颅内感染实验室诊断技术新进展课件

颅内感染的实验室诊断颅内感染的实验室诊断技术新进展技术新进展颅内感染的实验室诊断技术新进展1颅内感染实验室诊断技术新进展课件2颅内感染实验室诊断技术新进展课件3 巢式巢式 （）本法需设计引物两套，对脑脊液进行两步法基因本法需设计引物两套，对脑脊液进行两步法基因扩增，检测其中含量低的病原体。巢式对革兰扩增，检测其中含量低的病原体。巢式对革兰染色、培养或抗原检测阴性或不确定时更有检染色、培养或抗原检测阴性或不确定时更有检测价值。测价值。巢式4颅内感染实验室诊断技术新进展课件5等用巢式检测脑脊液中含量甚微的结核分枝杆等用巢式检测脑脊液中含量甚微的结核分枝杆菌，较传统的方法敏感度高出倍。菌，较传统的方法敏感度高出倍。等对疑有的儿童脑脊液应用半巢式检测脑膜炎等对疑有的儿童脑脊液应用半巢式检测脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和流感嗜血杆菌，阳性和奈瑟菌、肺炎链球菌和流感嗜血杆菌，阳性和阴性预测值均为以上。阴性预测值均为以上。,.().,.,.().等用巢式检测脑脊液中含量甚微的结核分枝杆菌，较传统的方法敏感6 荧光定量荧光定量 （）是常规基础上加入荧光探针，具有准确性高、重是常规基础上加入荧光探针，具有准确性高、重复性好等特点，已广泛用于基因表达、病原体复性好等特点，已广泛用于基因表达、病原体检测等领域。检测等领域。应用检测细菌性脑膜炎的病原菌，阳性检出率应用检测细菌性脑膜炎的病原菌，阳性检出率()()显著高于脑脊液培养显著高于脑脊液培养()()。()(),.().荧光定量()()7应用检测脑脊液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌应用检测脑脊液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌敏感性和特异性分别达和，且和脑膜炎奈瑟菌敏感性和特异性分别达和，且不受抗菌药物应用影响。不受抗菌药物应用影响。研究表明，的检测周期平均比传统短小时，有研究表明，的检测周期平均比传统短小时，有助于快速诊断，缩短患者住院时间并减少住院助于快速诊断，缩短患者住院时间并减少住院费用。费用。,.,.().,.().应用检测脑脊液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌敏感性8 基于基因序列分析技术基于基因序列分析技术基因核苷酸序列具有高度保守性，存在于所有细基因核苷酸序列具有高度保守性，存在于所有细菌的染色体基因组中，其在保守区之间有个菌的染色体基因组中，其在保守区之间有个变异区，利用可变区与恒定区的特性，设计细变异区，利用可变区与恒定区的特性，设计细菌通用引物，能对临床分离的任何病原菌进行菌通用引物，能对临床分离的任何病原菌进行准确鉴定和定位及不同种属细菌的分类，较传准确鉴定和定位及不同种属细菌的分类，较传统的细菌培养有更高敏感性。统的细菌培养有更高敏感性。基于基因序列分析技术9应用基因扩增技术设计快速检测颅内感染常见应用基因扩增技术设计快速检测颅内感染常见病原菌的检测方法，能准确、快速且高效地检病原菌的检测方法，能准确、快速且高效地检测脑脊液中病原菌。测脑脊液中病原菌。高通量测序技术与基因检测相结合，可以大幅高通量测序技术与基因检测相结合，可以大幅度提高病原体检测速度并降低检测成本。度提高病原体检测速度并降低检测成本。,.().,:.,.,应用基因扩增技术设计快速检测颅内感染常见病原菌的检测方法，能10 基因芯片检测技术：基因芯片检测技术：基因芯片技术是一种快速、高效、高通量的核酸基因芯片技术是一种快速、高效、高通量的核酸分析技术，已广泛用于基因检测、药物或耐药分析技术，已广泛用于基因检测、药物或耐药基因的筛选、疾病相关基因的诊断、病原微生基因的筛选、疾病相关基因的诊断、病原微生物感染的鉴定等领域。物感染的鉴定等领域。基因芯片检测技术：11侯晓霖等通过数据库检索，筛选了包括脑膜炎侯晓霖等通过数据库检索，筛选了包括脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌及其他葡萄球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌及其他凝固酶阴性葡萄球菌等化脓性脑膜炎常见细菌凝固酶阴性葡萄球菌等化脓性脑膜炎常见细菌的多条序列特异性探针（覆盖脑膜炎常见病原的多条序列特异性探针（覆盖脑膜炎常见病原菌的亚种），并根据临床流行情况变化进行探菌的亚种），并根据临床流行情况变化进行探针增减来满足临床需求。针增减来满足临床需求。侯侯晓霖霖,梁志娟梁志娟,王振海王振海.化化脓性性脑膜炎膜炎脑脊液常脊液常见病原菌基因芯片的构建病原菌基因芯片的构建.中国医科大学中国医科大学报().侯晓霖等通过数据库检索，筛选了包括脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、12刘志忠等应用基因芯片法检测临床脑脊液感染刘志忠等应用基因芯片法检测临床脑脊液感染常见的个种（属）病原菌，包括金黄色葡萄球常见的个种（属）病原菌，包括金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌沟肠杆菌,与传统细菌培养比较符合率为，证与传统细菌培养比较符合率为，证实了芯片诊断技术筛查脑脊液病原菌的可行性，实了芯片诊断技术筛查脑脊液病原菌的可行性，具有简便、快速、准确和高通量等优点，对临具有简便、快速、准确和高通量等优点，对临床样本检测及流行病学调查有重要意义。床样本检测及流行病学调查有重要意义。刘志忠刘志忠,张艳,石广志石广志.基因芯片法基因芯片法检测脑脊液病原菌的脊液病原菌的临床床应用用.中中华实验和和临床感染病床感染病杂志志:电子子版版().刘志忠等应用基因芯片法检测临床脑脊液感染常见的个种（属）病原13颅内感染实验室诊断技术新进展课件14 生物化学标志物生物化学标志物 乳酸乳酸()()脑脊液乳酸是脑组织能量代谢的底物，是鉴别细脑脊液乳酸是脑组织能量代谢的底物，是鉴别细菌性及病毒性颅内感染常用的生化标志物之一，菌性及病毒性颅内感染常用的生化标志物之一，细菌性感染时其含量升高，病毒性感染时无显细菌性感染时其含量升高，病毒性感染时无显著改变。著改变。.,.().().生物化学标志物15等对有关脑脊液乳酸检测在细菌性颅内感染诊等对有关脑脊液乳酸检测在细菌性颅内感染诊断价值的个研究进行荟萃分析发现，脑脊液乳断价值的个研究进行荟萃分析发现，脑脊液乳酸含量升高诊断细菌性颅内感染的合并敏感性酸含量升高诊断细菌性颅内感染的合并敏感性为，特异性为，当脑脊液乳酸为，特异性为，当脑脊液乳酸 时时,诊断的特异诊断的特异性可高达。性可高达。()等对有关脑脊液乳酸检测在细菌性颅内感染诊断价值的个研究进行荟16 尿酸尿酸(，)脑脊液中的是由脑细胞中核酸转化而来的，因此脑脊液中的是由脑细胞中核酸转化而来的，因此脑脊液含量可作为脑细胞损伤的指标。脑脊液含量可作为脑细胞损伤的指标。发生颅内感染时，脑脊液含量显著增高发生颅内感染时，脑脊液含量显著增高()()，主要是由细菌感染致使脑细胞损伤、破坏，自主要是由细菌感染致使脑细胞损伤、破坏，自身代谢增强所致，同时也可能是由于炎症刺激身代谢增强所致，同时也可能是由于炎症刺激使血脑屏障通透性增高，移行入脑脊液，使脑使血脑屏障通透性增高，移行入脑脊液，使脑脊液中的增高。脊液中的增高。刘刘晓华.脑脊液中尿酸的脊液中尿酸的测定及其在儿童病毒性定及其在儿童病毒性脑炎中的意炎中的意义.齐齐哈哈尔尔医学院学医学院学报,():尿酸(，)刘晓华.脑脊液中尿酸的测定及其在儿童病毒性17 一氧化氮（）一氧化氮（）各种伤害性刺激均可诱发脑内各区含量明显升高，各种伤害性刺激均可诱发脑内各区含量明显升高，颅内感染患者脑脊液含量均高于正常颅内感染患者脑脊液含量均高于正常()()，但，但就细菌或病毒感染而言差异无统计学意义就细菌或病毒感染而言差异无统计学意义()()升高幅度与脑损伤程度有关，与感染病因无关，升高幅度与脑损伤程度有关，与感染病因无关，含量测定有助于脑脊液常规、生化正常的颅内含量测定有助于脑脊液常规、生化正常的颅内感染的诊断。感染的诊断。一氧化氮（）18 臭氧（臭氧（）细菌性脑膜炎患者中臭氧含量明显高于非脑膜炎细菌性脑膜炎患者中臭氧含量明显高于非脑膜炎患者，其差异具有统计学意义。患者，其差异具有统计学意义。便捷的臭氧检测方式是目前主要的研究方向。便捷的臭氧检测方式是目前主要的研究方向。,.臭氧（）,.19 脑脊液蛋白脑脊液蛋白脑脊液蛋白20细菌性颅内感染发生时，脑脊液中上述各种蛋细菌性颅内感染发生时，脑脊液中上述各种蛋白的含量，除胱抑素外均较病毒性颅内感染时白的含量，除胱抑素外均较病毒性颅内感染时升高，而脑脊液胱抑素水平则以病毒性颅内感升高，而脑脊液胱抑素水平则以病毒性颅内感染升高显著。脑脊液中新型蛋白含量的测定因染升高显著。脑脊液中新型蛋白含量的测定因不受抗生素使用的干扰，为颅内感染病原菌的不受抗生素使用的干扰，为颅内感染病原菌的鉴别诊断提供了新的方向。鉴别诊断提供了新的方向。()()王艳,王谷声,周世俊.血清与脑脊液降钙素原检测在儿童中枢神经系统感染的应用右江医学()：张丽琴.脑脊液免疫球蛋白、乳酸脱氢酶及腺苷脱氨酶检测在成人颅内感染鉴别诊断中的临床意义中华医院感染学杂志()细菌性颅内感染发生时，脑脊液中上述各种蛋白的含量，除胱抑素外21 降钙素原降钙素原 （，）（，）是人类降钙素是人类降钙素()()的前体物质，年由等首次报道其的前体物质，年由等首次报道其可作为细菌感染的早期标志物，年国际脓毒症可作为细菌感染的早期标志物，年国际脓毒症会议把作为脓毒症诊断指标之一。会议把作为脓毒症诊断指标之一。与、计数、中性粒细胞比例不同，在某些自身免与、计数、中性粒细胞比例不同，在某些自身免疫性疾病疫性疾病(如类风湿病如类风湿病)，无明显增高，无明显增高(一般小一般小于于)。降钙素原22等发现若以脑脊液水平等发现若以脑脊液水平 为阈值，其对细菌性为阈值，其对细菌性脑膜炎和病毒性脑膜脑炎的阳性预测值分别为脑膜炎和病毒性脑膜脑炎的阳性预测值分别为和。和。还有学者研究认为血清还有学者研究认为血清 是诊断细菌性脑膜炎是诊断细菌性脑膜炎的指标，而局灶性感染和病毒性脑膜炎患者血的指标，而局灶性感染和病毒性脑膜炎患者血清水平一般不会高于此值。清水平一般不会高于此值。()冯辉斌斌,周青山周青山.促炎性促炎性细胞因子及降胞因子及降钙素原在素原在颅内感染性内感染性质鉴别中的中的应用价用价值.实用用临床医床医药杂志，志，()等发现若以脑脊液水平为阈值，其对细菌性脑膜炎和病毒性脑膜脑23 .:.:.24一项来自于项研究涵盖个患者荟萃研究显示，一项来自于项研究涵盖个患者荟萃研究显示，脑脊液诊断细菌性脑膜炎的敏感度和特性度分脑脊液诊断细菌性脑膜炎的敏感度和特性度分别为和。别为和。研究认为，脑脊液较脑脊液白细胞计数误诊率研究认为，脑脊液较脑脊液白细胞计数误诊率低，较血清敏感性高。低，较血清敏感性高。,.:.():.,.,().一项来自于项研究涵盖个患者荟萃研究显示，脑脊液诊断细菌性脑膜25 反应蛋白反应蛋白 （，），）是人体被细菌感染或者创伤后反应最为敏感的一是人体被细菌感染或者创伤后反应最为敏感的一种急性时相蛋白。可以通过免疫荧光法进行定种急性时相蛋白。可以通过免疫荧光法进行定量检测，它是反映细胞和组织损伤的一种非特量检测，它是反映细胞和组织损伤的一种非特异性指标，正常情况下仅少量存在于人体体液异性指标，正常情况下仅少量存在于人体体液中。中。.，;():.反应蛋白.，;26升高可见于中枢神经系统炎症患者的脑脊液中升高可见于中枢神经系统炎症患者的脑脊液中并在恢复期消失。化脓性或结核性脑膜炎时，并在恢复期消失。化脓性或结核性脑膜炎时，脑脊液、血清水平均明显增高；病毒性脑膜炎脑脊液、血清水平均明显增高；病毒性脑膜炎时升高仅见于脑脊液中，而血清中并不增高。时升高仅见于脑脊液中，而血清中并不增高。：刘春虹刘春虹,杜彦杜彦辉.中枢神中枢神经系系统感染患者感染患者脑脊液脊液、的、的变化及化及临床意床意义.宁夏医学宁夏医学杂志志()升高可见于中枢神经系统炎症患者的脑脊液中并在恢复期消失。化脓27 神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶 （）存在于脑神经元胞质中，脑损伤时，神经细胞崩存在于脑神经元胞质中，脑损伤时，神经细胞崩解，血脑屏障破坏，释放入脑脊液中，使其浓解，血脑屏障破坏，释放入脑脊液中，使其浓度升高，是神经元损害的敏感性标志物。可造度升高，是神经元损害的敏感性标志物。可造成不同程度脑实质损伤，使脑脊液中浓度增高，成不同程度脑实质损伤，使脑脊液中浓度增高，升高可直接反应脑损害的存在。升高可直接反应脑损害的存在。神经元特异性烯醇化酶28病毒性脑炎病毒依靠细胞的胞饮作用穿透神经病毒性脑炎病毒依靠细胞的胞饮作用穿透神经元细胞，造成对神经元的直接侵犯，胞释放，元细胞，造成对神经元的直接侵犯，胞释放，因此病脑组升高最为明显。因此病脑组升高最为明显。结脑患者可导致脑梗死、脑水肿，可加重神经结脑患者可导致脑梗死、脑水肿，可加重神经元损伤。所以升高也比较明显。元损伤。所以升高也比较明显。化脑组的病变主要在脑膜，脑实质损害相对较化脑组的病变主要在脑膜，脑实质损害相对较轻。轻。.;().病毒性脑炎病毒依靠细胞的胞饮作用穿透神经元细胞，造成对神经元29 胆碱酯酶胆碱酯酶 （，）（，）颅内感染时，由于血脑屏障被破坏，血浆中大分颅内感染时，由于血脑屏障被破坏，血浆中大分子可能进入脑脊液中，从而使其含量增加。子可能进入脑脊液中，从而使其含量增加。颅内感染时，脑组织中的可能被释放进入脑脊液颅内感染时，脑组织中的可能被释放进入脑脊液中，从而使其在脑脊液中水平升高。中，从而使其在脑脊液中水平升高。胆碱酯酶30细菌性感染时的上升幅度比病毒性感染更明显，细菌性感染时的上升幅度比病毒性感染更明显，可能是由于细菌性感染对血脑屏障的破坏更明可能是由于细菌性感染对血脑屏障的破坏更明显，血浆中更易透过从而进入脑脊液所致。显，血浆中更易透过从而进入脑脊液所致。不同病毒对脑脊液的活性影响不同，在已知的不同病毒对脑脊液的活性影响不同，在已知的几种病毒中，柯萨奇组病毒几种病毒中，柯萨奇组病毒()()对活性的影响最对活性的影响最大。大。瞿少瞿少刚,张秀萍秀萍.病毒性病毒性脑膜炎、膜炎、脑炎患儿的病原分析及部分生化指炎患儿的病原分析及部分生化指标变化的化的临床意床意义.现代医代医药卫生生()张秀萍秀萍,瞿少瞿少刚,章章晓联,等等.病毒性病毒性脑膜炎、膜炎、脑炎炎脑脊液胆碱脊液胆碱酯酶酶活性与血清病毒抗体的关系活性与血清病毒抗体的关系.华中医中医学学杂志志()细菌性感染时的上升幅度比病毒性感染更明显，可能是由于细菌性感31 白细胞酯酶白细胞酯酶 （，），）是细胞内含有的一种特异性酶类，这种酶类只在是细胞内含有的一种特异性酶类，这种酶类只在中性粒细胞内存在。一些学者将尿液分析的白中性粒细胞内存在。一些学者将尿液分析的白细胞酯酶试纸条用于脑脊液的细菌感染快速诊细胞酯酶试纸条用于脑脊液的细菌感染快速诊断。有资料表明，脑脊液中的检出与细菌培养断。有资料表明，脑脊液中的检出与细菌培养阳性、潘氏试验阳性、白细胞总数和蛋白质升阳性、潘氏试验阳性、白细胞总数和蛋白质升高以及葡萄糖降低之间存在统计学上的相关性。高以及葡萄糖降低之间存在统计学上的相关性。刘仁淳刘仁淳,肖正勤肖正勤,卢森森厅.白白细胞胞酯酶酶检测在在脑脊液脊液细菌感染快速菌感染快速诊断中的断中的应用用.广广东医学医学,():白细胞酯酶刘仁淳,肖正勤,卢森厅.白细胞酯酶检测在脑脊32 基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶 （）是一组结构与功能同源的锌离子依赖性中性蛋白是一组结构与功能同源的锌离子依赖性中性蛋白酶超基因家族，可由体内中性粒细胞，巨噬单酶超基因家族，可由体内中性粒细胞，巨噬单核细胞及血管内皮细胞产生。在中枢神经系统核细胞及血管内皮细胞产生。在中枢神经系统感染性疾病中，参与多种病理生理活动，可协感染性疾病中，参与多种病理生理活动，可协同降解多种细胞外基质（）成分，促进炎症性同降解多种细胞外基质（）成分，促进炎症性浸润的发生，破坏血脑屏障（）。浸润的发生，破坏血脑屏障（）。,.().基质金属蛋白酶,.33在化脓性脑膜炎脑脊液中水平增高表达增强在化脓性脑膜炎脑脊液中水平增高表达增强,脑脊液中的水平与脑炎的严重程度具有很好的脑脊液中的水平与脑炎的严重程度具有很好的正性相关，这对病情的判断及预后有具有重要正性相关，这对病情的判断及预后有具有重要的评估意义。的评估意义。抑制的活性对治疗病毒性脑炎有辅助作用。目抑制的活性对治疗病毒性脑炎有辅助作用。目前认为是最重要的抑制物，但这一新途径由于前认为是最重要的抑制物，但这一新途径由于技术的限制还有待探索。技术的限制还有待探索。,.()在化脓性脑膜炎脑脊液中水平增高表达增强,脑脊液中的水平与脑炎34 腺苷脱氨酶腺苷脱氨酶 （）是腺嘌呤核苷代谢中的重要酶类该酶的活性与是腺嘌呤核苷代谢中的重要酶类该酶的活性与淋巴细胞激活相关特殊病原菌感染如结核杆淋巴细胞激活相关特殊病原菌感染如结核杆菌感染可激活淋巴细胞，引起增高。相关研究菌感染可激活淋巴细胞，引起增高。相关研究发现细菌性颅内感染发生时，脑脊液中升高发现细菌性颅内感染发生时，脑脊液中升高以结核性脑膜炎为多，化脓性脑膜炎升高次之。以结核性脑膜炎为多，化脓性脑膜炎升高次之。,.().腺苷脱氨酶35 微球蛋白微球蛋白 （，）：）：是一种小分子蛋白质，其存在于所有有核细胞是一种小分子蛋白质，其存在于所有有核细胞表面，主要分布于淋巴细胞及巨噬细胞表面。表面，主要分布于淋巴细胞及巨噬细胞表面。正常脑脊液正常脑脊液含量很少，时中枢神经系统内免含量很少，时中枢神经系统内免疫系统被激活，产生大量淋巴细胞及巨噬细胞，疫系统被激活，产生大量淋巴细胞及巨噬细胞，使使合成增加，大量合成增加，大量由细胞表面脱落进入脑由细胞表面脱落进入脑脊液。脊液。微球蛋白36当脑脊液中当脑脊液中含量明显升高时可能存在细菌性含量明显升高时可能存在细菌性脑膜炎或结核性脑膜炎，同时进行结核感染相脑膜炎或结核性脑膜炎，同时进行结核感染相关检验，则关检验，则可以作为细菌性脑膜炎与其他类可以作为细菌性脑膜炎与其他类型脑膜炎鉴别诊断的一项辅助指标。型脑膜炎鉴别诊断的一项辅助指标。水平与细菌性脑膜炎病情的严重程度相关，水平与细菌性脑膜炎病情的严重程度相关，检测脑脊液中检测脑脊液中水平可作为细菌性脑膜炎的诊水平可作为细菌性脑膜炎的诊断指标，并有助于观察疗效与预后。断指标，并有助于观察疗效与预后。蒋荷萍蒋荷萍脑脊液乳酸、脊液乳酸、微球蛋白、反微球蛋白、反应蛋白和蛋白和酶酶活性活性测定在定在脑膜炎中的膜炎中的应用用检验医学，：医学，：当脑脊液中含量明显升高时可能存在细菌性脑膜炎或结核性脑膜炎37 可溶性髓细胞触发受体可溶性髓细胞触发受体 （，），）是主要表达于中性粒细胞及成熟单核细胞、巨噬是主要表达于中性粒细胞及成熟单核细胞、巨噬细胞表面的免疫球蛋白超家族活化受体，具有细胞表面的免疫球蛋白超家族活化受体，具有活化炎性因子并抑制抗炎因子的作用，从而在活化炎性因子并抑制抗炎因子的作用，从而在炎性反应的触发及放大过程中发挥作用。是的炎性反应的触发及放大过程中发挥作用。是的可溶形式，在感染过程中被分泌到体液或血浆可溶形式，在感染过程中被分泌到体液或血浆中。中。可溶性髓细胞触发受体38细菌性脑膜炎时，脑脊液中的明显升高，以为细菌性脑膜炎时，脑脊液中的明显升高，以为界对细菌性脑膜炎诊断的灵敏度达，特异度达。界对细菌性脑膜炎诊断的灵敏度达，特异度达。随着感染的有效控制水平逐渐下降，动态检测随着感染的有效控制水平逐渐下降，动态检测脑脊液中水平可以反映感染控制情况。脑脊液中水平可以反映感染控制情况。郭光郭光辉,蒋巧雅蒋巧雅,柬振柬振华.可溶性髓系可溶性髓系细胞触胞触发受体在受体在细菌性菌性脑膜炎膜炎诊断中的意断中的意义.国国际检验医学医学杂志志 禚志志红,郭果郭果,田培超等田培超等.可溶性髓可溶性髓样细胞触胞触发受体、乳酸在受体、乳酸在细菌性菌性脑膜炎患儿中的膜炎患儿中的变化化.中中华实用儿用儿科科临床床杂志志细菌性脑膜炎时，脑脊液中的明显升高，以为界对细菌性脑膜炎诊断39 蛋白蛋白被认为是神经元、胶质细胞损伤的标志物并且被认为是神经元、胶质细胞损伤的标志物并且参与颅内感染的病理过程，对病情判断和预后参与颅内感染的病理过程，对病情判断和预后评估有重要的临床价值。评估有重要的临床价值。蛋白40研究发现细菌性脑膜炎脑脊液中研究发现细菌性脑膜炎脑脊液中含量明显高含量明显高于病毒性脑膜炎，而且当于病毒性脑膜炎，而且当取值时，其鉴别细取值时，其鉴别细菌性脑膜炎与病毒性脑膜炎的灵敏度可达，特菌性脑膜炎与病毒性脑膜炎的灵敏度可达，特异度达。异度达。证实感染后存在神经元损伤患者的脑脊液证实感染后存在神经元损伤患者的脑脊液 水平明显高于感染后未损伤组及正常对照组。水平明显高于感染后未损伤组及正常对照组。,.,():.研究发现细菌性脑膜炎脑脊液中含量明显高于病毒性脑膜炎，而且41急性期病毒性脑炎组脑脊液、血液急性期病毒性脑炎组脑脊液、血液水平明显水平明显高于化脑组和对照组高于化脑组和对照组,提示病毒侵袭使主要存提示病毒侵袭使主要存在于星形胶质细胞中的在于星形胶质细胞中的大量释放入脑脊液。大量释放入脑脊液。手足口病并病脑患儿脑脊液手足口病并病脑患儿脑脊液水平与疾病严重水平与疾病严重程度密切相关程度密切相关,可用来预测病脑的发生。可用来预测病脑的发生。原芳原芳,乔静静.检测在在婴幼儿中枢神幼儿中枢神经感染感染诊疗中的中的应用用.中国社区中国社区师().费安安兴.手足口病患儿血清及手足口病患儿血清及脑脊液中脊液中 和的表达与病毒性和的表达与病毒性脑炎炎发生的相关性分析生的相关性分析.中国中国妇幼健康幼健康研究研究().急性期病毒性脑炎组脑脊液、血液水平明显高于化脑组和对照组,42 胱抑素胱抑素 (，)为人体所特有为人体所特有,主要由柔脑膜合成主要由柔脑膜合成,由有核细胞分由有核细胞分泌产生泌产生,且无组织特异性且无组织特异性,广泛分布在脑脊液、广泛分布在脑脊液、血液、唾液、尿液中血液、唾液、尿液中,但以脑脊液中含量最高但以脑脊液中含量最高,浓度约为血清浓度的倍左右。的重要功能是抑浓度约为血清浓度的倍左右。的重要功能是抑制内源性半胱氨酸蛋白酶活性制内源性半胱氨酸蛋白酶活性,是目前发现的是目前发现的对组织蛋白酶抑制作用最强的抑制剂。对组织蛋白酶抑制作用最强的抑制剂。武武艳,孙静娜静娜,肖志敏肖志敏,等等.中枢神中枢神经系系统感染胱抑素水平感染胱抑素水平变化的化的临床意床意义.现代中西医代中西医结合合杂志志,().胱抑素武艳,孙静娜,肖志敏,等.中枢神经系统感染胱抑43化脑早期化脑早期,脑组织细胞大量变性、坏死释放半脑组织细胞大量变性、坏死释放半胱氨酸蛋白酶胱氨酸蛋白酶,使脑脊液中的分泌增加以抑制使脑脊液中的分泌增加以抑制半胱氨酸蛋白酶的活性半胱氨酸蛋白酶的活性,而随着病程发展而随着病程发展,细菌细菌对有核细胞的破坏增多对有核细胞的破坏增多,脑脊液中水平可能会脑脊液中水平可能会下降。下降。病毒性脑膜炎为急性非化脓性炎性反应病毒性脑膜炎为急性非化脓性炎性反应,表现表现为脑膜充血、水肿为脑膜充血、水肿,淋巴细胞和纤维蛋白浸润淋巴细胞和纤维蛋白浸润,细胞分泌则较少。细胞分泌则较少。化脑早期,脑组织细胞大量变性、坏死释放半胱氨酸蛋白酶,使脑脊44颅内感染实验室诊断技术新进展课件45细菌性颅内感染脑脊液中细菌性颅内感染脑脊液中仪水平显著升高，仪水平显著升高，当当时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性及特异性均达。及特异性均达。当当 时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性可时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性可达特异性可达。达特异性可达。当当时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性达，时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性达，特异性达。特异性达。,.,.;:.,.;:.细菌性颅内感染脑脊液中仪水平显著升高，当时，鉴别细菌性46在颅脑损伤和致脑损伤等情况下，在颅脑损伤和致脑损伤等情况下，的水平及的水平及活性明显增高活性明显增高(可超过可超过)，可以作为中枢神经，可以作为中枢神经系统感染的早期诊断指标。系统感染的早期诊断指标。脑脊液中可溶性白细胞介素受体脑脊液中可溶性白细胞介素受体()()明显增高明显增高()()，且化脑患者脑脊液中的增高较病毒性脑，且化脑患者脑脊液中的增高较病毒性脑膜炎更显著膜炎更显著()()()。主要由活化的辅助性主要由活化的辅助性()()样细胞、活化的自然样细胞、活化的自然杀伤杀伤()()细胞产生，能增单核巨噬细胞的抗病毒细胞产生，能增单核巨噬细胞的抗病毒能力，能力，在病毒性脑炎患儿脑脊液中显著升高在病毒性脑炎患儿脑脊液中显著升高(可达到可达到)。()李山李山,李灵真李灵真,孔繁元孔繁元.颅内感染患者内感染患者脑脊液和血清中脊液和血清中 、蛋白含量的、蛋白含量的变化及其意化及其意义.宁夏医科大学学宁夏医科大学学报()又称为细胞因子合成抑制因子，在化脓性和病毒性脑膜炎等颅内感染48由结核分枝杆菌活化的由结核分枝杆菌活化的 细胞产生细胞产生,诱导单核诱导单核巨噬细胞的活化巨噬细胞的活化,在结脑的发病过程中起着重在结脑的发病过程中起着重要作用。研究发现结脑患者脑脊液要作用。研究发现结脑患者脑脊液水平明显水平明显高于对照组高于对照组,且随病程进展且随病程进展,脑脊液脑脊液水平逐渐水平逐渐升高升高,提示其对结脑的辅助诊断及预后有一定提示其对结脑的辅助诊断及预后有一定的指导意义。的指导意义。对结脑的诊断敏感性为对结脑的诊断敏感性为,特异性为特异性为 。,.,.(),().由结核分枝杆菌活化的细胞产生,诱导单核巨噬细胞的活化,在49颅内感染实验室诊断技术新进展课件50,.().,.().51颅内感染实验室诊断技术新进展课件52多功能液相芯片分析系统多功能液相芯片分析系统 （技术）（技术）酶联免疫斑点分析仪酶联免疫斑点分析仪超敏多因子电化学发光分析仪超敏多因子电化学发光分析仪 （）多功能液相芯片分析系统53 基本原理基本原理捕获分子捕获分子待测分子待测分子报告分子报告分子技术是在有色微球、激光技术、应用流体学及高速数字信号处理技术技术是在有色微球、激光技术、应用流体学及高速数字信号处理技术的基础上发展起来的一种多功能的液相分析平台的基础上发展起来的一种多功能的液相分析平台荧光编码微球荧光编码微球共价交联（抗体、抗原、核酸）共价交联（抗体、抗原、核酸）进行反应或者杂进行反应或者杂交交激光检测激光检测54基本原理捕获分子待测分子报告分子技术是在有色微球、激光技术液相芯片的应用液相芯片的应用免疫学分析免疫学分析细胞因子检测细胞因子检测受体配体分析受体配体分析酶分析酶分析蛋白质蛋白质相互作用分析蛋白质蛋白质相互作用分析蛋白质相互作用分子蛋白质相互作用分子核酸研究核酸研究检测检测基因表达谱分析基因表达谱分析55液相芯片的应用免疫学分析55 荧光款荧光款()()是近年来在是近年来在 技术上发展起来的最为先进的酶联荧光技术上发展起来的最为先进的酶联荧光免疫斑点分析仪免疫斑点分析仪酶联反应为基础的可见光酶联斑点分析（传统酶联反应为基础的可见光酶联斑点分析（传统 ）和荧）和荧光斑点分析（以为基础的光斑点分析（以为基础的)56荧光款()是近年来在技术上发展起来的最为先进的酶颅内感染实验室诊断技术新进展课件57法源自，又突破传统法法源自，又突破传统法通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出定量的可溶性蛋白总量；而通过显色反应在细胞较得出定量的可溶性蛋白总量；而通过显色反应在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下人工计数斑点或通过分析系统对斑点可直接在显微镜下人工计数斑点或通过分析系统对斑点进行计数进行计数由于是单细胞水平检测，比和有限稀释法等更为灵敏由于是单细胞水平检测，比和有限稀释法等更为灵敏以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子58法源自，又突破传统法58 可用于检测物质的免疫原性、内分泌激素等，其特点是可用于检测物质的免疫原性、内分泌激素等，其特点是快速、微量、准确快速、微量、准确电化学发光技术与传统酶联免疫分析优势对比：电化学发光技术与传统酶联免疫分析优势对比：更高灵敏度与更宽的线性范围更高灵敏度与更宽的线性范围节省样本用量，可实现多重检测节省样本用量，可实现多重检测均一性、重复性高均一性、重复性高样本兼容度高，基质效应小样本兼容度高，基质效应小实验流程简便、快速、多元化实验流程简便、快速、多元化可用于检测物质的免疫原性、内分泌激素等，其特点是快速、微量59对比对比节省样本用量，节省样本用量，可实现多重检测可实现多重检测更高灵敏度与更更高灵敏度与更宽的线性范围宽的线性范围样本兼容度高，样本兼容度高，基质效应小基质效应小实验流程简便、实验流程简便、快速、多元化快速、多元化均一性、均一性、重复性高重复性高信号稳定且不受信号稳定且不受显色顺序影响显色顺序影响对比节省样本用量，可实现多重检测更高灵敏度与更宽的线性范围样60颅内感染实验室诊断技术新进展课件61谢谢！2016年7月颅内感染实验室诊断技术新进展课件62