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球虫概述和球虫病球虫概述和球虫病球虫病是艾美耳Eimeria球虫寄各种畜禽引起的寄生虫病，各种畜禽一般都有多种球虫，有宿主特异性，动物之间不能互相感染。球虫病可以导致家禽肉和蛋生产出现严重损失。寄生虫在小肠内成倍增殖导致组织损伤，降低采食量和饲料中养分的吸收率，脱水和血液损失。球虫病对养殖业造成的经济损失是惊人的。仅鸡球虫病所造成的直接和间接经济损失全世界每年约有8亿美元,英国每年约有3800万英镑,美国每年约有4000万美元(Shirleyetal.,2005;MCDONALDandSHIRLEY,2021;SHARMANetal.,2021)。我国尚无此类统计资料,但据山东省农科院畜牧研究所内部资料(仅供参考),山东省2021年约养殖13亿只鸡,按鸡球虫病经济损失世界平均值计算(0.02美元/只鸡).我国仅山东一省每年由鸡球虫病造成的经济损失约有2000万美元一、病原体一、病原体 艾艾美美球球虫虫在在分分类类上上属属于于原原生生动动物物门门，孢孢子子虫虫纲纲、球球虫虫目目、艾艾美美科科、艾艾美美耳耳属属。我我国国全全国国各各地地常常见见球球虫有虫有1313种。孢子化卵囊含种。孢子化卵囊含4 4个孢子囊个孢子囊2 2个子孢子。个子孢子。艾美球虫孢子囊模式图1.极帽2.卵膜孔3.极粒4.孢子囊余体5.卵囊余体6.屈光小体艾美耳球虫超微结构1.极帽2.小线体3.棒状体4.脂团5.食泡6.高尔基复合体7.蛋白体8.细胞核9.内质网10.线粒体n nE.exiguaE.exigua 微小艾美耳球虫微小艾美耳球虫n nE.perforansE.perforans穿孔艾美耳球虫穿孔艾美耳球虫n nE.piriformisE.piriformis梨型艾美耳球虫梨型艾美耳球虫n nE.magnaE.magna大型艾美耳球虫大型艾美耳球虫n nE.irresiduaE.irresidua无残艾美耳球虫无残艾美耳球虫n nE.intestinalisE.intestinalis肠艾美耳球虫肠艾美耳球虫n nE.coecicolaE.coecicola盲肠艾美耳球虫盲肠艾美耳球虫n nE.mediaE.media中型艾美耳球虫中型艾美耳球虫n nE.stiedae E.stiedae 兔肝艾美耳球虫兔肝艾美耳球虫E.exiguaE.exigua 微小艾美耳球虫；微小艾美耳球虫；E.perforansE.perforans穿孔艾美耳球虫穿孔艾美耳球虫E.piriformisE.piriformis梨型艾美耳球虫；梨型艾美耳球虫；E.magnaE.magna大型艾美耳球虫大型艾美耳球虫E.irresiduaE.irresidua无残艾美耳球虫；无残艾美耳球虫；E.intestinalisE.intestinalis肠艾美耳球虫肠艾美耳球虫E.coecicolaE.coecicola盲肠艾美耳球虫；盲肠艾美耳球虫；E.mediaE.media中型艾美耳球虫中型艾美耳球虫E.stiedae E.stiedae 兔肝艾美耳球虫；兔肝艾美耳球虫；E.flavescensE.flavescens黄艾美耳球虫黄艾美耳球虫艾美球虫发育史各阶段形态子孢子裂殖体配子裂殖子艾美球虫发育史各阶段形态未孢子化卵囊孢子化卵囊孢子化卵囊二、生活史二、生活史寄寄生生部部位位：肝肝胆胆管管上上皮皮细细胞胞：斯斯氏氏艾艾美美耳耳球球虫虫致致病病力力最最强强。能能引引起起严严重重的的肝肝球球虫虫病病。其其余余1313种种寄寄生生在肠粘膜上皮细胞。在肠粘膜上皮细胞。经经裂裂体体生生殖殖、配配子子生生殖殖和和孢孢子子生生殖殖三三个个阶阶段段，前前两两个个阶阶段段在在肝肝胆胆管管上上皮皮细细胞胞或或肠肠上上皮皮细细胞胞内内进进展展，最最后后形形成成卵卵囊囊随随粪粪便便排排出出体体外外。后后一一发发育育阶阶段段在在外界环境中进展。外界环境中进展。1 16.6.无性繁殖无性繁殖7 717.17.有性繁殖有性繁殖171720.20.发育成感染性卵发育成感染性卵囊囊21.21.孢子体游出孢子体游出 合合 子子小配子体小配子体小配子小配子大配子体大配子体大配子大配子未孢子化卵囊未孢子化卵囊孢子化卵囊孢子化卵囊子孢子子孢子裂殖体裂殖体裂殖子裂殖子配子生殖配子生殖裂裂殖殖生生殖殖孢子子生生殖殖形形态不同的发育期有不同的形态：未孢子化卵囊孢子化卵囊裂殖体裂殖子配子体配子子合子孢子化卵囊球虫卵囊Eimeria tenella unsporulated oocyst球虫裂殖体和裂殖子Eimeria tenella merozoites in schizontsEimeria tenella merozoites球虫配子体Eimeria tenella microgametocytes and macrogametocyte球虫卵囊的鉴别要点大小size内生性发育时间形状shapeendogenousdevelopingtime颜色color孢子化时间极帽micropylecapsporulationtime卵膜孔micropyle宿主内外残体residuum寄生部位栓体Stiedabody致病性囊壁oocystwall球虫的宿主特异性球虫的宿主特异性球虫对宿主有严格的选择性，不同种的家畜有不同种的球虫，互不穿插感染。不同种的球虫又各有其固定的寄生部位，如鸡的柔嫩艾美耳球虫E.tenella寄生于盲肠，毒害艾美耳球虫E.necatrix寄生于小肠的中1/3段。依球虫的孢子化卵囊中有无孢子囊、孢子囊数目和每个孢子囊内所含子孢子的数目，可将球虫分为不同的属：泰泽属(Tyxzzeria)。卵囊内含8个子孢子。无孢子囊，主要寄生于鸭和鹅，其中消灭泰泽球虫(T.perniciosa)对家鸭有严重致病性。温扬属(Wenyonella)。1个卵囊内含4个孢子囊，每个孢子囊内含4个子孢子。主要寄生于鸭，其中菲莱氏温扬球虫(W.philiplevinei)对家鸭有中等致病性。艾美耳属(Eimeria)。1个卵囊内含4个孢子囊，每个孢子囊内含2个子孢子。寄生于各种畜禽。牛以邱氏艾美耳球虫E.zurnii和牛艾美耳球虫E.bovis为最常见，致病性也最强。绵羊和山羊以阿氏艾美耳球虫E.arloigni和浮氏美耳球虫E.faurei为最普遍。兔以寄生于胆管上皮细胞内的斯氏艾美耳球虫E.stiedai为最普遍，危害最重。鸡以柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫致病性最强，常在鸡群中引起爆发型球虫病；致病性比较缓和的是堆型艾美耳球虫(E.acervulina)和巨型艾美耳球虫E.maxima。鹅以寄生于肾小管上皮细胞的截形艾美耳球虫E.truncata最有害。等孢属Isospora。1个卵囊内含2个孢子囊，每个孢子囊内含4个子孢子。主要寄生于猫和犬。鸡球虫球虫世界各国已经记载的鸡球虫种类共有13种之多,我国已发现9种。不同种的球虫,在鸡肠道内寄生部位不一样,其致病力也不一样。柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)寄生于盲肠,致病力最强;毒害艾美耳球虫(E.necatrix)寄生于小肠中三分之一段,致病力强;巨型艾美耳球虫(E.maxima)寄生于小肠,以中段为主,致病力强;堆型艾美耳球虫(E.acervulina)寄生于十二指肠及小肠前段,布氏艾美耳球虫(E.brunetti)寄生于小肠后段,盲肠根部,变位艾美耳球虫(E.mivati)寄生于小肠、直肠和盲肠。有一定的致病力;和缓艾美耳球虫(E.mitis)寄生在小肠前段,致病力较低。哈氏艾美耳球虫(E.hagani)寄生在小肠前段,致病力较低。早熟艾美耳球虫(E.praecox)寄生在小肠前段,致病力较低。鸡球虫球虫E.acervulinacompletesitsentirecycleintheduodenum,butmayspreadtotheileumduringsevereinfection.E.tenellaislocatedalmostexclusivelyinthecaeca.Itmayextendtobothsidesofthejunctionofthecaecaduringsevereinfections.E.necatrixperformsitsschizogonyinthejejunum-ileumanditsgamogonyinthecaeca.E.praecoxcolonisestheduodenumandthejejunum.E.mitiscolonisesmainlytheileum.E.maximainfectsthemiddleintestine(jejunumandbeginningoftheileum,oneithersideofMeckelsdiverticulum)butmostoftenascendsintotheduodenum.E.brunettidescendsthelengthoftheintestineduringinfectionandislocatedpreferentiallyintherectumandcloaca.Wheninfectionsaresevere,itmayascendtothedistalpartoftheileumandtheproximalpartofthecaeca.9种鸡球虫鉴别种鸡球虫鉴别虫种卵囊大小m平均大小m形状颜色孢子化时间内生性发育时间寄生部位柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella19.526 16.522.822.6218.5椭圆形囊壁绿原生质褐平均27h,最短18h7天，最短115h盲肠堆形艾美耳球虫Eimeria acervulina18.2520.2 13.716.318.814.5卵圆形无最短17h4天，最短99h十二指肠巨型艾美耳球虫Eimeria maxima21.542.5 16.529.830.7623.9长卵圆形黄褐平均48h,最短30h6天，最短121h小肠中1/3段毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix13.222.7 11.318.320.516.8长椭圆形无最短18h7天，最短115h小肠中1/3段布氏艾美耳球虫Eimeria brunetti20.730.3 18.124.224.618.8卵圆形最短18h7天，最短120h小肠下段、直肠早熟艾美耳球虫Eimeria praecox19.824.7 15.719.821.7517.33椭圆形囊壁绿最短12h4天，最短83.5h小肠前1/3段和缓艾美耳球虫Eimeria mitis11.718.7 111815.314.3球形淡黄绿最短15h5天，最短93h小肠后段变位艾美耳球虫Eimeria mivati18.2520.2 11.318.3最短12h4天，最短92h小肠前1/3段哈氏艾美耳球虫Eimeria hagani18.2520.2 11.318.317.715.8宽卵圆形无最短18h7天，最短120h十二指肠鸡球虫孢子化温度2528。有极粒。无极帽，外残体不明显，巨型艾美耳球虫无内残体。堆形艾美耳球虫、变位艾美耳球虫有卵膜孔。鸡球虫球虫兔球虫兔球虫Coudert P,D Licois,F Drouet-Viard,F Provt,2000,in:Enfermedades del conejo.Tomo II.219-34兔球虫兔球虫E.stiedae 兔肝艾美尔球虫E.exigua微小艾美尔球虫E.perforans穿孔艾美尔球虫E.piriformis梨型艾美尔球虫E.magna大型艾美尔球虫E.irresidua无残艾美尔球虫E.intestinalis肠艾美尔球虫E.coecicola盲肠艾美尔球虫E.media中型艾美尔球虫兔球虫兔球虫牛球虫牛球虫牛球虫牛球虫亚球形艾美耳球虫E.subspherica牛艾美耳球虫E.bovis柱状艾美耳球虫E.cylindrica邱氏艾美耳球虫E.zuernii阿拉巴马艾美耳球虫E.alabamensis椭圆艾美耳球虫E.ellips加拿大艾美耳球虫E.canadensis奥博艾美耳球虫E.auburnensis牛球虫牛球虫牛球虫牛球虫牛球虫牛球虫生活史生活史球虫生活史可分为三个阶段：无性生殖阶段：在寄生部位的上皮细胞内，以裂殖生殖法增殖。裂殖体形成大量裂殖子，使上皮细胞遭到破裂，逸出裂殖子，重新进入其它上皮细胞，再进展裂殖。这样反复几代后，使大量上皮细胞遭到严重破坏，引起疾病突然发作。有性生殖阶段：裂殖生殖2-3代后，形成大小配子体，以配子生殖皮，形成大配子雌性和小配子雄性，雌雄配子结合形成合子。孢子生殖阶段：合子迅速形成被膜后即为卵囊，随粪便排出后，在温度适宜情况下，在卵囊内发育形成孢子囊和子孢子，含有成熟的子孢子的卵囊为感染性卵囊。有性生殖和无性生殖都在体内进展，称为内生性发育；孢子生殖在外界环境中完成，称为外生性发育。生活史生活史鸡球虫感染阶段为孢子化卵囊,经粪-口途经传播。每个孢子化卵囊内含4个孢子囊(sporocysts),每个孢子化卵囊包含2个感染性子孢子。孢子化卵囊经污染食物及饮水进如鸡胃肠系统后,释放出感染性子孢子,子孢子侵入肠上皮细胞，经数代裂体生殖转为配子生殖形成卵囊。卵囊落入肠腔随粪便排入外界环境中，卵囊在潮湿的环境中，在适当温暖和氧气条件下，经孢子化成为具感染性的孢子化卵囊。流行病学流行病学在适宜条件下，球虫的增殖反传播速度相当惊人，甚至有些病例在没有任何明显病症情况下，突然死亡。球虫没有中间宿主，可以直接发育，随粪便排出的卵囊，在条件适宜的情况下，经2-3天发育，就成为感染性卵囊，被宿主吞食后，重新在其体内生殖，所以流行甚广，很难将球虫彻底去除。在宿主采食时，将球虫感染性卵囊随食物吞入胃肠内，囊壁在胃酸和机械作用下被破坏，孢子囊被释放出来到十二指肠。子孢子被胰液和胆汁激活出囊，然后到寄生部位侵入上皮细胞发育增殖。当宿主免疫力因某些原因降低时，球虫那么乘机大肆增殖起来，引起球虫病大发作。球虫不但在畜禽舍环境中无处不有，而且对药物产生耐药性又特别快，因此同一种有效药物，随使用时间的延长，就会作用变小，药量增大，直至最后无效。致病与危害土壤、饲料或饮水中的感染性卵囊被畜禽吞入后，子孢子在消化道内脱囊逸出，进入上皮细胞吸取营养，长成第一代裂殖体，经分裂而成为第一代裂殖子。每个裂殖子进入一个新的上皮细胞，再发育为第二代裂殖体，并再分裂产生第二代裂殖子，重新进入新的上皮细胞内生长发育。如此不断反复，可使上皮细胞遭受严重破坏，导致疾病发作。经两个或多个世代后，一局部裂殖子发育为大配子母细胞，最后发育为大配子。另一局部发育为小配子母细胞，继而生成许多带有2根鞭毛的小配子。活动的小配子钻入大配子体内(受精)，成为合子。合子迅速由被膜包围而成为卵囊，随粪便排出体外。卵囊多呈卵圆形、椭圆形或近似球形，长度多为1148微米，宽度为935微米，初排出的卵囊内含1个合子，在适宜的温、湿度条件下完成孢子发育后便具有感染性。粪便检查发现卵囊是诊断本病的一种重要方法。病症鸡球虫病以柔嫩艾美耳球虫的致病力最强，寄生于盲肠，俗称盲肠球虫病。2150日龄雏鸡多发。病初羽毛竖立，缩颈、呆立，以后由于肠上皮细胞的大量破坏和机体中毒，病情转重，出现共济失调，腹泻带血等病症，死亡率高，甚至全群覆没。兔球虫病以断乳后到12周龄幼兔最多见。中国曾报道7种兔球虫病原体，除斯氏艾美耳球虫寄生于胆管上皮外，其余的均寄生于肠上皮细胞。病兔精神不振，伏卧不动，腹泻和便秘交替，腹围膨大；肝受损害时可发现肝肿大，可视粘膜轻度黄染；末期可出现神经病症，如痉挛、麻痹等，多数极度衰弱而死。死亡率有时可达80%以上。病症病症牛球虫病潜伏期约为23周，犊牛一般为急性经过，病程为1015天。当牛球虫寄生在大肠内繁殖时，肠黏膜上皮大量破坏脱落、黏膜出血并形成溃疡；这时在临床上表现为出血性肠炎、腹痛，血便中常带有粘膜碎片。约1周后，当肠黏膜破坏而造成细菌继发感染时，那么体温可升高到40-41，前胃缓慢，肠蠕动增强、下痢，多因体液过度消耗而死亡。慢性病例，那么表现为长期下痢、贫血，最终因极度消瘦而死亡。病症犬球虫病是由孢子虫纲球虫目艾美耳科中的等孢属球虫引起的。临床上主要以血便，贫血、衰弱和食欲减迟为特征。本病的病原体是等孢属球虫，其特点是卵囊内的胚孢子形成两个孢子囊，每个孢子囊内含有4个子孢子。此属球虫通常寄生于犬(还有人、猫及其他肉食动物)的小肠粘膜上皮细胞内，小的只有510m。它以无性繁殖许多代(裂体生由)，产生很多新的个体(裂体芽孢)。经过假设干裂体生殖后，代之以有性生殖，形成很多大孢子和小孢子，大、小孢子进入肠管内，并在此处发生结合，于受精后大孢子被覆以双层膜变为卵囊，随粪便排出体外。鹌鹑球虫病由艾美科球虫寄生于鹌鹑肠道引起的，多发生于1-2月龄鹌鹑，侵袭鹌鹑的球虫有6种艾美耳属球虫和一种温扬属球虫，其中致病力较强的有巴氏艾美球虫、鹌鹑艾美球虫和分散艾美球虫，卵囊呈椭圆形，孢子化时间为24小时，潜在期5-6天。病鹑下痢，粪便呈黄褐色或灰黄色黏液性，混有血液，幼鹑发育不良，成年鹑产蛋停顿，极度消瘦，扎堆，卧倒不起，最后因衰竭而死亡，病程7-20天。病变为小肠肿胀，浆膜面呈奶酪样色泽，空肠、回肠呈弥漫性出血和充血。病理病理变化化兔肠球虫病病变可见小肠及盲肠血管充血，粘膜充血出血，病程长者粘膜上有许多白色结节，内含卵囊。病理病理变化化病理病理变化化兔肝球虫病可见肝外表及实质内有多量白色或淡黄色粟粒大至豌豆大病灶，内含各发育阶段的球虫。病理病理变化化病鸡消瘦，鸡冠与粘膜苍白，内脏变化主要发生在肠管，病变部位和程度与球虫的种别有关。柔嫩艾美耳球虫主要侵害盲肠，两支盲肠显著肿大，可为正常的35倍，肠腔中充满凝固的或新鲜的暗红色血液，盲肠上皮变厚，有严重的糜烂。病理病理变化化巨型艾美耳球虫损害小肠中段，可使肠管扩张，肠壁增厚；内容物粘稠，呈淡灰色、淡褐色或淡红色。病理病理变化化堆型艾美耳球虫多在上皮表层发育，并且同一发育阶段的虫体常聚集在一起，在被损害的肠段出现大量淡白色斑点。病理病理变化化毒害艾美耳球虫损害小肠中段，使肠壁扩张、增厚，有严重的坏死。在裂殖体繁殖的部位，有明显的淡白色斑点，粘膜上有许多小出血点。肠管中有凝固的血液或有葫萝卜色胶冻状的内容物。病理病理变化化哈氏艾美耳球虫损害小肠前段，肠壁上出现大头针头大小的出血点，粘膜有严重的出血。假设多种球虫混合感染，那么肠管粗大，肠粘膜上有大量的出血点，肠管中有大量的带有脱落的肠上皮细胞的紫黑色血液。病理病理变化化牛球虫主要寄生在小肠下段和整个大肠的上皮细胞内。在裂殖生殖阶段使粘膜上皮遭受大量破坏，粘膜下层出现淋巴细胞浸润，并发生溃疡和出血。肠粘膜被大量破坏后，造成了有利于肠道腐败细菌的生长繁殖的环境，其所产生的毒素和肠道中的其他有毒物质被机体吸收后，导致中枢神经系统和各个器官的机能失调。剖检主要病变，小肠有出血性炎症，淋巴滤泡肿大突出，有白色和灰色的小病灶，同时这些部们常常出现直径415毫米的溃疡，其外表覆有凝乳样薄膜。肠内容物呈现褐色，带恶臭，有纤维性薄膜和粘障碎片。肠系膜淋巴结肿大。诊断断发病季节临床病症病理变化病原检查诊断断诊断断诊断断防治防治球虫病以预防为主。对鸡球虫病常用作饲料添加剂的预防药物有氨丙啉、球痢灵和得意丹等，抗生素类有莫能霉素、拉萨霉素和盐霉素等。每天给雏鸡吞服少量感染性卵囊，可使之获得免疫力。对兔球虫病可用磺胺类，如磺胺喹噁林、复方磺胺二甲氧嘧啶和磺胺噻唑等进展防治。不光是球虫，其他疾病也一样，最好以预防为主。因为家养宠物的抗病能力比较弱，加上有些针剂副作用很强，会对其身体造成二次伤害，得不偿失。球虫病发病很突然，急性发病后只能采取注射的方法急救，需要有一定的专业知识才能操作。防治防治鸡氯苯胍：预防按3033mg/kg浓度混饲，连用12个月，治疗按6066mg/kg混饲37d，后改预防量预以控制。氯羟吡啶可球粉，得意丹：混饲预防浓度为125150mg/kg，治疗量加倍。育雏期连续给药。氨丙啉：可混饲或饮水给药。混饲预防浓度为100125mg/kg，连用24周；治疗浓度为250mg/kg，连用12周，然后减半，连用24周。应用本药期间，应控制每千克饲料中维生素B1的含量以不超过10mg为宜，以免降低药效。用加强氨丙啉预防，按66.5133mg/kg浓度混饲，治疗浓度加倍。强效氨丙啉和特强效氨丙啉的用法同加强氨丙啉，但产蛋鸡限用。硝苯酰胺球痢灵：混饲预防浓度为125mg/kg,治疗浓度为250300mg/kg，连用35d。呋喃唑酮痢特灵可混饲或饮水给药。预防浓度为100200mg/kg,连用1周，停药23d，如此重复使用;治疗浓度为300400mg/kg，连用1周，再改用预防量。使用本药必需注意与饲料或饮水混合均匀。莫能霉素：预防按80125mg/kg浓度混饲连用。与盐霉素合用有累加作用。盐霉素球虫粉，优素精：预防按6070mg/kg浓度混饲连用。奈良菌素：预防按5080mg/kg浓度混饲连用。与尼卡巴嗪合用有协同作用。马杜拉霉素抗球王、杜球、加福：预防按56mg/kg浓度混饲连用。防治防治兔磺胺喹恶啉，预防用2万浓度饮水，连用34周；治疗用3万浓度饮水或混饲。磺胺氯吡嗪三字球虫粉预防按2万浓度饮水，供断奶仔兔饮用，连用30曰，药液最好当曰配制，当曰用完；发病时治疗量为3千浓度。磺胺甲基异恶唑新诺明和三甲氧苄氨嘧啶，按5：1混合，治疗量按4万浓度混料饲喂，连用7曰，必要时停3曰再用7曰。二硝苯酰胺球痢灵将此药与3倍量磷酸钙一同研细，配成25的混合物，预防以1.25万浓度剂量拌料饲喂；治疗以2.53万浓度混饲，连用35曰莫能霉素预防按0.2万浓度混饲；治疗按0.5万浓度混饲。对球虫病的治疗应注意以下几点：其一，早期用药，晚期效果不好。其二，轮换用药，一般一种药用36个月改换其它药，但不能换同一类型的药，如不能从一种磺胺药换成另一种磺胺药。其三，应注意对症治疗，采取辅助疗法。如补液、补充维生素K、补充维生素A等。肝型球虫病，肝肿大，外表有灰白色或淡黄色结节，肠出血，有白色小点，肝脏结节压片，球虫卵囊防治防治牛磺胺二甲嘧啶SM2，每千克体重0.1克，内服，每天一次，连用37天。如配合使用酞酰磺胺噻唑PST每千克体重0.18克内服，效果更好。氨丙啉，每千克体重2550毫克，每天一次，连用56天。林可霉素，每天每头牛1克，混入饮水中饮用，连用21天。除治疗用药外，贫血严重时，应考虑输血，并结合应用止泻，强心和补液等对症疗法。鸡球虫病防治现状 以前主要是用化学药物预防和控制鸡球虫病。然而,由于球虫极易快速产生抗药性,长期大量用药导致了抗药虫株的出现，要求药物的剂量和种类不断增加,不仅造成生产本钱的提高,还造成产品中的药物残留问题。抗药虫新药物开发速度远落后于球虫产生抗药性的速度,而且更重要的是,随着消费者对鸡蛋肉产品质量的不断提高,一些抗药虫药物已经或将被禁用。长期以来,科学工作者一直寻求替代药物的方法来防治鸡球虫病,抗鸡球虫疫苗无疑是最好的选择。经过科学工作者数十年的不懈努力,多种鸡球虫疫苗已被研制开发出来。经注册的商业化鸡球虫疫苗已有十几种之多。近年来,越来越多的鸡球虫疫苗用于养鸡业生产中,取得了不错的效果。鸡球虫病的疫苗球虫病的疫苗目前用于养鸡业生产中的注册的商业鸡球虫疫苗全部为活苗,分两类:鸡球虫野株活苗和鸡球虫减毒活苗。鸡球虫野株活苗一般是由几种主要鸡球虫(Eimeriatenella,E.necatrix,E.maxima,E.acervulina)野株卵囊混合物,利用鸡自然感染鸡球虫后可产生免疫保护力抵抗同种球虫的再感染的特性,屡次低剂量接种鸡,使其产生对鸡球虫免疫保护力,到达预防鸡球虫病的目的。减毒活苗是通过方法将鸡球虫的致病力减弱而又能保存其免疫原性,作为疫苗接种鸡后,可引起鸡轻度感染而不发病,同时又能有效的刺激宿主免疫系统产生免疫保护力,抵抗同种球虫的再感染。近年来,越来越多地区和国家养鸡业开场使用鸡球虫减毒活苗,或单独使用或和抗药虫药物配合使用,既大量降低了抗药虫药物的用量,又提高了防治效果和产品质量,预示疫苗将成为防治鸡球虫病的主要手段。鸡球虫病的疫苗球虫病的疫苗现用于养鸡业注册的商业鸡球虫减毒活疫苗多是经鸡或鸡胚连续传代后选育出的早熟虫株。每一次传代中最早熟虫株被选出,屡次连续传代后减少了一到两个裂体生殖世代,因此在鸡体内的内生性发育时间大大缩短,因而其致病力减弱。此类减毒活苗保持了和野株活苗相当的免疫原性,而在平安性上大大优于野株活苗。由于其致病力轻微,即使在使用时鸡只承受到的剂量不均,也不会造成承受到大剂量的鸡发病。现用于养鸡业在生产中的此类减毒活苗有Paracoxs(ScheringPlough,UK),Livacoxs(Biopharm,CzechRepublic),Eimervax(BiopropertiesPty,Australia),EimerivacPlus(广东省农科院)。尽管减毒活苗和野株活苗比已有很大的改善,但仍有很多局限性。其一明显的缺点为储存期过短。活苗必须在使用前保持活性才有效,一般情况下,疫苗从生产到使用,中间有消售,运输,储存等诸多环节,需一定的时间。如疫苗的储存期过短,会造成生产上的不便,甚至可能会影响其效果。其最大的缺点为生产本钱太高。因为此类减毒活苗必需用鸡来生产,造成了其生产本钱过高,从而限制了其在生产中的广泛应用。另外,此类减毒活苗仍有一定的致病性,对接种鸡的生产力有一定影响。现用鸡球虫活疫苗的及其缺点 约50多年前,第一个商业鸡球虫野株活苗,Coccivac(Schering-Plough,USA)问世,并迅速在美国,加拿大等北美国家推广。以后又有几种同类改进疫苗如Immucox(VetechLaboratories,Canada),ADVENT(NovusInternational,USA),NobilisCOXATM(Intervet,Netherlands)等取得一定的成功，现在仍在使用。虽然这类活苗有本钱低,免疫保护力强等优点,但由于由野株强毒组成,接种鸡都会有一定程度的鸡球虫感染,使其生产力轻微下降。另外,接种鸡还会向外界环境中排泄球虫卵囊,污染的环境有可能成为鸡球虫病爆发的感染源。这类活苗如使用管理不当,可引起鸡球虫病爆发。所以,这类活苗趋于被淘汰。鸡球虫基因/重组/亚单位疫苗的前景 尽管鸡球虫活疫苗已越来越广泛地被应用于养鸡业生产中,但由于其自身特性造成的不可抑制的缺点,极大的限制了其普及应用,远远不能满足养鸡业需求。科学工作者一直寻求效果更好,制备更简单,本钱更低廉,应用更平安的鸡球虫疫苗。随着现代生物技术的不断提高,鸡球虫基因/DNA疫苗,重组疫苗及亚单位疫苗的研究越来越引起人们的重视。此类疫苗在应用平安,制备简单,本钱低廉方面比活疫苗有不可比较的优势。从长远的观点看,基因/重组/亚单位疫苗必将取代活疫苗成为新一代球虫疫苗。我国在鸡球虫基因/重组疫苗的研究领域位于世界前列。2004年Wu等(Wuetal.,2004)将柔嫩艾美耳球虫的TA4基因克隆进表达载体pcDNA3.1内,作为基因疫苗注射到鸡肌肉内,转染到肌细胞后载体表达TA4抗原,产生了一定程度的,免疫保护力。最近,南京农大兽医学院李湘瑞实验室对MZ5-7,cSZ-2,IL-2,IFN-r等基因疫苗的作用效果等进展了一系列研究,结果令人鼓舞。在重组疫苗的研究中,中国农大的丁军等,浙江大学的杜爱芳等,以及吉林大学的张西辰实验室也得到了可喜的成果。尽管如此,此类疫苗距有效防治鸡球虫病的要求相差依然甚远,究其主要原因,关键还是现用于制备疫苗球虫蛋白质的免疫原性过低,只能诱导宿主产生局部免疫保护力。最近许多研究采用多种方法来试图提高此类疫苗的免疫保护效果,如应用细胞因子,淋巴因子及干扰素作为佐剂;利用基因疫苗或微生物表达的重组疫苗改善疫苗输送途径;利用益生菌诱导宿主产生非特异性免疫力等。但这些措施不能从根本上提高改善疫苗的免疫原性,所以从生产的角度讲效果有限。基因致基因致变优化疫苗的原理化疫苗的原理 根据达尔文的生物进化理论,生命的多样性是在基因随机突变和自然选择下产生的。也就是说,基因在自然条件下可以发生随机突变,然后利于生物生存的基因被选择延续下来。根据这一理论,科学家门利用现代分子生物学技术,在实验室条件下将这一过程大大加快和缩短。建立了多种体外人工诱导基因致变基因的方法,并成功的应用于多个领域。如改善酶功能,提高癌细胞抗体的活性,改善提高病毒蛋白质的抗原性等。最简单常用又证明可靠有效的是易错PCR(ErrorpronePCR,epPCR)产生的随机致变,该方法利用一些聚合酶缺乏校对功能而易导致扩大错误的特性,对DNA进展随机致变,基因致基因致变优化疫苗化疫苗针对现有鸡球虫蛋白质抗原免疫原性弱,宿主特异性强,以及一定的地区性差异的缺点,拟采用基因定点致变结合随机致变技术,对编码蛋白质抗原的基因进展人工诱导变异进化。诱变的基因那么引起相应蛋白质的氨基酸序列的度的改变,有些还可能会引起蛋白质构型的轻微改变而造成抗原表位(epitope)差异,从而引起蛋白质免疫原性的改变。然后筛选出理想的蛋白质制备疫苗。基因致基因致变优化疫苗的化疫苗的优点点和活疫苗及以诱变前蛋白质为根底制备的各种疫苗相比,用人工诱变的蛋白质制备的疫苗有以下优点:1.抗原性强:按设计被诱变蛋白质的免疫原性可提高几到几十甚至几百倍,且宿主特异性及地区性异差异消失或减弱,可望使免疫鸡,产生完全或大部免疫保护力,抵抗多种鸡球虫的感染,且无地区性差异。2.抗原性稳定:蛋白质抗原在真菌内表达,自然条件下变异的速度极慢。真菌和球虫同为单细胞真核生物,蛋白质表达后的处理机制相似,由真菌表达球虫蛋白质最接近其自然状态。3.平安:不会引起宿主的感染发病和副作用,且不会污染环境,无公害。4.本钱低,蛋白质由真菌表达,不需用鸡来生产,本钱极低。5.制备简单快速:本研究使用的模型真菌可长期保存,生长周期短,培养简单。一旦需要,可于极短时间内起动生产,便于应急。6.使用方便:可用于制备多种形式的疫苗,如由宿主表达的DNA疫苗;由微生物表达携带的重组疫苗及亚单位疫苗等。球虫病研究面球虫病研究面临的挑的挑战About at least 10 years behind other Apicomplexan parasites(e.g.Toxoplasma,Plasmodium,etc)Few studies on Eimeria transfectionSo far,no complete gene knock out reported,no homologous mutant created yetUnable to be cultured continueously in vitro,transfected parasites must to be screened in vivoSingle infection rout病理病理变化判定化判定Score 0-4Score 0:Nomacroscopiclesion.Thewallisthinandpresentscharacteristiclongitudinalgroovesandmucousalfolds.Thecontentsarehomogeneousandcreamyanddonotcontainanyparticles.Thecolourischestnut.病理病理变化判定化判定Score 1:Somepetechiaearescatteredonthecaecalwall.Thecaecalcontentsarenormal.Thepetechiaearemorevisibleontheserousmembranethanonthemucousalside.病理病理变化判定化判定Score 1:Somepetechiaearescatteredonthecaecalwall.Thecaecalcontentsarenormal.Thepetechiaearemorevisibleontheserousmembranethanonthemucousalside.病理病理变化判定化判定Score 2:Thelesionsaremorenumerousandthereisbloodinthecaecalcontents.Thecaecalwallisslightlythickened.Normalcaecalcontentsarepresent.病理病理变化判定化判定Score 2:Thelesionsaremorenumerousandthereisbloodinthecaecalcontents.Thecaecalwallisslightlythickened.Normalcaecalcontentsarepresent.病理病理变化判定化判定Score 3:Alargequantityofbloodorcaecalplugsispresent.Thecaecalwallsaregreatlythickened.Thefaecalcontentshavepracticallydisappeared.病理病理变化判定化判定Score 3:Alargequantityofbloodorcaecalplugsispresent.Thecaecalwallsaregreatlythickened.Thefaecalcontentshavepracticallydisappeared.病理病理变化判定化判定Score 3:Alargequantityofbloodorcaecalplugsispresent.Thecaecalwallsaregreatlythickened.Thefaecalcontentshavepracticallydisappeared.病理病理变化判定化判定Score 4:Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs.Faecaldebrisisnolongervisible;itisenclosedinthecaseousplugs.Score4isassignedtodeadfowl.病理病理变化判定化判定Score 4:Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs.Faecaldebrisisnolongervisible;itisenclosedinthecaseousplugs.Score4isassignedtodeadfowl.病理病理变化判定化判定Score 4:Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs.Faecaldebrisisnolongervisible;itisenclosedinthecaseousplugs.Score4isassignedtodeadfowl.病理病理变化判定化判定Score 4:Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs.Faecaldebrisisnolongervisible;itisenclosedinthecaseousplugs.Score4isassignedtodeadfowl.病理病理变化判定化判定Score 4:Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs.Faecaldebrisisnolongervisible;itisenclosedinthecaseousplugs.Score4isassignedtodeadfowl.病理病理变化判定化判定Score 1:Thewhitepatchesarescatteredandconfinedtotheduodenum.Theycontainoocystsintheprocessofformation.Theselesionsareelongated,transversalandata90degreeangletothemainaxisoftheintestineliketherungsofaladder.Theselesionsmaybeseenontheserousmembraneandmucousmembraneoftheduodenum.Theremaybeamaximumofupto5lesionspercm2.Aninfectionscored1hasnoimpactonzootechnicalperformancebutcausesslightdiscolorationoftheserousmembraneanddepigmentationoftheskininyellowchickens.病理病理变化判定化判定Score 1:Thewhitepatchesarescatteredandconfinedtotheduodenum.Theycontainoocystsintheprocessofformation.Theselesionsareelongated,transversalandata90degreeangletothemainaxisoftheintestineliketherungsofaladder.Theselesionsmaybeseenontheserousmembraneandmucousmembraneoftheduodenum.Theremaybeamaximumofupto5lesionspercm2.Aninfectionscored1hasnoimpactonzootechnicalperformancebutcausesslightdiscolorationoftheserousmembraneanddepigmentationoftheskininyellowchickens.病理病理变化判定化判定Score 2:Thelesionsaremuchclosertogetherbutnotcoalescent;theymayextendto20cmbelowtheduodenumin3-week-oldchicks.Theintestinalwallsarenotthickened.Thecontentsofthedigestivetractarenormal.Aslightreductioninweightgainmaybeobserved.病理病理变化判定化判定Score 2:Thelesionsaremuchclosertogetherbutnotcoalescent;theymayextendto20cmbelowtheduodenumin3-week-oldchicks.Theintestinalwallsarenotthickened.Thecontentsofthedigestivetractarenormal.Aslightreductioninweightgainmaybeobserved.病理病理变化判定化判定 Score 3:Thelesionsaremorenumerous,andsmall.Theybecomecoalescentandthemucousmembraneappearstobecoveredwithacoating.Theintestinalwallisthickenedandthecontentsareliquid.ThelesionsmayextendtothediverticulumoftheyolksacorMeckelsdiverticulum.Thechangesintheintestinalwallresultindisordersofabsorption,hencetheappearanceofdiarrhoea,thelossofcolourintheserousmembraneandconsequencesforzootechnicalperformance.病理病理变化判定化判定Score 3:Thelesionsaremorenumerous,andsmall.Theybecomecoalescentandthemucousmembraneappearstobecoveredwithacoating.Theintestinalwallisthickenedandthecontentsareliquid.ThelesionsmayextendtothediverticulumoftheyolksacorMeckelsdiverticulum.Thechangesintheintestinalwallresultindisordersofabsorption,hencetheappearanceofdiarrhoea,thelossofcolourintheserousmembraneandconsequencesforzootechnicalperformance.病理病理变化判定化判定Score 3:Thelesionsaremorenumerous,andsmall.Theybecomecoalescentandthemucousmembraneappearstobecoveredwithacoating.Theintestinalwallisthickenedandthecontentsareliquid.ThelesionsmayextendtothediverticulumoftheyolksacorMeckelsdiverticulum.Thechangesintheintestinalwallresultindisordersofabsorption,hencetheappearanceofdiarrhoea,thelossofcolourintheserousmembraneandconsequencesforzootechnicalperformance.病理病理变化判定化判定 Score 4:Themucousmembraneisgreyish.Thelesionsformcompletelycoalescentcolonies.Congestionmaybeconfinedtolittlepetechiaeor,duringverysevereinfections,theentiremucousmembranemaybebrightred.Theindividuallesionsintheupperpartoftheintestinecannolongerbedistinguished.Thetypicalladderrunglesionsappearinthemiddlepartoftheintestine.Theintestinalwallsaregreatlythickened,andtheintestineisfilledwithacreamyexudatewhichcontainsalargenumberofoocysts.Score4isassignedtochickswhichdieofcoccidiosis.病理病理变化判定化判定Score 4:Themucousmembraneisgreyish.Thelesionsformcompletelycoalescentcolonies.Congestionmaybeconfinedtolittlepetechiaeor,duringverysevereinfections,theentiremucousmembranemaybebrightred.Theindividuallesionsintheupperpartoftheintestinecannolongerbedistinguished.Thetypicalladderrunglesionsappearinthemiddlepartoftheintestine.Theintestinalwallsaregreatlythickened,andtheintestineisfilledwithacreamyexudatewhichcontainsalargenumberofoocysts.Score4isassignedtochickswhichdieofcoccidiosis.病理病理变化判定化判定 Score 1:Smallredpetechiaemayappearontheserousmembraneofthemiddleintestine.Thereisnodistensionorthickeningoftheintestine,althoughsmallquantitiesoforangemucousmayappear.病理病理变化判定化判定Score 1:Smallredpetechiaemayappearontheserousmembraneofthemiddleintestine.Thereisnodistensionorthickeningoftheintestine,althoughsmallquantitiesoforangemucousmayappear.病理病理变化判定化判定 Score 2:Theserousmembranemaybepunctuatedbynumerousredpetechiae.Theintestinemaybefulloforangemucousandmayormaynotbedistended.Theintestinalwallisthickened.病理病理变化判定化判定 Score 2:Theserousmembranemaybepunctuatedbynumerousredpetechiae.Theintestinemaybefulloforangemucousandmayormaynotbedistended.Theintestinalwallisthickened.病理病理变化判定化判定 Score 3:Theintestineisdistendedandthewallisthickened.Themucousmembraneisroughandtheintestinalcontentscontainpinpointclotsandmucous.病理病理变化判定化判定Score 3:Theintestineisdistendedandthewallisthickened.Themucousmembraneisroughandtheintestinalcontentscontainpinpointclotsandmucous.病理病理变化判定化判定 Score 4:Theintestinalwallmaybedistendedthroughoutalmostitsentirelength.Theintestinescontainnumerousbloodclotsanddigestedredbloodcellswhichgivethemacharacteristiccolourandputridodour;thewallisgreatlythickened.Score4isgiventodeadchickens.病理病理变化判定化判定 Score 4:Theintestinalwallmaybedistendedthroughoutalmostitsentirelength.Theintestinescontainnumerousbloodclotsanddigestedredbloodcellswhichgivethemacharacteristiccolourandputridodour;thewallisgreatlythickened.Score4isgiventodeadchickens.病理病理变化判定化判定 Scor
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