值与物与物质极性的关系极性的关系是：是：物物质的极性的极性大大，KK大，吸附得越牢，移大，吸附得越牢，移动距离越小，距离越小，R Rf f小小物物质的极性的极性小小，K K小，吸附得越弱，移小，吸附得越弱，移动距离越大，距离越大，R Rf f大大 2 2）固定相固定相、组分的极性一定分的极性一定时，R Rf f值与展开与展开剂极性的关系极性的关系是：是：展开展开剂极性极性大，大，R Rf f大（容易洗脱）大（容易洗脱）展开展开剂极性极性小，小，R Rf f小小 （不容易洗脱（不容易洗脱）3 3）展开）展开剂、组分的极性一定分的极性一定时，R Rf f值与与固定相固定相吸附力的关系吸附力的关系是是 固定相固定相吸附力吸附力大，大，R Rf f小小 固定相固定相吸附力吸附力小，小，R Rf f大大 Rf最佳范最佳范围:0.30.5,也可控制在也可控制在0.20.8范范围内。内。38.3相对比移值 某物质，当色谱条件一致时，Rf定值，定性用，但重现 性差。有人建议用相对比移值定性。参考斑点可以是另加的物质,亦可以样品中另一组分为参考。4.分离度分离度分离度（分离度（R）的）的计算公式算公式为：d2为第第2个色个色谱斑点的中心与原点的斑点的中心与原点的间距距d1为第第1个色个色谱斑点的中心与原点的斑点的中心与原点的间距距W1及及W2为相相邻两斑点的直径两斑点的直径一般分离度一般分离度应大于大于1.0。39.123456溶剂前沿T=23 RH=62%T=23 RH=62%图1 1 延胡索薄延胡索薄层色色谱鉴别（365nm365nm紫外光灯紫外光灯检视）1.1.妇科养坤丸科养坤丸(EEC002)(EEC002)2.2.妇科养坤丸科养坤丸(EEC001)(EEC001)3.3.妇科养坤丸科养坤丸(E05005)(E05005)4.延胡索延胡索对照照药材材 5.延胡索乙素延胡索乙素对照品照品 6.6.延胡索阴性延胡索阴性对照照40.图一：硅胶HPTLC 分离金光菊属植物（紫锥花类）根部提取物，从左到右分别为：海胆苷、咖啡酰酒石酸、紫锥菊、紫锥菊蒲草（75:25）、紫锥菊蒲草（50:50）、紫锥菊蒲草（25:75）、蒲草、洋蓟酸、菊聚酸。41.二二.固定相固定相 1.吸附柱色吸附柱色谱的固定相薄的固定相薄层色色谱也可以使用也可以使用,但但薄薄层色色谱所用的硅胶、所用的硅胶、Al2O3粒度比柱色粒度比柱色谱更更细。硅胶硅胶40 m(一般要求一般要求200目左右目左右)符号符号:硅胶硅胶G硅胶硅胶+石膏石膏硅胶硅胶H硅胶硅胶(未加任何物未加任何物质)硅胶硅胶HF254硅胶不含粘合硅胶不含粘合剂+荧光物光物质硅胶硅胶GF254硅胶硅胶+石膏石膏+荧光物光物质 荧荧光光光光剂剂：MnMn激活的激活的激活的激活的ZnSiO4ZnSiO4（F254F254），在紫外光），在紫外光），在紫外光），在紫外光（254nm254nm）灯下呈）灯下呈）灯下呈）灯下呈淡淡淡淡绿绿色色色色荧荧光光光光 AgAg激活激活激活激活ZnSZnS、CuSCuS（F365F365），呈），呈），呈），呈绿绿色色色色荧荧光光光光42.三三.展开展开剂选择:(同柱同柱)仅操作方法不同。操作方法不同。分离强极性物质,选择强极性展开剂,同时也应考虑固 定相的活性。物质极性 吸附力 流动相极性 防止 大 强 大 太牢,Rf太小 小 弱 小 Rf太大 分离混合样品时,展开剂选择一般规则:(1)先用单一的中等极性展开剂试一下。(2)改用二元展开剂,其比例要摸索。目的:改变展开剂的极性。43.图10-6 点滴试验法44.例例:A、B两组分试样 A B 展开剂 苯 Rf 0.45 0.42 分不开 改为 苯+乙醇 Rf 0.52 0.46 可分开 能否说出 A、B哪一组分极性大？解：显然B的极性大。因为展开剂极性加大时,极性大的组分 Rf(相似相溶)。此外，此外，为提高分离度、防止斑点拖尾，通常：提高分离度、防止斑点拖尾，通常：分离酸性成分，使用酸性展开分离酸性成分，使用酸性展开剂。分离碱性物分离碱性物质，使用碱性展开，使用碱性展开剂。45.四、操作方法四、操作方法 1.薄薄层（硬）板的制（硬）板的制备(1)载板板的的准准备 多多用用玻玻璃璃板板作作为载板板，也也可可用用塑塑料料膜膜和和金金属属铝箔箔，要要求求表表面面光光滑滑,平平整整清清洁，以以便便吸吸附附剂能能均均匀匀地地涂涂铺于于上上。常常用用规格格有有10cm10cm、10cm20cm、20cm20cm等。等。(2)薄薄层(硬硬)板的板的铺制制 粘合粘合粘合粘合剂剂 煅石膏：吸附煅石膏：吸附煅石膏：吸附煅石膏：吸附剂剂的的的的9-15%9-15%左右左右左右左右 羧羧甲基甲基甲基甲基纤维纤维素素素素钠钠CMC-NaCMC-Na：0.5-1%0.5-1%水溶液水溶液水溶液水溶液 合成有机物：聚乙合成有机物：聚乙合成有机物：聚乙合成有机物：聚乙烯烯醇醇醇醇2.5%2.5%（有（有（有（有时对显时对显色色色色剂剂无效）无效）无效）无效）铺铺板方法板方法板方法板方法 手工手工手工手工铺铺板与机械板与机械板与机械板与机械铺铺板板板板46.各种吸附各种吸附剂铺板方法板方法硅胶硅胶G 硅胶硅胶硅胶硅胶H H H H 氧化氧化氧化氧化铝铝G G G G（含（含（含（含9%9%9%9%煅石膏）煅石膏）煅石膏）煅石膏）47.2.点点样点点样体体积：一般在：一般在110 l,点点样量太大量太大,斑点易拖斑点易拖尾尾点点样方式：方式：接触式点接触式点样与与喷雾式点式点样原点形状原点形状：点状、条状点状、条状点点样器具：器具：微量微量进样器、定量毛器、定量毛细管；管；底底距：距：1.52cm点点距：距：0.81.5cm原点直径原点直径：23mm。（边点点边热风吹）吹）48.49.接触式点接触式点样应注意：注意：正正确确选择溶溶解解样品品的的溶溶剂,防防止止点点样环形色形色谱效效应 原点直径一般以原点直径一般以3mm为宜宜 防止点防止点样毛毛细管管损伤薄薄层表面表面 尽量避免多次点尽量避免多次点样 50.点点样环形色形色谱效效应：在在点点样的的同同时，样品品在在原原点点呈呈环状状展展开开，如如果果样品品在在溶溶剂中中的的溶溶解解度度很很大大，原原点点将将变成成空空心心环，称称为“点点样环形色形色谱效效应”。克服方法克服方法:应选择样品品组分分溶溶解解度度相相对较小小的的溶溶剂以以避避免免此此现象的象的产生。生。51.喷雾式点式点样点点样仪（Linomat5 半自动点样仪）52.喷雾点点样的的优点：点：点点样过程程中中，点点样器器不不与与薄薄层板板接接触触，可可防防止止薄薄层板表面物理板表面物理损伤。能能减减少少样品品横横向向、纵向向扩散散，样品品斑斑点点窄窄，展展开开后分离度提高。后分离度提高。自自动化化程程度度高高，样品品溶溶液液不不易易在在针壁壁上上残残留留，可可提提高点高点样的准确度与重的准确度与重现性。性。53.3.展开展开 将将点点好好样的的薄薄层板板浸浸入入展展开开剂中中，展展开开剂借借薄薄层板板上上固固定定相相的的毛毛细作作用用携携带样品品组分分在在薄薄层板板上上迁迁移移一一定定距距离离的的过程称程称为展开，展开，见图10-9。（1）展开装置）展开装置 常常用用的的展展开开装装置置有有直直立立型型的的单槽槽色色谱缸缸和和双双槽槽色色谱缸缸（常常用用其其规格格有有10cm10cm、10cm20cm、20cm20cm等等）、圆形色形色谱缸、卧式色缸、卧式色谱缸等。缸等。54.(2)展开方式展开方式 一般展开方式一般展开方式：上行、斜行与下行：上行、斜行与下行展开距离：展开距离：615cm注意点：注意点：薄薄层板板浸浸入入展展开开剂中中的的深深度度约0.5cm,不不能能浸浸住住起始起始线,层析缸析缸应密密闭。先先饱和和1530分分钟,再再展展开开,防防止止边缘效效应。55.边缘效效应是指同一物是指同一物质的色的色谱斑点在同一薄斑点在同一薄层板板上出上出现的两的两边缘部分的部分的Rf值大于中大于中间部分的部分的Rf值的的现象。象。产生生该现象的主要原因象的主要原因是由于色是由于色谱缸内溶缸内溶剂蒸气蒸气未达未达饱和，造成展开和，造成展开剂的的蒸蒸发速率在薄速率在薄层板两板两边与与中中间部分不等。展开部分不等。展开剂中中极性极性较弱和沸点弱和沸点较低的溶低的溶剂在在边缘挥发的快些，致的快些，致使使边缘部分的展开部分的展开剂中极中极性溶性溶剂比例增大，故比例增大，故Rf值相相对变大。大。56.a）TLC 第一次展开、b）TLC 第二次展开、单向向多多次次展展开开 用用同同一一种种展展开开剂，沿沿同同一一展展开开方方向向展展开开多次。通多次。通过增加展开距离增加展开距离,达到更好的分离效果达到更好的分离效果特殊展开方式特殊展开方式：57.不同展开距离对结果的影响，硅胶HPTLC 分离洋甘菊油，a）3 cm b）5 cm c）7 cm d）9 cm。abcd58.原点12双向展开双向展开双双向向展展开开 第第一一次次展展开开后后，取取出出，挥去去溶溶剂，将将薄薄层板板旋旋转90o角角后后，再再改改用用另另一一种种展展开开剂展展开开。见图10-11。单向多向多级展开展开 用不同的展开用不同的展开剂，沿同一展开，沿同一展开方向展开多次。以达到更好的分离效果。方向展开多次。以达到更好的分离效果。59.离离离离心心心心展展展展开开开开薄薄薄薄层层板板板板以以以以适适适适当当当当转转速速速速旋旋旋旋转转时时，流流流流动动相相相相以以以以适适适适当当当当速速速速率率率率转转移移移移到到到到薄薄薄薄层层上上上上。该该技技技技术术主主主主要要要要用用用用于制于制于制于制备备色色色色谱谱。60.薄层色谱展开时相对湿度的影响不同相对湿度色谱结果显示，苍术在较高湿度条件下分离效果较好。61.薄层色谱展开时温度的影响62.耐用性试验（Robustness）薄层色谱法变动因素：不同厂牌的薄层板。不同点样方式。展开温度及相对湿度的变化等。n系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。目的为用于常规检验提供依据。63.4.检视 1、有色化合物、有色化合物直接定位直接定位2 2 2 2、无色、无色、无色、无色化合物化合物化合物化合物有紫外吸收有紫外吸收有紫外吸收有紫外吸收UVUVUVUV光光光光斑点有斑点有斑点有斑点有荧荧光光光光荧荧光板上有暗斑光板上有暗斑光板上有暗斑光板上有暗斑(显显色色色色剂剂定位定位定位定位)喷雾喷雾或浸或浸或浸或浸渍显渍显色色色色蒸气蒸气蒸气蒸气显显色：色：色：色：碘碘碘碘-生物碱、氨基酸衍生物、生物碱、氨基酸衍生物、生物碱、氨基酸衍生物、生物碱、氨基酸衍生物、肽类肽类、脂、脂、脂、脂类类及皂苷及皂苷及皂苷及皂苷喷雾喷雾或浸或浸或浸或浸渍渍后加后加后加后加热显热显色色色色显显色色色色剂剂：通用有碘、硫酸：通用有碘、硫酸：通用有碘、硫酸：通用有碘、硫酸不不不不仅仅有紫外吸收有紫外吸收有紫外吸收有紫外吸收且能且能且能且能产产生生生生荧荧光光光光只有紫外吸收只有紫外吸收只有紫外吸收只有紫外吸收不能不能不能不能产产生生生生荧荧光光光光无紫外吸收无紫外吸收无紫外吸收无紫外吸收(物理定位物理定位)64.五五.定性定性 定性分析方法定性分析方法:将待定性将待定性组分与分与对照品点在照品点在同一薄同一薄层板上，比板上，比较组分与分与对照品色照品色谱斑点斑点颜色与色与Rf值的一致性。的一致性。对未知未知样品品,要几个展开体系均有一致要几个展开体系均有一致Rf值,才才可可认为同一物同一物质。样对65.12345 6溶剂前沿T=23 RH=62%T=23 RH=62%图1 1 延胡索薄延胡索薄层色色谱鉴别（365nm365nm紫外光灯紫外光灯检视）1.1.妇科养坤丸科养坤丸(EEC002)(EEC002)2.2.妇科养坤丸科养坤丸(EEC001)(EEC001)3.3.妇科养坤丸科养坤丸(E05005)(E05005)4.延胡索延胡索对照照药材材 5.延胡索乙素延胡索乙素对照品照品 6.6.延胡索阴性延胡索阴性对照照点样顺序从左至右分别为连续三批供试品、对照药材、对照品、阴性对照66.六、定量六、定量:（一一）洗洗脱脱法法:误差差 5%(基基本本符符合合微微量量分分析析误差差要要求求)。薄薄层分离分离取下斑点取下斑点洗脱洗脱离离心心取取上清液上清液进行行测定定（二）（二）薄薄层扫描法描法:误差差5%(符合要求符合要求)。薄薄层扫描描法法又又称称原原位位定定量量薄薄层扫描描法法（in situ quantitative thin layer chromatography,QTLC）。本本法法是是将将一一定定波波长的的单色色光光垂垂直直照照射射展展开开后后的的薄薄层板板，测定定薄薄层色色谱斑斑点点的的吸吸收收度度随随展展开开距距离离的的变化化，所所得得关关系系曲曲线下下的的面面积与与色色谱斑斑点点中中待待测物物质的的浓度度或或量量成成正正比比，这种种定定量量分分析析方方法法称称为薄薄层扫描法。描法。67.1.基本原理基本原理 Kubelka-Munk理理论 由于薄由于薄层板上的固定相，板上的固定相，对光的散射光的散射现象，色象，色谱斑点中待斑点中待测物物质的吸收度与的吸收度与浓度的关系不符合比度的关系不符合比尔定律。定律。Kubelka-Munk理理论充分充分阐明了薄明了薄层色色谱斑点中待斑点中待测物物质的吸收度与的吸收度与浓度的定量关系。度的定量关系。(克曼方程)68.设薄薄层板板上上固固定定相相的的厚厚度度为X,入入射射光光的的强度度为I0，当当透透过厚厚度度x的的固固定定相相后后，照照射射在在微微分分薄薄层厚厚度度dx上上的的入入射射光光强与与反反射射光光强分分别为i和和j时，见图10-12。其其入入射射光光强的的增增量量与与反反射射光光强的的增增量量分分别符符合合下下面两个微分方程面两个微分方程 （10-9）（10-10）式式中中S为薄薄层单位位厚厚度度的的散散射射系系数数，K为薄薄层固固定定相相单位位厚厚度度的的吸吸光光系系数数.K值与与薄薄层色色谱斑斑点点中中待待测物物质的的浓度度成成正正比比。K虽称称为“吸吸光光系系数数”，仅因因“单位厚度位厚度”而得名。而得名。69.将将式式（10-9）与与式式（10-10）联立立求求解解，可可得得透透过x薄薄层厚厚度度固固定定相相后后的的透透过光光强i及及反反射射光光强j与与色色谱斑斑点点中中物物质的的浓度度或或量量之之间的的关关系系（体体现在在参参数数a及及b中的中的K）。）。（10-11）（10-12）式式中中 ，A和和B均均为常数。常数。70.在在薄薄层扫描描时，我我们通通常常只只考考虑薄薄层板板的的上上表表面面（x=X）反反射射光光的的强度度j及及薄薄层板板的的下下表表面面（x =0）透透过光光的的强度度i与与色色谱斑斑点点中中的的待待测物物质的的浓度度或量的关系。或量的关系。图10-12 散射性薄散射性薄层截面示意截面示意图I0照照射射强度度；i(x)-x处的的透透射射光光强；j(x)-x处的的反反射射光光强；x固定相固定相层厚厚71.（1）薄薄层色色谱斑斑点点的的反反射射率率 在在薄薄层板板的的上上表表面面，即即 x=X处，I=I0，j=I0R。则 （10-13）式式中中SX为薄薄层板板的的散散射射参参数数，它它与与固固定定相相的的种种类、粒粒度度及及涂涂布布均均匀匀程程度度有有关关，其其值的的大大小小直直接接影影响响到到偏偏离离比比尔定定律律的的程程度度。KX为吸吸收收参参数数，相相当当于于薄薄层色色谱斑点斑点单位面位面积中待中待测物物质的量的量()。当当SX一一定定时(如如Merck厂厂生生产的的硅硅胶胶板板SX=3，氧氧化化铝板板SX=7)，R与与色色谱斑斑点点中中待待测物物质的的量量（KX）符合上式。符合上式。72.（2）薄薄层色色谱斑斑点点的的透透光光率率T 在在薄薄层板板的的下下表表面面，即即x=0处，I=I0T，j=0。则 （10-14）同同理理，当当SX一一定定时，T与与色色谱斑斑点点中中待待测物物质的的量（量（KX）符合上式。）符合上式。（3）薄薄层色色谱斑斑点点的的吸吸光光度度A 理理想想的的空空白白薄薄层板板的的单位位薄薄层厚厚度度的的吸吸光光系系数数K=0。事事实上上，一一般般空空白白板板K0。为了了消消除除此此影影响响，通通常常在在薄薄层扫描描中中都都是是以以空空白白板板为基基准准，测定定相相对透透光光率率及及相相对反反射射率率来来计算薄算薄层色色谱斑点的吸光度。斑点的吸光度。73.在透射法中薄在透射法中薄层色色谱斑点的吸光度斑点的吸光度为 在反射法中薄在反射法中薄层色色谱斑点的吸光度斑点的吸光度为 (T斑点透光率.T0空白板透光率）(R斑点反射率.R0空白板反射率）74.（4）Kubelka-Munk曲曲线 根据根据Kubelka-Munk方程，当方程，当SX0时，色，色谱斑点中待斑点中待测物物质的吸光度的吸光度A与其与其浓度或量度或量(KX)虽仍然存在仍然存在严格的定量关系，但不是一种直格的定量关系，但不是一种直线关系。关系。见图10-15，图10-16。显然然这给定量分析定量分析带来不便。来不便。为方便定量，方便定量，必必须对其曲其曲线进行校直。行校直。SX=20X=10SX=0SX=0SX=10SX=2075.（5）Kubelka-Munk曲曲线的的校校直直 日日本本岛津津CS系系列列的的薄薄层色色谱扫描描仪均均有有线性性补偿器器(line-arizer)，其其工工作作原原理理即即根根据据Kubelka-Munk方方程程式式用用电路路系系统将将弯曲的曲弯曲的曲线校正校正为直直线后用于定量，后用于定量，瑞瑞 士士 CAMAG公公 司司SCANNER系系 列列 的的 薄薄层色色谱扫描描仪，则采采用用计算算机机进行行线性性回回归或或非非线性性回回归，求求出出回回归方方程程，然然后后进行定量分析。行定量分析。76.2.扫描条件的描条件的选择（1）光学模式）光学模式(Photo Mode)的的选择 光源单色器 透透射射法法 光光源源与与光光电检测器器安安装装在在薄薄层板板的的上上下下两两侧。光光源源发出出的的光光经单色色器器（或或滤光光片片）后后成成为一一定定波波长的的单色色光光，光光束束照照到到薄薄层斑斑点点上，上，测量的是透射光的量的是透射光的强度。度。本本法法适适用用于于透透明明的的凝凝胶胶板板和和电泳胶片。泳胶片。77.光源单色器 反反射射法法 光光源源与与光光电检测器器安安装装在在薄薄层板板的的同同侧。光光源源发出出的的光光经单色色器器（或或滤光光片片）后后成成为一一定定波波长的的单色色光光，光光束束照照到到薄薄层斑斑点点上上，测量量的的是是反反射光的射光的强度。度。本本法法适适用用于于不不透透明明薄薄层板板，例例如如硅硅胶胶、氧氧化化铝薄薄层板。板。78.79.（2）波）波长模式模式(Mode)的的选择 单波波长模模式式 单波波长扫描描是是使使用用一一种种波波长的的光光束束对薄薄层进行行扫描，又可分描，又可分为单光束及双光束两种形式光束及双光束两种形式 检测器光单色器光单色器分光镜检测器检测器80.双双波波长模模式式 双双波波长扫描描是是采采用用两两种种不不同同波波长的的光光束束，先先后后扫描描所所要要测定定的的斑斑点点，并并记录下下此此两两波波长吸吸光光度度之之差差，此此法法优点点：消消除除了了背背景景的吸收干的吸收干扰，显著改善基著改善基线的的平平稳性。性。光波长1波长2检测器斩波器检测器 参参比比波波长R化合物吸收最小的波长 测定定波波长S化合物的最大吸收波长。81.（3）扫描模式直直线式式扫描描应用一用一长方形光束（其方形光束（其长度大度大于斑点直径）以直于斑点直径）以直线轨迹通迹通过色色谱斑点斑点。适用于适用于圆形形规则的斑点，的斑点，且且扫描描结果受果受扫描方向描方向的影响。的影响。锯齿式式扫描描照射在照射在薄薄层板上的光束与薄板上的光束与薄层板的相板的相对运运动的的轨迹呈迹呈锯齿形或矩形。形或矩形。适用于任何形状的斑点，适用于任何形状的斑点，扫描描结果不受果不受扫描方向描方向的影响。的影响。直线扫描锯齿扫描轮廓曲线积分曲线82.斑点ABC83.3.定量分析方法定量分析方法 通常使用的定量分析方法是通常使用的定量分析方法是随行随行标准、外准、外标两点两点法法。所。所谓随行随行标准，即是把准，即是把样品溶液与品溶液与对照品溶液照品溶液点在同一薄点在同一薄层板上，展开，板上，展开，测定。目的是克服板定。目的是克服板间误差，提高定量分析的准确度。外差，提高定量分析的准确度。外标两点法两点法则是配是配制高低两种不同制高低两种不同浓度的度的对照品溶液，分照品溶液，分别点在薄点在薄层板上，板上，测定峰面定峰面积。用两种用两种浓度的度的对照品液照品液(或一种或一种浓度、两种点度、两种点样量量)与与样品液品液对比定量。比定量。m=a+b A样 式中式中:b=m1-m2/A1-A2 a=m1-bA1 为了提高了提高测量精度，通常相同体量精度，通常相同体积同一同一浓度的度的对照品溶液点照品溶液点2个斑点，相同体个斑点，相同体积的的样品溶液点品溶液点34个个斑点，且交叉点斑点，且交叉点样于同一薄于同一薄层板上，展开，板上，展开，测定。定。84.85.86.87.88.（一）高效薄（一）高效薄层色色谱法（法（HPTLC）高高 效效 薄薄 层 色色 谱 法法(high performance thin layer chromatography，HPTLC)所所用用的的硅硅胶胶为5m或或10m，颗粒粒分分布布范范围窄窄，流流动相相流流速速慢慢，容容易易达达平平衡衡，展展开开过程程中中传质阻阻力力较小小，斑斑点点较为圆而而整整齐。因因此此，高高效效薄薄层色色谱具具有有分离效率高、灵敏度高、展开分离效率高、灵敏度高、展开时间短等短等优点。点。89.b）HPTLC 单次展开。a）TLC 单次展开、90.参数参数TLCTLCHPTLCHPTLC板尺寸板尺寸（cmcm）颗粒直径（颗粒直径（mm）颗粒分布颗粒分布点样量点样量(l)(l)原点直径原点直径(mm)(mm)展开后斑点直径（展开后斑点直径（mmmm）有效塔板数有效塔板数有效板高（有效板高（mm）点样数点样数展开距离（展开距离（cmcm）展开时间（展开时间（minmin）最小检测量：最小检测量：吸收（吸收（ngng）荧光（荧光（pgpg）20202020 50 50100100 宽宽1 15 53 36 66 615 15 600600 30301010 10 101515 30 30200200 1 15 5 5050100100101010105 52020窄窄0.10.10.20.21 11.51.52 25 550005000 1212 18 1836 36 3 36 6 3 32020 0.10.10.50.55101091.（二）胶束薄（二）胶束薄层色色谱法（法（MTLC）以以胶胶束束水水溶溶液液为流流动相相的的薄薄层色色谱法法称称为胶胶束束薄薄层色色谱法法（micellar thin layer chromatography，MTLC）。该系系统具具有有固固定定相相-流流动相相-胶胶束束-固固定定相相、三三个个界界面面、三三个个分分配配系系数数，因此有因此有较好的好的选择性。胶束水溶液无毒、便宜、安全。性。胶束水溶液无毒、便宜、安全。由由于于分分配配、吸吸附附、静静电、增增溶溶等等效效应，待待测样品品中中各各组分分在在薄薄层板板上上有有不不同同的的迁迁移移速速度度，从从而而实现分分离离。该法法具具有有独独特特的的选择性性、可可同同时分分离离亲水水性性和和疏疏水水性性物物质，对带电成成分分和和非非带电成成分分也也有有较好好的的分分离离效效果果。适适用用于于分分离离差差别很很小小的的物物质。92.7纸色色谱法法 一一.基本原理基本原理LL分配色分配色谱载体体:滤纸的的纸纤维固定相固定相:滤纸上吸附的水分上吸附的水分(2026%水分中有水分中有6%的的水分通水分通过氢键与与纤维素素上的上的羟基基结合成合成为复合物复合物)或或甲甲酰胺、二甲基甲胺、二甲基甲酰胺、丙二醇或胺、丙二醇或缓冲溶液冲溶液。流流动相相:与水不相混溶的有机溶与水不相混溶的有机溶剂。定性参数定性参数:Rf操作操作类似于薄似于薄层,但原理却不同。但原理却不同。93.94.(一一)Rf与与K的关系的关系:Rf大（K小）,极性小的物质;Rf小（K大）,极性大的物质。各组分K不同,就有不同的Rf,从而得以分离。(二二)Rf的影响因素的影响因素:1.物质的化学结构:极性大的物质,水中分配多,Rf小。极性小的物质,水中分配少,Rf大。95.例例:葡萄糖 鼠李糖 洋地黄毒甙分子中羟基数 5 4 3亲脂性基团 0 CH3 CH2,CH3分子极性 大 次 小 Rf 小 中 大 2.色谱条件的影响:展开剂的极性:展开剂的极性,极性物质Rf,亲脂性组Rf 。展开剂蒸气:对Rf影响较大,所以应先让蒸气将层析缸饱和,以免造成流动相的比例改变。温度:96.二二.实验方法方法 1.选纸:1）质地地均均匀匀,无无折折痕痕。纸质松松紧和和厚厚度度适适宜宜纸质松松紧和厚度适宜和厚度适宜纸质要要纯若若Rf小小,选中速或快速中速或快速滤纸;若粘度大若粘度大,选质地松地松的的滤纸。若。若组分多分多,选中速或慢速中速或慢速滤纸。一般常。一般常选中速中速滤纸。2.点点样:110 l,23mm3.展开展开:先先饱和和,再展开再展开,与薄与薄层类似。似。4.定性定性:Rf 显色：与薄色：与薄层一一样（无（无荧光薄光薄层即硫酸即硫酸显色）色）5.定量定量:剪下剪下,洗脱洗脱,光度法定量。光度法定量。97.98.例例1样品品在在TLC上上展展开开，10分分钟时有有一一Rf值，但但20分分钟时的的展展开开结果果是是：（）A、Rf值加倍加倍B、Rf值不不变C、样品移行距离加倍品移行距离加倍D、样品移行距离增加，但小于品移行距离增加，但小于2倍倍E、样品移行距离增加，但大于品移行距离增加，但大于2倍倍答案：答案：(D）99.例例2组分分在在固固定定相相中中的的质量量为mA(g)，在在流流动相相中中的的质量量为mB(g)，而而该组分分在在固固定定相相中中的的浓度度为CA(g/ml)，在在流流动相相中中的的浓度度为CB(g/ml)，则此此组分分的的分分配配系系数数是是（）。）。A.mA/mB；B.mB/mA；C.mA/（mA+mB）；D.CA/CB；E.CB/CA。答案：答案：D100.例3、三种糖类化合物，其结构如下，若用纸色谱分离，正丁醇为流动相，应（）Rf最大。答案：答案：C101.例4、在硅胶粘合薄层板上，用氯仿作展开剂，对某极性物质进行分离，Rf值几乎为0，若欲得合适的Rf值，则要改变展开剂的极性，可选用下列哪种展开剂进行试验?()A氯仿和环己烷 B氯仿和甲醇混和溶剂 C环己烷答案：B102.例5。液相色谱中，如使用硅胶或氧化铝为固定相，其活性越高，则活度级数（）。A 越小 B 越大 C 不变答案：A103.例6.甲乙两化合物，经同一TLC系统展开后，它们的Rf值相同，则甲乙两者(）A.是同一物质 B.可能是同一物质 C.不是同一物质答案：B104.偶氮苯偶氮苯对甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯苏丹黄丹黄苏丹丹红对氨基偶氮苯氨基偶氮苯对羟基偶氮苯基偶氮苯例例7：硅胶板、石油：硅胶板、石油醚-苯（苯（4：1），），Rf 次序？次序？105.1在以硅胶在以硅胶为固定相的吸附柱色固定相的吸附柱色谱中中,正确的正确的说法是法是()A 组分的极性越分的极性越强被固定相吸附的作用越被固定相吸附的作用越强 B 物物质的相的相对分子分子质量越大，越有利于吸附量越大，越有利于吸附 C 流流动相的极性越相的极性越强，组分越容易被固定相所吸附分越容易被固定相所吸附 D 吸附吸附剂的活度的活度级数越小，数越小，对组分的吸附力越大分的吸附力越大 2纸色色谱法与薄法与薄层色色谱法常用正丁醇法常用正丁醇-乙酸乙酸-水水(4:1:5，体体积比比)作作为展开展开剂，正确的操作方法是，正确的操作方法是()。A 三种溶三种溶剂混合后直接用作展开混合后直接用作展开剂 B 三种溶三种溶剂混合、静置分混合、静置分层后，取上后，取上层作展开作展开剂 C 三种溶三种溶剂混合，静置分混合，静置分层后，取下后，取下层作展开作展开剂 D 依次用三种溶依次用三种溶剂作展开作展开剂 106.15.在正相液固色谱中，下列化合物的保留值顺序是()A 醚酯酮醛 B 酮醛醚酯 C 醛酮酯醚 D 酮酯醛醚16.在正相液固色谱中，下列哪个溶剂的洗脱强度最大()A 正己烷 B 甲醇 C 四氢呋喃 D 二氯甲烷 17.在硅胶薄板上用不同的溶剂系统分离咖啡碱和绿原酸，结果如下，最好的溶剂系统是：A 氯仿-丙酮(8:2)：咖啡碱的Rf为0.1，绿原酸的Rf为0.0B 氯仿-丙酮-甲醇-乙酸(7:2:1.5:0.5);咖啡碱的Rf为0.48,绿原酸的Rf为0.05 C 正丁醇-乙酸-水(4:1:1)：咖啡碱的Rf为0.68，绿原酸的Rf为0.42 D 正丁醇-乙酸-甲醇(4:1:2)：咖啡碱的Rf为0.43，绿原酸的Rf为0.40107.21在在吸吸附附薄薄层色色谱中中，当当固固定定相相与与待待分分离离成成分分给定后，若定后，若Rf值太小太小时，应_展开展开剂_性。性。22在在正正相相分分配配色色谱中中，当当固固定定相相与与待待分分离离成成分分给定定后后，若若Rf值太太小小时，应_待待测组分分在在展展开开剂中的中的_。23在在吸吸附附薄薄层色色谱中中，当当固固定定相相与与展展开开剂给定定后后，待待 测 组 分分 A、B、C、D，（其其 极极 性性 顺 序序 为ABCD）的）的Rf值从小到大的从小到大的顺序序为_。14在在液液相相色色谱中中，液液固固色色谱的的分分离离机机理理是是 _。15在在液液相相色色谱中中，液液液液色色谱的的分分离离机机理理是是 _。108.4经薄薄层分分离离后后，组分分A的的Rf值为0.35，组分分B的的Rf值为0.56，展开距离，展开距离为10.0cm，求，求组分分A和和B 两两组分色分色谱斑点之斑点之间的距离的距离（1.9cm）5某某组分分在在薄薄层色色谱体体系系中中的的分分配配比比k=3，经展展开开后后样品品斑斑点点距距原原点点3.0cm，组分分的的Rf值为多多少少？此此此此时溶溶剂前前沿沿距距原原点点多多少少厘厘米米？（12.0cm）109.此课件下载可自行编辑修改，此课件供参考！此课件下载可自行编辑修改，此课件供参考！部分内容来源于网络，如有侵权请与我联系删除！部分内容来源于网络，如有侵权请与我联系删除！