第17高效液相色谱法课件

1.基本概念与特点2.HPLC与经典LC、GC的比较3.HPLC仪器结构4.液相色谱的固定相与流动相5.HPLC本章主要内容一、概述它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：2 1高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化为了获得高柱效而使用了粒度很小的固定相（甲酰胺乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮二氧六环四氢呋喃甲乙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚异丙醚二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)(4)(4)选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。2024/7/11流动相应具备的条件:理想的流动相应具备化学稳定性好；对样品有较宽的溶解范围；扩散性好即低粘度；沸点适中；与检测方法具有好的兼容性；不损坏固定相和仪器；易于获得纯品并且毒性低。四.高效液相色谱法的主要类型离子交换色谱尺寸排阻色谱（凝胶过滤色谱）亲和色谱分配色谱吸附色谱（如反相色谱，疏水作用色谱）371.1.液-液分配色谱基本原理：组分在固定相和流动相上的分配系数不同；固定相：早期涂渍固定液，由于流失，已较少采用；现在应用最广的是化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到担体（硅胶）表面的游离羟基上。流动相：流动相与固定相均为液体，但应互不相溶。38根据两相极性程度，分为正相色谱和反相色谱：正相色谱：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性。流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。反相色谱：相反，流动相的极性大于固定液的极性。反相与正相的出峰顺序恰好相反。392.液-固吸附色谱 固定相：为固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是硅胶。流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与脱附。403.3.离子交换色谱固定相：阴离子或阳离子交换树脂；流动相：阴离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子交换：RSO3H+M+=RSO3M+H+阴离子交换：RNR4OH+X-=RNR4X+OH-应用：离子及可离解的化合物，包括氨基酸、核酸等。41425.5.尺寸排阻色谱（凝胶色谱）固定相：凝胶 具有一定大小孔隙分布 。原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。可对相对分子质量在100-105范围内的化合物进行分离五.液相色谱分离类型的选择1.1.根据相对分子质量选择 相对分子质量十分低的样品，其挥发性好，适用于气相色谱 标准液相色谱类型（液-固、液-液、及离子交换色谱）最适合的相对分子质量范围是20O20O20002000 对于相对分子质量大于20002000的样品，则用尺寸排阻法为最佳43(2)根据溶解度选择如：样品可溶于水并属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳；如：样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液-固吸附色谱；44（3）根据分子结构选择例如，酸、碱化合物宜用离子交换色谱；脂肪族或芳香族宜用液-液分配色谱或液-固吸附色谱；异构体用液-固吸附色谱；同系物用液-液分配色谱等等4546分离类型选择总结，P370高效液相色谱仪应用实例气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400）的有机物原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析（这些物质几乎占有机物总数的75%80%）。4748HPLC的应用1.1.环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶固定相：薄壳型硅胶 流动相：正己烷流动相：正己烷 流流 速：速：1.5 mL/min 色谱柱：色谱柱：50cm 2.5mm(内径内径)检测器：示差折光检测器检测器：示差折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。残留量进行分析。492.2.稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。固定相：十八烷基硅烷化键合相固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：流动相：20%甲醇甲醇-水水 100%甲醇甲醇 线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，2%/min 流流 速：速：1mL/min 柱柱 温：温：50 C 柱柱 压：压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器2024/7/11501.从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。相色谱的异同点。解：二者都是根据样品组分与流动相和固定相相互作用力的差别进行分离的。从仪器构造上看，液相色谱需要增加高压泵以提高流动相的流动速度，克服阻力。同时液相色谱所采用的固定相种类要比气相色谱丰富的多，分离方式也比较多样。气相色谱的检测器主要采用热导检测器、氢焰检测器和火焰光度检测器等。而液相色谱则多使用紫外检测器、荧光检测器及电化学检测器等。但是二者均可与MS等联用。二者均具分离能力高、灵敏度高、分析速度快，操作方便等优点，但沸点太高的物质或热稳定性差的物质难以用气相色谱进行分析。而只要试样能够制成溶液，既可用于HPLC分析，而不受沸点高、热稳定性差、相对分子量大的限制。思考题解答思考题解答2024/7/11514.液相色谱有几种类型液相色谱有几种类型?它们的保留机理是什么它们的保留机理是什么?在这些类型在这些类型的应用中的应用中,最适宜分离的物质是什么最适宜分离的物质是什么?解:液相色谱有以下几种类型:液-液分配色谱;液-固吸附色谱;离子交换色;谱空间排阻色谱;特异亲和色谱等.液-固吸附色谱是通过组分在两相间的多次吸附与解吸平衡实现分离的.最适宜分离的物质为中等相对分子质量的油溶性试样，凡是能够用薄层色谱分离的物质均可用此法分离。其中;液-液分配色谱的保留机理是通过组分在固定相和流动相间的多次分配进行分离的。可以分离各种无机、有机化合物。结束语当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的，所以不要放弃，坚持就是正确的。When You Do Your Best,Failure Is Great,So DonT Give Up,Stick To The End谢谢大家荣幸这一路，与你同行ItS An Honor To Walk With You All The Way演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日